[보고서]곤충유래 당·지질 대사개선 성분분리 및 제제개발

안미영

보고서 정보

주관연구기관

국립농업과학원
National Institute of Agricultural Sciences

연구책임자

안미영

참여연구자

김반지 , 황재삼 , 윤형주 , 김하정

보고서유형

최종보고서

발행국가

대한민국

언어

한국어

발행년월

2019-02

과제시작연도

2018

주관부처

농촌진흥청
Rural Development Administration(RDA)

등록번호

TRKO201900015909

과제고유번호

1395053840

사업명

농업과학기반기술연구(R&D)

DB 구축일자

2019-09-21

키워드

당지질 대사.곤충생약.헤파린유도체.약효.Insect glycosamino glycan.Anti-cancer effect.Anti-diabetic or aging.N-glycan.Microarray.

DOI

https://doi.org/10.23000/TRKO201900015909

표 scheme 1 (노화쥐의 강랑-, 호박벌여왕벌 글라이코사미노글라이칸 투여 모식도)
표 dung beetle- 또는 호박벌여왕벌 glycosaminoglycan 4주간 투여 체중변화
표 dung beetle- 또는 호박벌여왕벌 glycosaminoglycan 4주간 투여 체중변화
표 dung beetle- 또는 호박벌여왕벌 glycosaminoglycan 4주간 투여 사료섭취량
표 dung beetle- 또는 호박벌여왕벌 glycosaminoglycan 4주간 투여 사료섭취량
표 강랑 글라이코사미노글라이칸 한달 투여시 평균 체중 680그램당 체지방량(좌)과 지방세포수
표 강랑 글라이코사미노글라이칸의 혈액 항응고 작용(좌)와 간의 항산화 효소들의 증가(우)
표 혈행 장애 개선효과 구명: 항응고 효능 확인, 혈전용해에 관여하는 섬유소원 관련인자 증가
표 곤충 글라이코사미노글라이칸 기능성 요약도
표 절대장기 중량: Absolute organ weight of male SD (14-month old) rats treated ip with CaG or IQG for 1 month
표 상대 장기 중량: Relative organ weight of male SD (14-month old) rats treated intraperitoneally with CaG or IQG for 1 month
표 강랑- 또는 호박벌여왕벌- 글라이코사미노글라이칸 GAG투여 노화 쥐 혈압변동
표 혈청생화학 지표 변화: Serological findings of male SD (14-month old) rats treated ip with CaG or IQG for 1 month
표 항산화효소의 증가: Antioxidant enzyme activities of dung beetle glycosaminoglycan in aged rat liver
표 노화 쥐의 곤충 글라이코자미노글라이칸 한 달 투여 시 지표 인자 수치변동
표 PCR primer sequences for amplification of genes
표 PCR cycle 수자 (Ct value)
표 노화쥐 간 조직에 발현증가 유전자들 (Upregulated genes differentially expressed in the liver tissue of aged rats)
표 노화 쥐에서 강랑-, 호박벌여왕벌 글라이코사미노글라이칸 한 달 복강 투여 시 발현억제 유전자들 Downregulated genes differentially expressed in the liver tissue of aged rats
표 노화에 따른 산화적 세포손상을 콘드로이친황산 시판약 대비 강랑글라이코자미노글라이칸의 수복효과
표 투여된노화쥐의복부및고환지방산변동 Fatty acid composition in abdominal (left) and epididymidal (right) fat of 14 aged rats treated with C. molossus GAG over an 1-month period
표 GAG투여노화쥐혈청중의세포 DNA손상체: 8-OHdG 발색측정과강랑N-글라이칸단위모식도
표 Scheme 2 당뇨 쥐에 대한 홍랑자, 강랑, 호박벌 여왕벌 글라이코사미노글라이칸 동물실험(16년 5.20~6.20 한 달 복강 투여)
표 정상쥐와시료 처치한당뇨쥐의 한달간체중변동, 도태 전 쥐 사진 투여 후 한 달 도태 전 모습
표 당뇨 쥐에서의 곤충 클라이코사미노글라이칸 한 달 투여 시 체중변화 Effect of CaG on body weight in db mice (M±SE)
