[보고서]바이오평가 기반구축 및 지원사업

정순천

보고서 정보

주관연구기관

한국생명공학연구원
Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology

연구책임자

정순천

참여연구자

김창기 , 박정호 , 이주석 , 백인순 , 박지영 , 김도영 , 김지홍 , 이광희 , 김명신 , 최원호 , 이재우 , 김혜진 , 임해강 , 엄민식 , 배동녘 , 임주현 , 김민지 , 박진희 , 강종순 , 오수진 , 윤지은 , 이창우 , 이명열 , 강무림 , 권주희 , 김소나 , 박기환 , 신정휴 , 양정욱 , 윤여대 , 이미연 , 이현주 , 최병조 , 공계영 , 조명원

보고서유형

1단계보고서

발행국가

대한민국

언어

한국어

발행년월

2018-11

과제시작연도

2018

주관부처

과학기술정보통신부
Ministry of Science and ICT

등록번호

TRKO201900017118

과제고유번호

1711080337

사업명

한국생명공학연구원연구운영비지원(주요사업비)

DB 구축일자

2019-11-09

키워드

유전자변현생물체.위해성 평가.신약/바이오소재.유효성 평가.약동력학/약물대사 평가.Living modified organism (LMO).Risk assessment.New drug/biomaterial.efficacy evaluation.PK/ADME evaluation.

