초록 ▼

연구개요
1. 연구의 최종 목표
간암줄기세포가 자연살해세포에 의한 세포 사멸에 저항성을 보이는 기전 규명 및 이를 극복하는 새로운 간암 치료법의 이론적 근거 확립
2. 연구의 개요
본 연구를 통해서 간암 줄기세포 표지자인 EpCAM을 발현하는 간세포암에서 CEACAM1과의 상관관계를 밝히고자 노력한 결과, EpCAM의 발현과 CEACAM1의 발현이 양의 상관관계가 있음을 확인하였으며, 이를 통해, EpCAM의 발현이 높은 간암줄기세포(Huh7-EpCAMhigh)에서 CEACAM1의 발현을 억제하면 NK세포에 의

연구개요
1. 연구의 최종 목표
간암줄기세포가 자연살해세포에 의한 세포 사멸에 저항성을 보이는 기전 규명 및 이를 극복하는 새로운 간암 치료법의 이론적 근거 확립
2. 연구의 개요
본 연구를 통해서 간암 줄기세포 표지자인 EpCAM을 발현하는 간세포암에서 CEACAM1과의 상관관계를 밝히고자 노력한 결과, EpCAM의 발현과 CEACAM1의 발현이 양의 상관관계가 있음을 확인하였으며, 이를 통해, EpCAM의 발현이 높은 간암줄기세포(Huh7-EpCAMhigh)에서 CEACAM1의 발현을 억제하면 NK세포에 의한 세포독성을 증가시켜 간암줄기세포를 효과적으로 사멸시키는 것을 확인함

연구 목표대비 연구결과
1. EpCAM+환자에서 간암 재발율 확인 및 간암 표지자 발현 확인
1-1 : 간암 재발 확인: EpCAM 발현 환자(EpCAM+ 환자)에서 EpCAM 미발현 환자(EpCAM- 환자)보다 수술 후 간암 재발이 높은 것을 확인하였다.
1-2 : 간암 표지자 발현 확인:AFP 및 Ki67의 수치가 EpCAM- 환자군에 비해 EpCAM+ 환자군에서 유의미하게 높음을 확인하였다.
2. EpCAM 발현에 따른 NK 세포에 대한 저항성 확인:
2-1 : EpCAM 발현 세포 분리: 간암 줄기세포에서 EpCAM 발현이 높은 경우 NK세포의 세포독성에 저항성이 높음을 확인하였다
2-2 : EpCAM 발현 간암 세포에서 NK 세포와 결합 가능한 리간드 확인: NK 세포 리간드 중에서 CEACAM1의 발현이 Huh7-EpCAM^high세포 및 Huh7-EpCAM^low세포에 따라 확연하게 차이가 나는 것을 확인하였다.
3. EpCAM 및 CEACAM1의 상관관계 확인
3-1 : Huh7 세포에서 EpCAM 및 CEACAM1 발현정도 확인: Huh7-EpCAM^low세포에 비해 Huh7-EpCAM^high세포에서 CEACAM1 발현이 높은 것을 확인하였다.
3-2 : 간암 환자 혈청에서 EpCAM 및 CEACAM1 발현정도 확인: EpCAM- 환자군에 비해 EpCAM+ 환자군에서 CEACAM1 단백질 발현 수준이 유의미하게 높은 것을 확인하였다.
3-3 : 간암 조직에서 EpCAM 및 CEACAM1 발현정도 확인: EpCAM의 발현과 CEACAM1의 발현이 양성적 상관관계를 나타냄을 확인하였다.
4. CEACAM1 발현 억제에 따른 NK세포 활성 증가
4-1 : CEACAM1의 발현을 넉다운(Knockdown)시킨 Huh7 세포주 제작
4-2 : CEACAM1 발현 억제에 따른 NK세포의 세포 독성 확인:shRNA를 이용하여 Huh7 세포에서 CEACAM1을 넉다운(Knockdown) 시킨 결과, 대조군에 비해 CEACAM1 발현을 억제시킨 경우 NK세포의 세포독성이 증가한 것을 확인하였다.
5. 항-CEACAM1 항체를 이용한 NK 세포의 세포독성증가 확인
5-1 : 항-CEACAM1 항체를 처리한 NK 세포 공동배양에 따른 세포 독성 확인: Huh7 세포 및 항-CEACAM1 항체를 처리한 NK 세포를 공동배양 하였을 때 NK 세포의 세포독성이 증가하여 Huh7 세포 사멸율이 높진 것을 확인하였다.
5-2 : CEACAM1 발현 억제제 및 항-CEACAM1 항체를 처리한 NK세포 병용 투여: CEACAM1 억제제 및 항-CEACAM1 항체를 처리한 NK 세포를 동시에 처리하면 NK 세포에 의한 세포 독성이 증가하여 간암 세포의 사멸율이 현저하게 증가하므로, 간암 치료 효능이 극대화 될 수 있다.
6. In vivo xenograft model을 이용한 항-pan CEACAM1 항체의 항종양 효과 및 자연살해세포 효능 증강확인: Hepa1-6을 주입한 마우스에 항-pan CEACAM1 항체를 주입하면 control에 비하여 종양의 크기가 줄어드는 것을 확인할 수 있다. 이 때 종양에 침윤하는 NK세포의 활성도를 비교하면 항-pan CEACAM1 항체를 투여한 군에서 자연살해세포 활성화의 marker인 CD69의 발현이 증가된 것을 확인할 수 있다