표 당뇨 쥐 혈당그림 Blood glucose level of diabetic mice treated with some GAG
표 홍랑자-, 강랑-, 호박벌여왕벌-글라이코사미노글라이칸 한 달 복강 투여 시 혈당변화 Blood glucose level of db mice treated intraperitoneally with Huechys, C. molossus or queen of B. ignitus, glycosaminoglycan over an one month
표 절대 장기중량 Absolute organ weight of male SD (14-month old) rats treated ip with CaG or IQG for one month
표 상대 장기 중량 Relative organ weight in db mice treated with CaG for one month
표 당뇨쥐 홍랑자-, 강랑-, 호박벌여왕벌글라이코자미노글라이칸 처치 간 세포의 톨루이딘-O blue염색된 비만세포수측정
표 지방세포 비율 Adipocyte density (%) of mast cells in toluidine blue stained liver tissues
표 단백 카르보닐 함량 Protein carbonyl levels in (A) liver (left) and (B) blood (right) of DB-homo mice treated with CaG and other substances over 4 weeks
표 혈청 지표 조사Serological findings of db mice treated intraperitoneally with C. molossus or queen of B. ignitus, glycosaminoglycan over one month
표 Antioxidant activities of dung beetle glycosaminoglycan in the liver
표 Antioxidant enzyme activities and carbonyl content of dung beetle glycosaminoglycan in hepatocyte of db (+leptin) mice (GST는 17년 data)
표 Primer sequences for amplication of genes involved in glycogen metabolism and GAPDH internal standard
표 PCR, 당뇨쥐 간조직에서의 유전자 발현 양상
표 Heat map of microarray on db mice liver tissue treated with CaG5, IQG5 or HEG5
표 Upregulated genes differentially expressed in the liver tissue of Homo db mice treated with HeG, CaG5, IQG5 or Metformin
표 Downregulated genes differentially expressed in the liver tissue of Homo db mice treated with HeG, CaG5, IQG5 or Metformin
표 HeG, CaG, IQG의 항당뇨 기전 유추
표 Monosaccharide (neutral sugar) composition: N-glycan 단당류 조성분석-GC-MS
표 Comaparision of VEGF, eNOS and laminin treated with GbG and Chitosan in HMVEC: HMVEC세포에서 귀뚜라미글라이코자미노글라이칸 2일 배양 시 사이토카인 양상 키토산과 비교 (0.2 mg/well당)
표 시판 키릴오일과 연어오일 비교 귀뚜라미 오일의 지방산 함량 Fatty Acid composition of Oil derived from G. bimaculatus compared Krill or Salmon oil
표 당뇨쥐에 홍랑자-, 강랑-, 호박벌여왕벌-글라이코자미노글라이칸 한 달 투여 후 혈청학적 변화
표 홍랑자 N-글라이칸 질량분석이론값과 측정값 비교
표 홍랑자 N-글라이칸의 MALDI-TOF분석 질량분석크로마토그램
표 당뇨쥐 2차 재현성 확인시험: CaG, IQG의 카로보닐함량: 단백손상억제확인
표 강랑-, 귀뚜라미-글라이코사미노글라이칸 한달 당뇨쥐 투여 모식도
표 강랑-, 귀뚜라미-글라이코사미노글라이칸 한달 당뇨쥐 체중변화
표 귀뚜라미, 쇠똥구리(강랑) 글라이코사미노글라이칸 한 달 투여시 당뇨 쥐에서의 체중의 변화
표 귀뚜라미, 쇠똥구리(강랑) 글라이코사미노글라이칸 한 달 투여 시 당뇨 쥐의 혈당치 비교 (좌우 그래프)
표 귀뚜라미, 쇠똥구리(강랑) 글라이코사미노글라이칸 한 달 투여 시 당뇨 쥐에서의 혈당치