DOI

https://doi.org/10.23000/TRKO201900017118

표 황금, 검정올, 광교에서 deletion 확인 primer 정보
표 콩에서 lec-s 대량 screening을 위한 primer 정보
표 PCR 조건
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 1 hr, 14~23: W.T stool DNA 1 hr, 24~28: non-treatment stool DNA 1 hr, 29: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 3 hr, 14~23: W.T stool DNA 3 hr, 24~28: non-treatment stool DNA 3 hr, 29: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 6 hr, 14~23: W.T stool DNA 6 hr, 24~28: non-treatment stool DNA 6 hr, 29: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 9 hr, 14~23: W.T stool DNA 9 hr, 24~28: non-treatment stool DNA 9 hr, 29: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 12 hr, 14~23: W.T stool DNA 12 hr, 24~28: non-treatment stool DNA 12 hr, 29: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 1 Day, 14~23: W.T stool DNA 1 Day, 24~28: non-treatment stool DNA 1 Day, 29: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 3 Day, 14~23: W.T stool DNA 3 Day, 24~28: non-treatment stool DNA 3 Day, 29: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 7 Day, 14~23: W.T stool DNA 7 Day, 24~28: non-treatment stool DNA 7 Day, 29: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 14 Day, 14~23: W.T stool DNA 14 Day, 24~28: non-treatment stool DNA 14 Day, 29: Marker
표 분변 total DNA 에 대한 GM미생물 특이적 PCR 결과
표 배양 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 1 hr, 14~23: W.T stool DNA 1 hr, 24~28: non-treatment stool DNA 1 hr, 29: Marker
표 배양 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 3 hr, 14~23: W.T stool DNA 3 hr, 24~28: non-treatment stool DNA 3 hr, 29: Marker
표 배양 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 6 hr, 14~23: W.T stool DNA 6 hr, 24~28: non-treatment stool DNA 6 hr, 29: Marker
표 배양 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 9 hr, 14~23: W.T stool DNA 9 hr, 24~28: non-treatment stool DNA 9 hr, 29: Marker
표 배양 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 12 hr, 14~23: W.T stool DNA 12 hr, 24~28: non-treatment stool DNA 12 hr, 29: Marker
표 배양 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 1 day, 14~23: W.T stool DNA 1 day, 24~28: non-treatment stool DNA 1 day, 29: Marker
표 배양 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 3 day, 14~23: W.T stool DNA 3 day, 24~28: non-treatment stool DNA 3 day, 29: Marker
표 배양 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 7 day, 14~23: W.T stool DNA 7 day, 24~28: non-treatment stool DNA 7 day, 29: Marker
표 배양 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4~13: GM stool DNA 14 day, 14~23: W.T stool DNA 14 day, 24~28: non-treatment stool DNA 14 day, 29: Marker
표 배양세균 집락에 대한 GM미생물 특이적 PCR 결과
표 PCR에 사용한 primer
표 최종제품 PCR하여 fdpe와 npt2 유전자 확인. 가 : fdpe PCR, 나 : npt2 PCR; M : 100bp plus Maker(bioneer), P : Positive control, N : Negative control, 1 Lane : 최종제품-1, 2 Lane : 최종제품-2, 3 Lane : 최종제품-3, 4 Lane : 최종제품-4, 5 Lane :최종제품-5
표 분석 결과
표 NPTII 정제 단계 별 SDS-PAGE 분석
표 신약후보물질의 유효성평가 및 최적화를 위한 시험계 구성도
표 년까지 확보된 시험계의 분류
표 LB region iPCR용 primers
표 PEP-MOV-M6 iPCR하여 전기영동한 사진
표 unknown sequence를 BLAST한 결과
표 unknown에서 제작한 confirm PCR primer
표 confirm primer를 이용하여 pcr한 전기영동사진
표 CaCSp primer 정보
표 CS고추 vector map
표 A. CaCSp PCR 결과는 형질전환체 4-1, 12-1과 wild type에서 같은 크기(490bp)의 증폭산물을 보였다. 1. CS고추 4-1, 2. CS고추 12-1, 3. Wild type. B. Biotin-14-dCTP를 사용한 probe PCR에서는 약간 큰 사이즈의 band를 확인하였다
표 A. CaCSp를 probe로 사용한 고추 southern blot 결과 AflII와 XbaI을 처리한 형질전환체 4-1과 12-1의 DNA에서 2개이상의 band를 보여 추가적인 CS 유전자의 삽입을 확인하였고, wild type의 DNA에서는 한 개의 band를 확인하였다. 1 : CS고추 4-1, 2 : CS고추 12-1, 3 : wild type. B. 35S promoter를 probe로 사용한 고추 southern blot 결과 형질전환체 4-1과 12-1의 DNA에서 2개의 band를 확인하였다
표 수박공대 cassette 구조 모식도
표 도입유전자 온전성 확인을 위한 primer list
표 도입유전자 온전성 확인 결과
표 말단 온전성 확인을 위한 primer list
표 수박공대 말단 온정성 primer 모식도
표 말단 온전성 확인 결과
표 Tandem PCR을 위한 primer list
표 Tandem PCR 결과
표 pPZP 배추 cassette 구조 모식도
표 도입유전자 온전성 확인을 위한 primer list
표 도입유전자 온정성 확인
표 말단 온전성 확인을 위한 primer list
