초록 ▼

□ 연구의 목적 및 내용
◯ B 세포의 특이 항원인 CD19 타깃 항체 scFv를 가진 CAR 수용체를 발현하도록 조작된 T세포는 높은 특이성을 가지고 스스로 CD19-양성 암세포를 인식하여 활성화된 다음 효율적으로 암세포의 사멸을 유도함.
◯ 그러나 CART-19은 만성 림프구성 백혈병 (B-CLL)이나 림프종 환자에 대해서는 상대적으로 낮은 반응률을 보이는데 그 주된 원인 중 하나로 암세포에 존재하는 면역관문 리간드에 의해 카티세포의 활성이 억제되는 것으로 알려져 있음.
◯ 따라서 본 연구의 목표는 카티세포의 추

□ 연구의 목적 및 내용
◯ B 세포의 특이 항원인 CD19 타깃 항체 scFv를 가진 CAR 수용체를 발현하도록 조작된 T세포는 높은 특이성을 가지고 스스로 CD19-양성 암세포를 인식하여 활성화된 다음 효율적으로 암세포의 사멸을 유도함.
◯ 그러나 CART-19은 만성 림프구성 백혈병 (B-CLL)이나 림프종 환자에 대해서는 상대적으로 낮은 반응률을 보이는데 그 주된 원인 중 하나로 암세포에 존재하는 면역관문 리간드에 의해 카티세포의 활성이 억제되는 것으로 알려져 있음.
◯ 따라서 본 연구의 목표는 카티세포의 추가적 유전자 조작을 통하여 면역관문 수용체의 발현을 억제함으로써 보다 향상된 항암효능을 갖는 CD19-표적 카티치료제를 개발하는 것임.

□ 연구개발성과
◯ CAR 수용체와 shRNA를 동시에 발현하는 two-in-one 벡터 시스템을 구축하여 면역관문 수용체인 PD-1의 발현을 억제하는 CAR-T 세포를 성공적으로 제작하였음.
◯ CD19 항원 특이적인 FMC63 scFv를 발현하는 CAR-T를 모델 시스템으로 사용하여 two-in-one CAR-T가 기존의 CAR-T에 비해 PDL-1 과발현 암세포에 대해 우수한 항암 효능을 가짐을 in vitro와 in vivo 마우스 모델을 통해 검증함.
◯ 추가적으로, PD-1의 발현이 억제된 two-in-one CAR-T 세포가 마우스 생체 내에서 초기 활성화 과정이 지연되는 현상을 확인함으로써, 잠재적으로 CD19 CAR-T 치료제의 가장 심각한 독성인 cytokine release syndrome과 같은 부작용이 낮을 수 있음을 확인하였음.
◯ 3세대 렌티바이러스의 scale up, 정제, 및 주요 시험 분석법을 확립하였음.
◯ 인간 phage display 라이브러리와 세포기반 panning 방법을 수립하여, 새로운 인간 서열로 이루어진 항 CD19 scFv 서열을 9종 발굴하였음.

□ 연구개발성과의 활용계획 (기대효과)
◯ ShRNA의 효과는 CAR-T 세포에만 국한되므로 시스테믹한 독성을 낮춤.
◯ Immune checkpoint blocking 항체와 CAR-T를 사용하는 co-therapy에 비해 항체 치료제 비용 절감 효과.
◯ 향후 신약개발지원센터 뿐만 아니라 산업체 및 임상의들과의 협업을 통해 CAR-T 전임상 연구, 임상 수준의 바이러스 생산, CAR-T 세포 생산, 임상시험 디자인 등 전반적 CAR-T 치료제 연구 및 개발 workflow를 확립. 그 과정을 통해 관련 경험의 축적과 동시에 인프라를 구축함으로써 국내 CAR-T 세포치료제 연구 및 개발을 세계적 수준으로 끌어올리기 위한 기반을 다질 수 있을 것으로 기대됨

(출처 : 요약문 4p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제 출 문 ... 2
• 보고서 요약서 ... 3
• 요약문 ... 4
• 목차 ... 5
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 6
• 2. 연구수행내용 및 성과 ... 7
• 2-1. CD19 표적 Two-in-one CAR-T 세포의 디자인 및 제작 ... 7
• 2-2. CD19 표적 Two-in-one CAR-T 세포의 in vitro 기능 분석 ... 8
• 2-2. CD19 표적 Two-in-one CAR-T 세포의 in vivo 기능 분석 ... 10
• 2-4. 렌티바이러스벡터 대량생산을 위한 scale-up protocol 수립 ... 14
• 2-5. 렌티바이러스벡터의 순수분리를 위한 정제공정 수립 ... 18
• 2-6. 렌티바이러스벡터의 순수분리를 위한 정제공정 최적화 ... 22
• 2-7 세포기반 항체 발굴 기술을 이용한 신규 CD19 항체 발굴 ... 31
• 2-8. 신규 CD-19 항체를 탑재한 렌티바이러스 벡터 제작 및 생산 ... 35
• 3. 목표 달성도 및 관련 분야 기여도 ... 36
• 3-1. 목표 ... 36
• 3-2. 목표 달성여부 ... 36
• 3-3. 목표 미달성 시 원인(사유) 및 차후대책(후속연구의 필요성 등) ... 37
• 4. 연구개발성과의 활용 계획 등 ... 38
• 붙임. 참고문헌 ... 38
• 끝페이지 ... 39