표 귀뚜라미, 쇠똥구리(강랑) 글라이코사미노글라이칸 4주간 투여 시 당뇨 쥐에서의 절대 장기중량비교
표 헤테로당뇨(정상) 쥐,당뇨 쥐. 당뇨투여 쥐(3,4,5군) 임상관찰과 복부지방비교
표 항산화제 증강효과를 가지는 홍랑자, 강랑, 호박벌여왕벌 글라이코사미노글라이칸 및 귀뚜라미, 강랑 글라이코사미노글라이칸의 단백손상체(카르보닐량) 억제 효과
표 당뇨 쥐에 강랑, 귀뚜라미의 각 곤충 글라이코자미노글라이칸을 1개월 동안 투여 후 혈중 카탈라아제, GPX, GST의 함량 (mean ± S.E)
표 당뇨 쥐에 강랑-, 귀뚜라미-글라이코자미노글라이칸을 1개월 동안 투여 후 혈중 SOD (mean ± S.E)
표 Diabetic mice protein carbonyl content 측정(2차 당뇨실험): 혈액중성구내 CaG, GbG 투여로 카르보닐함량 감소 확인 표 (mean ± S.D.)
표 당뇨 쥐에 강랑-, 호박벌여왕벌- 글라이코자미노글라이칸을 1개월 동안 투여 후 혈액과 간에서의 카보닐 함량(항당뇨2차 동물실험, 재현성시험)
표 당뇨 쥐에 강랑-, 귀뚜라미-글라이코자미노글라이칸 1개월 동안 투여 후 혈액과 간조직 마쇄액의 프로테인 카보닐 함량(항당뇨 3차, 귀뚜라미GAG 항당뇨 동물 실험)
표 당뇨 쥐의 강랑, 귀뚜라미의 글라이코자미노글라이칸 1개월 투여 후 sera data (mean±S.E.)
표 당뇨 쥐에 강랑-, 귀뚜라미 글라이코사미노글라이칸을 1개월 투여 후 혈중 ALT, AST, BUN과 혈당수치로 본 치료효과 *p<0.05 vs Db-Homo
표 발현 증가 유전자들: Upregulated genes differentially expressed in the liver tissue of Homo db mice treated with CaG5, GbG5, IG5 or Metformin10
표 발현 감소 유전자들: Downregulated genes differentially expressed in the liver tissue of Homo db mice treated with CaG5, GbG5, IG5 or Metformin10
표 당뇨 쥐의 췌장세포모습; 헤마톡실린과 에오신(H&E), 톨루이딘-O 블루염색으로 진하게 염색된 비만세포 (n=10)
표 당뇨 쥐에 있어서 귀뚜라미(G. bimaculatus) glycosaminoglycan 항산화효과 기전 추정 모식도
표 노화 쥐에 서양뒤영벌 여왕벌-, 귀뚜라미 글라이코사미노글라이칸 한 달 투여 모식도 Scheme. Aged rats treated with BTQG or GbG
표 서양뒤영벌 여왕벌-, 귀뚜라미-글라이코사미노글라이칸의 항노화요약
표 체중변화: Body weight change of aged rats treated with BTQG or GbG
표 서양 뒤영벌 여왕벌-, 귀뚜라미 글라이코사미노글라이칸 14개월 노화 쥐에 한 달 투여시 혈청학적 지표 수치변화: Sero-biochemical decrease detection of BUN, creatinine kinase, sero-cholesterol, and free fatty acid level in aged rats treated with bumblebee queen- or cricket-glycosaminoglycan
표 혈청변화: Serological findings of 14-month aged rat treated intraperitoneally with B . terrestris queen or G. bimaculatus, glycosaminoglycan over 1 month
표 서양 뒤영벌 글라이코사미노글라이칸 또는 귀뚜라미 글라이코사미노글라이칸 투여 한 달 후 혈장 내 항응고성 확인
표 D-dimer quantitative analysis of 14-month aged rat serum treated intraperitoneally with B. terrestris queen- or G. bimaculatus-glycosaminoglycan over 1 month. Each value represents mean ± S.D. (N=10)
표 서양뒤영벌 여왕벌 글라이코자미노글라이칸과 귀뚜라미 글라이코자미노글라이칸, 양성대조군으로 글루코자민 황산을 14개월 SD쥐에 한달 투여시 혈청 중의 디-다이머의 양
표 PCR, 노화쥐 간조직에서의 유전자 발현 양상
표 Upregulated genes differentially expressed in the liver tissue of aged rats treated with BTQG5, GbG5 or glucosamine sulfate25