표 배추 말단 온전성 primer 위치 모식도
표 말단 온정성 확인 결과
표 Tandem PCR을 위한 primer list
표 Tandem PCR 결과
표 15년 포플러 정식 도면
표 LM-담배의 말단 온전성 결과
표 LM-담배의 삽입형태 분석 결과
표 1300 SW03 vector모식도
표 1300 GP55 vector 모식도
표 담배 line별 개수 및 정보
표 NOSter primer list
표 NOSter primer를 이용하여 PCR한 후, 전기 영동한 결과
표 도입유전자 cassette 염기서열 분석용 primer List
표 LM-담배(1-6,3-1,5-2,9-9,18-10)의 vector 모식도
표 LM-담배(16-1)의 vector 모식도
표 LM-담배 I-PCR primer
표 RB region iPCR 조건
표 그림 9 LM-담배 1-6line을 이용하여 전기영동한 사진
표 C2의 unknown sequence를 이용하여 BLAST한 결과
표 F2의 unknown sequence를 이용하여 BLAST한 결과
표 unknown sequence에서 제작한 confirm PCR primer
표 confirm primer를 이용하여 PCR한 전기영동 사진
표 v32 line list
표 v32 형질전환 확인을 위한 primer list
표 pBGWFS7 vector에 들어있는 bar 유전자 PCR 결과
표 v32 삽입 유전자인 R4-in marker PCR 결과
표 v32에 들어있는 R4del5 전기영동 결과
표 v32-3, 4 line에서 전기영동 결과
표 v32-3, 4 line에서 R4AT 자동전기영동 결과
표 도입유전자 Cassette의 삽입 위치 확인을 위한 primer list
표 LB 염기서열의 unknown sequence의 NCBI Database에 대한 BLAST search 결과
표 LB region 염기서열의 unknown sequence의 NCBI Database에 대한 BLAST 결과
표 L12를 iPCR하여 전기영동한 결과
표 LM 고추 L12의 추가 sequencing에 사용된 primer 정보
표 LM고추 L12 LB region confirm PCR 결과
표 unknown sequence에서 제작한 confirm PCR primer
표 LB 염기서열의 unknown sequence의 NCBI Database에 대한 BLAST search 결과
표 L12 LB region 염기서열의 unknown sequence의 NCBI Database에 대한 BLAST 결과
표 pPZP vector 구조 모식도
표 도입유전자 Cassette의 삽입 위치 확인을 위한 primer list
표 BT 58번의 IPCR 결과
표 LM상추 line별 cloning vector
표 pCAM2300 vector 모식도
표 pPZP-T35S-Bar vector 모식도
표 Southern blot에 사용된 probe정보
표 수박공대 iPCR primer list
표 P35S probe를 이용하여 LM포플러를 southern blotting한 결과
표 Hygromycin probe를 이용하여 LM포플러를 southern blotting한 결과
표 1차 피부자극 시험. ①과 ②는 서로 가깝게 위치하게 하고 머리쪽에 가까운 반면, 부위 ③은 꼬리 쪽으로 위치하게 한다 (□, Injection sites)
표 1차 감작 시험물질 구성
표 기니피그 측 복부에 폐쇄첩포하여 감작야기
표 피부자극반응 평가표
표 1차 피부감작 폐쇄첩포 제거 후 24시간 결과. a : 음성 대조군, b : 양성 대조군, c : 형광누에고치, d : 형광누에가루
표 1차 피부감작 결과
표 감작야기 폐치 제거 후 24 시간 결과. a : 음성 대조군, b : 양성 대조군, c : 형광 누에고치, d : 형광누에가루
표 감작야기 후 기니피그 피부 확인 결과
표 실험에 사용된 프라이머
표 유전자 클로닝 후 DNA restriction enzyme을 이용하여 DNA electrophoresis를 통한 AtBG1 발현 플라스미드 제작 확인
표 혹은 C-terminal 부분에 6-histidine tag이 융합된 H6AtBG1 및 AtBG1H6 발현을 위한 pET26-H6AtBG1 및 pET26-AtBG1H6의 plasmid map
표 재조합 대장균에서 AtBG1의 발현 결과. 좌; H6AtBG1, 우; AtBG1H6
$Ni-affinity chromatography를 통한 H6AtBG1 정제 및 SDS-PAGE 분석. S, sample; FT, flow-through; E1 – E5, elution fractions$ 표 Ni-affinity chromatography를 통한 H6AtBG1 정제 및 SDS-PAGE 분석. S, sample; FT, flow-through; E1 – E5, elution fractions
표 AP 배지에서 유가식 배양을 통한 E. coli STAR(DE3)△ slyD/pET26-H6AtBG1의 세포성장(좌) 및 SDS-PAGE를 통한 K6UbPDGFB의 발현 분석
표 SDS-PAGE를 통한 H6AtBG1의 발현 분석 *우측 SDS-PAGE gel 사진의 화살표는 발현된 H6AtBG1의 band 위치를 나타낸다
표 농도에 따른 H6AtBG1의 가용성 변화 *0, 1, 2, 3, 4 M urea에서 파쇄된 H6AtBG1 발현 대장균을 파쇄 후 12,000 rpm에서 20분간의 원심분리를 통해서 불용성(insoluble) 및 가용성(soluble) 분획으로 나누고 SDS-PAGE 통해 H6AtBG1의 순도를 확인하였다
표 유가식 발효를 통해 대량 발현된 H6AtBG1 내포체 정제 및 SDS-PAGE 분석 *우측 SDS-PAGE gel 사진의 화살표는 발현된 H6AtBG1의 band 위치를 나타낸다
표 본 실험에 사용된 프라이머
표 본 실험에 사용한 프라이머 set의 부위. 누에의 피브로인 H 유전자 (좌), 형질전환 누에의 피브로인 프로모터 (우)
표 PCR 증폭 결과(좌) 및 TA 클로닝 확인 (우)
표 CyMate를 이용한 메틸레이션 패턴 분석
표 실험에 사용된 프라이머
표 플라스미드 내 SrfC도입 확인 후 콜로니 형성
표 플라스미드 내 SrfC도입 확인 (N: NdeI, X: XhoI)
표 SrfC의 단백질 발현 분석 결과
표 AllergenOnline에서의 검색화면
표 adhE_Uk1 단백질의 알레르겐과의 상동성 검사 결과 (80mer). adhE_Uk1의 FASTA 검색결과
표 adhE_Uk1 단백질의 알레르겐과의 상동성 검사 결과 (8mer). adhE_Uk1의 pattern match 검색결과
표 Blastp 검색 결과 중 50% 이상의 similarity와 30% 이상의 identity를 동시에 만족하는 서열 13가지
표 이벤트명
표 Cry1Ac 도입 양배추에서 Cry1Ac 단백질의 Western blotting 검정 결과
표 분석 대상 항영양소 및 D-Psicose 3-epimerase와의 상동성 유무
표 PnTx2-6 단백질의 인공위액 소화시험 결과. 검정화살표; pepsin, 투명화살표; PnTx2-6, P; pepsin만 처리 Pn; PnTx2-6만 처리
표 PnTx2-6 단백질의 인공장액 소화시험 결과. 검정화살표: pancreatin, 투명화살표: PnTx2-6, P; pancreatin만 처리 Pn; PnTx2-6만 처리
표 단백질의 열 안정성 시험 결과
표 NPT1 단백질의 아미노산 서열
표 AllergenOnline에서의 NPT1 아미노산 서열 상동성 검색 화면
표 NPT1 아미노산 서열의 FASTA 검색 결과
표 NPT1 아미노산 서열의 pattern match 검색 결과
표 SY 단백질의 아미노산 서열
표 인공위액 소화시험에서 SY단백질의 SDS-PAGE (좌) 및 Western blot detection (우) P와 검정화살표: pepsin, SY와 투명화살표: SY
표 인공장액 소화시험에서 SY 단백질의 SDS-PAGE (좌) 및 Western blot detection (우) Pa와 검정화살표: pancreatin, SY와 투명화살표: SY