연구개발결과의 중요성
▷ 기술적 측면
· 진행성 간암의 전신적인 1차 항암요법으로 승인된 Sorafenib와 Lenvatinib은 반응율이 좋지 않음. 본 연구결과를 이용, 추후 표적항암제 내성 간세포암의 치료시 이론적 근거를 마련할 수 있으며, 임상시험의 효율을 증대할 수 있는 연구 계획을 수립하는 데 도움을 줄 수 있음.
· 또한, 발굴한 신규 분자를 타깃으로 하는 병합 요법을 시행한다면 추가적인 항종양 면역 효과를 증대시킬 수 있음.
· 간암 뿐만 아니라 다른 여러 암조직에서 암세포뿐만 아니라 정상세포까지 동시에 사멸시키는 기존의 항암치료의 단점을 보완해 줄 것으로 사료됨.
· 추후 임상진입을 통하여 국제 시장에서 면역항암분야 정밀 의료를 선도할 수 있음.

▷ 경제적 측면
· 표적항암제 치료 후 진행한 간세포암에 대한 면역치료법으로 간암의 사회적 비용 부담을 감소시킬 수 있음.
· 추후 tytosine kinase inhibitor (TKI)에 내성을 보이는 다른 고형암 및 혈액암에도 적용할 수 있음.
· 면역세포 및 활성도 조절분자를 이용한 면역치료의 효과를 증대시킬 수 있으면 이를 통한 특허와 논문 등의 다수의 지적재산권 확보하리라 기대됨.
· 면역치료효과를 증대시킨 조절분자 조절 방법 개발의 활용 가능성과 더 나아가 국가위상 제고 및 국내외 산업체에 관련 기술을 이전하여 기술료 수임 얻으리라 기대됨.

(출처 : 요약문 3p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 4
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 5
• 2. 연구수행내용 및 연구결과 ... 9
• 1. EpCAM+환자에서 간암 재발율 확인 및 간암 표지자 발현 확인 ... 9
• 2. EpCAM 발현에 따른 NK 세포에 대한 저항성 확인 ... 10
• 3. EpCAM 및 CEACAM1의 상관관계 확인 ... 11
• 4. CEACAM1 발현 억제에 따른 NK세포 활성 증가 ... 12
• 5. 항-CEACAM1 항체를 이용한 NK 세포의 세포독성증가 확인 ... 13
• 6. In vivo xenograft model을 이용한 항-pan CEACAM1 항체의 항종양 효과 및 자연살해세포 효능 증강 확인 ... 14
• 3. 연구개발결과의 중요성 ... 15
• 4. 참고문헌 ... 15
• 5. 연구성과 ... 16
• 끝페이지 ... 16