표 Downregulated genes differentially expressed in the liver tissue of aged rats treated with BTQG5, GbG5 or glucosamine sulfate25
표 서양뒤영벌여왕벌- 또는 귀뚜라미- 글라이코사미노글라이칸의 항노화 기전 추정 모식도
표 Hmgr 유전자 발현으로 본 대조군 대비 곤충 글라이칸 투여시 효소활성
표 곤충글라이코사미노글라이칸 한달 투여 후 혈장 헤파린 이당류 조사(SAX-HPLC ECD)
표 곤충글라이코사미노글라이칸 한달 투여후 혈장 heparin disaccharide IV-a 증가확인
표 High performance anion exchange chromatography(HPAEC)-PAD chromatography of 14 month aged rat
표 곤충글라이코사미노글라이칸 한 달 투여 후 혈청 heparin disaccharide변동
표 곤충글라이코사미노글라이칸 한달 투여후 혈청 heparin disaccharide 류 조사
표 High performance Reverse Phase(HP RPC) –chromatography of 14 Mo. Aged rat using Aquasil C18 column
표 ICR마우스 귀뚜라미 글라이코사미노글라이칸의 단회 경구 투여 독성 시험 구성
표 귀뚜라미 글라이코사미노글라이칸의 단회경구투여 후 마우스 체중변화
표 S9 mix 부재시 100개 metaphase 세포당 염색체이상 세포수
표 6시간에서 18시간, 20시간 시료배양에 따른 염색체 이상수
표 S9 mix 존재 시 100개 metaphase 세포 당 염색체이상 세포 수
표 소핵실험 결과
표 체중의 변화(시료투여 후 24시간 경과 시)
표 임상관찰
표 귀뚜라미 글라이코사미노글라이칸의 복귀돌연변이시험 결과
표 에임즈테스트의 판별용 용량반응곡선
표 직접법에서 염기치환형 균주의 용량반응곡선
표 대사활성법에서 염기치환형 균주의 용량반응곡선
표 직접법에서 frameshift형 균주의 용량반응곡선 (TA98)
표 직접법에서 frameshift형 균주의 용량반응곡선 (TA1537)
표 귀뚜라미 글라이코사미노글라이칸 4주 반복투여시 마우스 체중변화
표 귀뚜라미 글라이코사미노글라이칸 4주 반복투여시 사료 섭취량
표 귀뚜라미 글라이코사미노글라이칸 4주 반복투여시 음수 섭취량
표 용량별 뇨검사
표 용량별 혈액학적 관찰
표 용량별 혈청생화학적 관찰
표 대한약전외한약(생약)규격집(생약규) 수재곤충생약 성분 정리 The Korean Herbal pharmacopoeia
표 곤충 글라이코사미노글라이칸 항암 요약 그림
표 강랑-, 호박벌여왕벌-글라이코사미노글라이칸 항암실험 모식도
표 B16F10 유도 후 강랑-, 호박벌-여왕벌글라이코사미노글라이칸 6주 투여 시 쥐 체중
표 피부암 유발 후 강랑-, 호박벌-여왕벌글라이코사미노글라이칸 6주 투여 시 쥐 체중의 변화(표2-1. 체중과 표준오차, 표. 2-2. 체중과 표준편차)
표 주별 피부암 종 쥐 변화
표 강랑과호박벌여왕벌각각의글라이코사미노글라이칸의생존률(좌) 종양크기(우)
표 강랑-, 호박벌여왕벌-, 홍랑자-글라이코사미노글라이칸 항암실험 모식도(40일간 혈액채취, 15주까지 생존률 조사)
표 CaG, IQG, HEG 8주 투여 시 피부암 유발 쥐의 체중 변화
표 강랑, 호박벌여왕벌, 홍랑자 각각의 글라이코사미노글라이칸 투여 8주간 피부암쥐의 체중 간 생존률
표 CaG, IQG, HEG 8주 투여 시 피부암 유발 쥐의 체중 변화
표 Serological findings of melanoma-C57BL/6N male mice treated intraperitoneally with C. molossus or queen of B. ignitus glycosaminoglycan over 40 days (6week)
표 강랑, 호박벌여왕벌, 홍랑자 각각으로부터 분리 정제된 글라이코사미노글라이칸을 투여한 피부암 유발 마우스의 종양 크기와 최종생존율
표 GAG 투여한 피부암쥐의 혈청학적 변화 (ALP, ALT, AST, LDH, Carcinoembryonic antigen (CEA), calcitonin, albumin, C-reactive protein (CRP)
표 Tumor size of various insect GAG group according to time (week)
표 Real time PCR of M1, M2 and M3
표 Heat map of microarray on melanoma tissue of B16F10 melanoma mice treated with CaG5, IQG5 or HEG5