표 열안정성 시험에서 SY 단백질의 SDS-PAGE (좌) 및 Western blot detection (우) 투명화살표: SY
표 전체 실험 일정 (적색 화살표: 투여, 검정색 막대: 시료채취)
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM stool DNA 1 hr, 15~24: W.T stool DNA 1 hr, 25~29: non-treatment stool DNA 1 hr, 30: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM stool DNA 3 hr, 15~24: W.T stool DNA 3 hr, 25~29: non-treatment stool DNA 3 hr, 30: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM stool DNA 6 hr, 15~24: W.T stool DNA 6 hr, 25~29: non-treatment stool DNA 6 hr, 30: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM stool DNA 9 hr, 15~24: W.T stool DNA 9 hr, 25~29: non-treatment stool DNA 9 hr, 30: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM stool DNA 12 hr, 15~24: W.T stool DNA 12 hr, 25~29: non-treatment stool DNA 12 hr, 30: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM stool DNA 1 day, 15~24: W.T stool DNA 1 day, 25~29: non-treatment stool DNA 1 day, 30: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM stool DNA 3 day, 15~24: W.T stool DNA 3 day, 25~29: non-treatment stool DNA 3 day, 30: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM stool DNA 6 day, 15~24: W.T stool DNA 6 day, 25~29: non-treatment stool DNA 6 day, 30: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM stool DNA 9 day, 15~24: W.T stool DNA 9 day, 25~29: non-treatment stool DNA 9 day, 30: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM stool DNA 1 hr, 15~24: W.T stool DNA 1 hr, 25~29: non-treatment stool DNA 1 hr, 30: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM stool DNA 15 day, 15~24: W.T stool DNA 15 day, 25~29: non-treatment stool DNA 15 day, 30: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM stool DNA 18 day, 15~24: W.T stool DNA 18 day, 25~29: non-treatment stool DNA 18 day, 30: Marker
표 분변 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM stool DNA 21 day, 15~24: W.T stool DNA 21 day, 25~29: non-treatment stool DNA 21 day, 30: Marker
표 분변 total DNA 에 대한 균주 특이적 PCR 결과
표 배양된 세균 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM 세균 1 hr, 15~24: W.T 세균 1 hr, 25~29: non-treatment 세균 1 hr, 30: Marker
표 배양된 세균 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM 세균 3 hr, 15~24: W.T 세균 3 hr, 25~29: non-treatment 세균 3 hr, 30: Marker
표 배양된 세균 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM세균 DNA 6 hr, 15~24: W.T 세균 6 hr, 25~29: non-treatment 세균 6 hr, 30: Marker
표 배양된 세균 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM 세균 9 hr, 15~24: W.T 세균 9 hr, 25~29: non-treatment 세균 9 hr, 30: Marker
표 배양된 세균 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM 세균 12 hr, 15~24: W.T 세균 12 hr, 25~29: non-treatment 세균 12 hr, 30: Marker
표 배양된 세균 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM 세균 1 day, 15~24: W.T 세균 1 day, 25~29: non-treatment 세균 1 day, 30: Marker
표 배양된 세균 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM 세균 3 day, 15~24: W.T 세균 3 day, 25~29: non-treatment 세균 3 day, 30: Marker
표 배양된 세균 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM 세균 6 day, 15~24: W.T 세균 6 day, 25~29: non-treatment 세균 6 day, 30: Marker
표 배양된 세균 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM 세균 9 day, 15~24: W.T 세균 9 day, 25~29: non-treatment 세균 9 day, 30: Marker.
표 배양된 세균 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM 세균 12 day, 15~24: W.T 세균 12 day, 25~29: non-treatment 세균 12 day, 30: Marker
표 배양된 세균 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM 세균 15 day, 15~24: W.T 세균 15 day, 25~29: non-treatment 세균 15 day, 30: Marker
표 배양된 세균 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM 세균 18 day, 15~24: W.T 세균 18 day, 25~29: non-treatment 세균 18 day, 30: Marker
표 배양된 세균 샘플 PCR. 1: Marker, 2: Positive control, 3: Negative control, 4: DW 5~14: GM 세균 21 day, 15~24: W.T 세균 21 day, 25~29: non-treatment 세균 21 day, 30: Marker
표 배양된 세균에 대한 균주 특이적 PCR 결과

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