초록 ▼

□ 연구개요
대장암 환자들의 사망률이 증가하는 시점에 이를 극복하기 위한 전 세계적으로 다양한 노력이 이루어지고 있으나, 아직도 가장 필수적인 요소 및 새로운 기전이 요구되고 있음. 최근 각광받고 있는 다양한 Micro RNA는 여러 target gene의 발현을 동시에 조절하기 때문에 대장암처럼 여러 원인으로 발병되는 질환에 적절하나 특이성과 안전성이라는 한계가 나타남. 따라서 본 연구는 대장암에서 유전적으로 안정하며 non coding RNA 중에서도 다양한 기능을 하는 piRNA를 발굴 후 이에 대한 Molecular B

□ 연구개요
대장암 환자들의 사망률이 증가하는 시점에 이를 극복하기 위한 전 세계적으로 다양한 노력이 이루어지고 있으나, 아직도 가장 필수적인 요소 및 새로운 기전이 요구되고 있음. 최근 각광받고 있는 다양한 Micro RNA는 여러 target gene의 발현을 동시에 조절하기 때문에 대장암처럼 여러 원인으로 발병되는 질환에 적절하나 특이성과 안전성이라는 한계가 나타남. 따라서 본 연구는 대장암에서 유전적으로 안정하며 non coding RNA 중에서도 다양한 기능을 하는 piRNA를 발굴 후 이에 대한 Molecular Beacon (MB)을 제작하여 실시간으로 대장암 치료 진단을 할수 있는 진단 기법과 치료 방법을 연구함으로서, 궁극적으로 대장암 환자의 생존율을 향상 시키고자 함.

□ 연구 목표대비 연구결과
▪ Affymetrix기반의 Next Generation Sequencing (NGS)을 이용하여 분류된 대장 암세포의 Genomic DNA를 분리하여 non coding small RNA 분석를 분석함.
▪ 분류된 대장암에 따른 non coding small RNA sequence에서 Rfam(http://rfam.sanger.ac.uk/), miRBase (http://www.mirbase.org/) 및 piRNA Bank (http://pirnabank.ibab.ac.in/), 등 다양한 database를 이용하여 특이성 있고 안정적인 piRNA를 확보.
▪ 확보된 piRNA sequence에서 대장암에 특이적인 piRNA를 선정하기 위하여 R-language (R version 3.2.0)를 이용하여 분석.
▪ 선정된 piRNA에 대한 Target gene 후보들을 분석하기 위하여 7개 이상의 database (Rfam, miRBase ,piRNABank, microRNA.org, 등)를 파이프라인으로 연결하여 분석.
▪ 선정된 piR-000753 piRNA에 대한 억제 및 분자 진단 가능한 molecular beacon 을 제작하여 저해 정도 및 안정성을 확인.
▪ 제작된 piR-000753-MB를 인체 조건이 모두 제외된 CHO cell에서 진단 영상 정도를 확인.
▪ piR-000753을 농도별로 처리했을 때 진단 영상 조건과 같이 500 pmol piR-000753에서 EEF1D가 억제되는 것을 EEF1D 유전자의 3'UTR을 가지고 확인.
▪ piR-00753는 DLD1-C10에서는 단독으로 처리했을 때 5-FU의 민감도가 좋아지는 것으로 나타났고, SNU175-B12는 동시 처리했을 때 민감도가 좋아지는 것을 확인함.

□ 연구개발결과의 중요성
▪ 내성 세포주인 DLD1-C10과 SNU175-B12에서 내성에 관여하는 piRNA database을 확보함.
▪ 현재 piRNA database도 미미하며 내성 암세포주에 대한 database는 전무하다. 그러므로 본 연구 결과는 이러한 database에 매우 중요한 역할을 할것으로 사료됨.
▪ 다양한 database을 이용한 piR-000753과 관계되는 다양한 유전자 발현 및 연관성을 확인.
▪ 기존 microRNA에 대한 표적 단백질에 대한 database는 구축되어 있으나 아직 PIWI-RNA에 대한 표적 단백질에 대한 부분은 미미함. 그렇기 때문에 이번에 확립한 PIWI-RNA와 표적 유전자와 의 관계 분석은 매우 중요함.
▪ 내성 대장암 세포주의 진단과 치료가 가능한 piR-000753-MB을 제작.
▪ 임상에서 사용 가능 하도록 진단 영상을 위한 최적 조건 확립.
▪ piR-000753의 극접 메카니즘을 확인하기 위해 EEF1D의 명확한 관계를 확인.
▪ 내성 대장암 세포주의 세포 사멸도를 확인하여 그 효능 확인.

(출처 : 연구결과 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 1) 연구의 필요성 ... 4
• 2) 최종 연구 목표 ... 4
• 3) 연구 목표 및 내용 ... 4
• 2. 연구수행내용 및 연구결과 ... 5
• 1) 선정된 piRNA에 대한 모든 target gene 후보들을 분석 ... 5
• 2) piRNA의 target gene의 발현 양상은 대장암 세포 확인 ... 5
• 3) piRNA에 대한 Molecular Beacon 시스템 (piRNA- MB)을 제작 ... 6
• 4) piR-000753-MB를 이용한 진단 영상을 위한 최적 조건 확립 ... 6
• 5) RFP 3'UTR plasmid를 이용한 piRNA와 target gene의 연관 관계 확인 ... 7
• 6) piR-00753-MB와 항암 화학 치료제를 이용한 세포 사멸 정도 확인 ... 8
• 3. 연구개발결과의 중요성 ... 8
• 1) 선정된 piRNA에 대한 모든 target gene 후보들을 분석 ... 8
• 2) piRNA의 target gene의 발현 양상은 대장암 세포 확인 ... 8
• 3) piRNA에 대한 Molecular Beacon 시스템 (piRNA- MB)을 제작 ... 8
• 4. 참고문헌 ... 9
• 5. 연구성과 ... 11
• 끝페이지 ... 11