초록 ▼

1. 연구의 최종 목표
소아 급성백혈병에서 zoledronate와 IL-2를 이용한 감마델타(γδ) T 세포 증식과 감마델타 T 세포의 항백혈병 효과 규명
γδ T 세포 증식저해신호 검출 및 신호차단을 통한 γδ T 세포 치료 효과 증진법 개발
소아 급성백혈병에서 알파베타(αβ) T 세포제거 반일치이식과 감마델타(γδ) T 세포를 이용한 암면역치료법 확립

2. 연구목적 및 내용
γδ T 세포의 증식법 및 세포독성에 대한 실험실적 평가법 확립
αβ T 세포제거 반일치 조혈모세포이식 및 zoled

1. 연구의 최종 목표
소아 급성백혈병에서 zoledronate와 IL-2를 이용한 감마델타(γδ) T 세포 증식과 감마델타 T 세포의 항백혈병 효과 규명
γδ T 세포 증식저해신호 검출 및 신호차단을 통한 γδ T 세포 치료 효과 증진법 개발
소아 급성백혈병에서 알파베타(αβ) T 세포제거 반일치이식과 감마델타(γδ) T 세포를 이용한 암면역치료법 확립

2. 연구목적 및 내용
γδ T 세포의 증식법 및 세포독성에 대한 실험실적 평가법 확립
αβ T 세포제거 반일치 조혈모세포이식 및 zoledronate와 IL-2를 이용한 암 면역치료법의 임상연구 수행
임상연구 환자의 γδ T 세포에서 항백혈병/항종양 효과 분석 및 반일치 조혈모세포이식 후 면역재구성 분석
소아 급성백혈병에서 억제성 수용체와 리간드의 발현 양상 분석 및 억제성 경로의 차단을 통한 면역치료 효과 분석
난치성 소아백혈병 및 소아암에서 반일치 조혈모세포이식과 γδ T 세포를 이용한 암면역치료법 확립

3. 연구방법
백혈병 세포주와 환자 검체를 이용한 백혈병 세포 배양
Zoledroante와 IL-2를 이용한 γδ T 세포 증식법 확립 및 세포살상능력 평가: CD107a assay, CFSE 및 Propidium iodide/Annexin V (PI/AV) 염색법을 활용
환자의 백혈병 세포를 배양하여 공여자 γδ T 세포의 세포살상능력 측정
급성 백혈병 세포주 및 환자 검체에서 유세포 분석법을 이용한 억제성 수용체와 리간드의 발현 평가
억제성 수용체와 리간드에 대한 차단 항체를 이용하여, 억제성 신호 차단이 γδ T 세포의 증식에 미치는 영향을 평가
임상연구를 위한 IRB 승인 및 αβ T 세포제거 반일치 조혈모세포이식 수행
αβ T 세포제거 반일치 조혈모세포이식 후 유세포 분석법을 이용하여 γδ T 세포를 비롯한 면역세포의 재구성 과정 분석
반일치 조혈모세포이식 후 zoledronate와 IL-2를 이용한 생체 내 γδ T 세포증식 및 항종양 효과 분석
임상자료 및 실험자료 석을 통한 αβ T 세포제거 반일치 조혈모세포이식에서 γδ T 세포를 이용한 임상치료법 확립

4. 연구결과
γδ T 세포의 증식 및 세포독성 평가법을 확립하였고, 이를 바탕으로 실제 백혈병 환자와 건강 기증자의 검체를 이용한 실험을 통해 γδ T 세포의 항백혈병 효과를 확인하였음.
γδ T 세포의 증식 및 세포독성이 zoledronate와 IL-2를 이용하여 증폭될 수 있음을 확인하여, 세포면역치료의 임상적용을 이용한 실험실적 근거 제시
급성백혈병 환자의 T 세포와 백혈병 모세포에서 특정 억제성 수용체와 리간드의 발현이 유의하게 증가함을 확인하였으며, 급성 백혈병에서 면역관문 억제제 사용의 근거를 제시
억제성 수용체인 PD-1과 BTLA에 대한 차단 항체를 이용하여 γδ T 세포증식 및 기능에 미치는 효과를 분석하여 제시함
αβ T 세포제거 반일치 조혈모세포이식 및 zoledronate와 IL-2 투여를 이용한 세포면역치료 프로토콜을 이용한 예비 임상연구를 통해, 실험실적으로 확인한 zoledronate와 IL-2의 면역증강 효과가 생체 내에서도 재현될 수 있음을 확인
반일치 조혈모세포이식 후 zoledronate와 IL-2를 이용한 감마델타 T 세포 면역치료의 예비 임상연구를 시행하여, 조혈모세포이식 전후의 γδ T 세포의 재구성 과정에 zoledronate와 IL-2가 미치는 영향을 분석하여 제시함: 조혈모세포이식 후 γδ T 세포가 급격히 증가하고 이후 시간이 지남에 따라 점차 감소하였으나, IL-2 투여 후 일시적인 상승을 보이는 경향이 있었으며, 이로 인해 이식 후 6개월간은 γδ T 세포가 전반적으로 높게 유지되는 경향을 보였음.