표 Upregulated genes differentially expressed in the melanoma tissue of C57BL/6N mice treated with HeG, CaG5, IQG5
표 Downregulated genes differentially expressed in the melanoma tissue of C57BL/6N mice treated with HeG, CaG5, IQG5
표 CRT, Hsps gene에 대한 CaG5/CON, IQG5/CON, HeG5/CON DNA profile-발현억제
표 11개종곤충글라이코자미노글라이칸 2일간투여로암세포성장저해확인 (XTT assay, 2일배양)
표 Tissue inhibitor of metalloprotese 2 (TIMP-2) of various insect N-glycans in melanoma or HMVEC cells
표 여러 곤충 엔-글라이칸 처치로 조직단백분해효소 저해제 증가양상을 TNF-alpha 처리하여 염증 유발된 HMVEC 내피세포(좌)와 멜라닌종 B16/F10(피부암) 세포(우)에서 관찰 및 CaG 멜라노마 세포성장억제
표 11개 GAG의 adhesion molecule(콜라켄, 파이브로넥틴, 라미닌, 텐나신, 바이브로넥틴) 부착단백질에 대한 접착력(adhesion) assay
표 CaG, IQG, HeG의 항암기전 유추
표 동물실험 모식도: 보체유발 발 부종 유발 후 서양뒤영벌 번데기, 호박벌번데기 알콜 엑기스를 투여 후 혈청조직검사
표 서양 뒤영벌 번데기 알콜 추출물, 호박벌번데기 알콜 추출물 각각 500 mg/kg, 글루코자민황산·콘드로이친황산 350 mg/kg을 2주간 투여 후 발 크기의 변화
표 서양 뒤영벌 번데기 알콜 추출물, 호박벌번데기 알콜 추출물, 글루코자민황산·콘드로이친황산을 2주간 투여 후 보체 유발 관절염 쥐에서 혈청 크레아티닌 키나제(CK), lactic acid dehydrogenase, free fatty acid (유리 지방산) 감소효과(M±SE)
표 보체유발 관절염에 서양 뒤영벌 알콜 추출물의 보체유발 관절염증성 혈청지표의 변화
$Ethyl acetate fraction의 S column/ 흡광도에따른성분 TLC 점적 UV 조사비교$ 표 Ethyl acetate fraction의 S column/ 흡광도에따른성분 TLC 점적 UV 조사비교
표 강랑 용매분배에 의한 에칠아세테이트 분획 모식도
표 강랑 용매분배에 의한 부탄올 분획모식도
표 강랑(C. molossus)의 에칠아세테이트, 부탄올 추가 정제 모식도와 254, 365 nm 자외선 파장별 TLC(박층 크로마토그램)
표 1H, 13C-NMR chromatogram of EA43, B1, B6 and B1 Mass
표 LHB1 시료 함유성분들의 주요 NMR signal 및 부분 구조 추정 I
표 LHB1 시료 함유성분들의 주요 NMR signal 및 부분 구조 추정 II
표 LHB1의 프로톤, 카본 NMR 크로마토그램
표 LHB6 시료 함유성분들의 주요 NMR signal 및 부분 구조 추정 I
표 LHB6 시료 함유성분들의 주요 NMR signal 및 부분 구조 추정 II
표 LHB6 시료 함유성분들의 주요 NMR signal 및 부분 구조 추정 III
표 LHB6의 프로톤, COSY, HSQC, HMBC NMR 크로마토그램
표 LHEA43의 프로톤, COSY, HSQC, HMBC NMR 크로마토그램
표 LHEA43 시료 함유성분들의 주요 NMR signal 및 부분구조 추정I
표 LHEA43 시료 함유성분들의 주요 NMR signal 및 부분구조 추정II
표 Bumblebee extract preparation by 70% ethanol or acetone
표 뒤영벌류 아세톤 추출물 2일 세포 배양 투여 시 비장 세포 생존률
표 뒤영벌 류 아세톤 추출물 2일 세포배양 투여 시 신장 세포 생존률
표 뒤영벌류 아세톤 추출물 2일 세포 배양 투여시 췌장 세포 생존률
표 18 개월된 노화 쥐(SD rat, 체중 869.5 g) 비장, 신장, 췌장 세포를 분리하여 2일간 뒤영벌 아세톤 추출물과 배양시 세포 생존률 조사 (XTT assay 흡광도
표 뒤영벌 류 아세톤 추출물 2일 비장/신장세포배양투여시 인터루킨-10
표 뒤영벌 류 아세톤 추출물 2일 세포 배양 투여 시 비장, 신장, 췌장세포의 IL-10
표 뒤영벌류아세톤추출물 2일세포배양투여시췌장세포IL-10 변동과신비췌장IL-10 변동총합

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