초록 ▼

항체의약품은 바이오의약품 중 가장 활발히 개발되고 있는 제품으로 보다 정밀하고, 빠른 시간 안에 항체의약품의 역가를 확인할 수 있는 시험법의 개발이 요구되고 있다. 이에 보다 빠르고 정확하게 확인할 수 있는 리포터유전자 시험법을 개발하고자 하였다. 특히, TNFα 신호전달시스템의 전사조절인자를 포함하는 리포터유전자가 영구적으로 도입된 세포주를 사용하여 항 TNFα 항체의약품의 역가를 측정할 수 있는 조건을 탐색하였다. 그 결과 항체의약품에 의해 중화된 TNFα가 포함된 배지에 NF-ĸB-RE-luc2P HEK293 세포를 4 × 1

항체의약품은 바이오의약품 중 가장 활발히 개발되고 있는 제품으로 보다 정밀하고, 빠른 시간 안에 항체의약품의 역가를 확인할 수 있는 시험법의 개발이 요구되고 있다. 이에 보다 빠르고 정확하게 확인할 수 있는 리포터유전자 시험법을 개발하고자 하였다. 특히, TNFα 신호전달시스템의 전사조절인자를 포함하는 리포터유전자가 영구적으로 도입된 세포주를 사용하여 항 TNFα 항체의약품의 역가를 측정할 수 있는 조건을 탐색하였다. 그 결과 항체의약품에 의해 중화된 TNFα가 포함된 배지에 NF-ĸB-RE-luc2P HEK293 세포를 4 × 10⁴cells/well의 농도로 plating 했을 경우 Adalimumab와 Infliximab으로 시험방법 검증 결과, 정확성의 경우 각 농도에서 이론역가 값에 대한 실측값의 범위가 각각 94.5 ~ 101.9% 및 102.7 ~ 114.2%로, 정밀성을 보기위한 3 회 반복 시험 수행 시 그 상대표준편차의 값이 각각 4.8% 및 8.2% 이내로 안정적인 결과를 나타내었다. 그리고 시험에 소요되는 시간은 1.5 ~ 2일로 일반적인 세포사/세포증식 역가시험보다 신속하게 결과를 확인할 수 있었다. 가혹처리 검체를 사용하여 각 시험법간 품질분석결과를 비교해 본 결과, Adalimumab의 경우, 리포터유전자 시험법과 SE-HPLC 시험법 간의 상관도(R²)는 0.9854, Infliximab 두 제품의 경우 각각 0.9892 및 0.9908로 확인되었고, 용해성 고분자불순물이 포함된 Adalimumab의 경우 기존의 세포증식 역가시험과 비교한 상관값인 0.9500 보다 높게 나타났다. 이를 통하여 기존의 역가시험법 보다 빠른 시간안에 품질평가가 가능한 것을 확인하였다. 리포터유전자시험 개발과는 별개로 2016년 미국약전위원회에서 USP에 등재한 항체의약품 일반정보에 따른 시험법에 대해서도 일반적인 적용이 가능한지 실제 시험을 통하여 확인하였다. Adalimumab, Infliximab에 대하여 크기배제크로마토그래피, 모세관전기영동법을 수행하여 시스템적합성에 적합한 결과가 안정적으로 도출됨을 확인하였다. 뿐만아니라,항암 항체의약품에 대해서도 리포터유전자를 활용한 ADCC 역가시험법을 개발하여 실제 품질평가시험법으로서의 사용 가능성을 확인하였다. 이를 통하여, 대부분의 항체의약품의 품질 기준이 자사시험법으로 설정되어 있으나, 일상적인 품질평가시에는 표준화된 시험법 적용이 가능하다는 것을 확인할수 있었다. 본 연구과제를 통하여 새로운 역가시험법을 개발하고, 범용 가능한 시험법의 활용성을 재검증함으로써 항체의약품의 효율적이고 합리적인 품질관리 시험 플랫폼 도입에 대비한 과학적 타당성을 확보하였다.

(출처 : 국문 요약문 2p)

Abstract ▼

It is required to develop a new test method which can confirm the activity of the mAb in a more precise, fast and timely manner. Therefore, we tried to develop a reporter gene assay which can confirm the potency of mAbs more quickly and accurately. In particular, we investigated the conditions under

It is required to develop a new test method which can confirm the activity of the mAb in a more precise, fast and timely manner. Therefore, we tried to develop a reporter gene assay which can confirm the potency of mAbs more quickly and accurately. In particular, we investigated the conditions under which the activity of the anti-TNFα antibody drug can be measured using a cell line which was stably transfected a reporter gene containing upstream transcription factor response elements of the TNFα signaling pathway. As a result, when NF-κB-RE-luc2P HEK293 cells were plated at a concentration of 4× 10⁴ cells/well in a medium of neutralized TNFα. From the validation study, accuracy results of the method about adalimumab and infliximab were 94.5~101.9% and 102.7~114.2%, respectively. And the relative standard deviation value was less than 4.8%(adalimumab) and 8.2%(infliximab) when performing the three experiments for precision test. The time required for the test was 1.5 to 2 days, and it took less time than the normal cell death/proliferation assay. When we compared the reporter gene assay with the cell proliferation assay using degraded mAbs samples, the reporter gene assay are able to detect temperature stress-induced change of mAbs. Moreover it is more sensitive for temperature induced reduction of potency and therefore more suitable for monitering the quality. In addition to the reporter gene assay development, the US Pharmacopeia Committee of the United States confirmed the general information of mAb listed in the USP in 2016. Adalimumab and Infliximab were performed by size exclusion chromatography and capillary electrophoresis. Through this, it is confirmed that the quality test of most antibody drugs is set as the own test method. The standardized test method can be applied in daily quality evaluation. In additions, we have developed the ADCC assay using reporter gene for anti-cancer mAbs(Trastuzumab) and performed validation study to see the specificity of the method against target cell line. Through this research project, we developed a new potency test method and revalidated the applicability of the general-purpose test method, thus securing scientific validity against the introduction of an efficient and reasonable quality control test platform for antibody drugs.

(출처 : SUMMARY 3p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 국문 요약문 ... 2
• Summary ... 3
• 목차 ... 4
• 연구개발과제 연구결과 ... 5
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 5
• 제2장 총괄연구개발과제의 국내･외 연구개발 현황 ... 9
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 13
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 94
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 99
• 제6장 연구개발과제 연구개발 결과 활용계획 ... 104
• 제7장 참고문헌 ... 106
• 제8장 첨부서류 ... 108
• 끝페이지 ... 141