5. 기대효과
본 연구는 γδ T 세포를 이용한 반일치 이식의 실험실적 근거를 마련하고, 예비 임상연구를 토대로 γδ T 세포의 항백혈병 및 항종양 효과를 제시한 것임. 본 치료법은 zoledronate와 IL-2를 이용하여 항백혈병 효과를 증대시킬 수 있는 새로운 방식의 면역치료법으로서, 새로운 암 면역치료법(cancer immunotherapy)의 개발로 이어질 수 있는 근거를 제시하여 급성백혈병 특히, 난치성 고위험군 환자와 난치성 소아암의 완치율 향상에 기여할 것으로 기대됨
또한, 본 연구에서 시행된 반일치 조혈모세포이식은 추후 새로운 세포면역치료를 위한 platform으로 사용되어 새로운 면역치료법으로 확장될 수 있을 것으로 기대됨.

(출처 : 요약문 4p)

Abstract ▼

1. Aims
Evaluation of gamma-delta (γδ) T cell proliferation and anti-leukemic effects of gamma-delta T cells using zoledronate and IL-2 in childhood acute leukemia Identification of inhibitory pathway of γδ T cell and enhancement of γδ T cell function through blocking the inhibitory pathway
Es

1. Aims
Evaluation of gamma-delta (γδ) T cell proliferation and anti-leukemic effects of gamma-delta T cells using zoledronate and IL-2 in childhood acute leukemia Identification of inhibitory pathway of γδ T cell and enhancement of γδ T cell function through blocking the inhibitory pathway
Establishment of αβ T-cell-depleted haploidentical hematopoietic cell transplantation (HCT) and post-transplant γδ T-cell immunotherapy using zoledronate and IL-2

2. Purpose and contents
Establishment of method of γδ T cell proliferation and evaluation of cytotoxicity Pilot study of αβ T-cell-depleted haploidentical HCT　and clinical trial of cancer immunotherapy using zoledronate and IL-2
Analysis of anti-leukemia / anti-tumor effect of γδ T cells in patients enrolled in a clinical study and analysis of immune reconstitution after transplantation
Analysis of the expression pattern of inhibitory receptors and ligands in childhood acute leukemia and the effect of immunotherapy by blocking the inhibitory pathway Establishment of cancer immunotherapy using haploidentical HCT and γδ T cells in refractory childhood leukemia and solid tumors

3. Methods
Culture using leukemia cell line and sample from patients with leukemia
Establishment of γδ T cell proliferation method using zoledroante and IL-2 and evaluation of cytotoxicity: CD107a assay, Propidium iodide/Annexin V staining Experiment for proliferation of γδ T cells using zoledronate and IL-2
Measurement of cytotoxic function of donor γδ T cells using samples from patient with leukemia
Assessment of expression of inhibitory receptors and ligands by flow cytometry in acute leukemia cell lines and patient samples
Assessment of the effect of block of inhibitory pathway using blocking antibodies on the proliferation of γδ T cells.
IRB approval for a clinical study of αβ T-cell-depleted haplodientical HCT and post-transplant immunotherapy
Analysis of immune reconstitution including γδ T cells after αβ T-cell-depleted haplodientical cell transplantation
Analysis of in vivo γδ T cell proliferation and antitumor effect using zoledronate and IL-2 after haploidentical HCT

4. Results
We established the method of the proliferation and evaluation of cytotoxicity of γδ T cells and showed the anti-leukemia effect of γδ T cells by using samples from patients with leukemia and healthy volunteers.
We showed that the proliferation and cytotoxicity of γδ T cells can be amplified by using zoledronate and IL-2, and provided experimental evidence for clinical application of cellular immunotherapy.
We showed that the expression of specific inhibitory receptors and ligand in T cells and leukemic blasts of patients with acute leukemia were significantly increased and suggested the experimental evidence for the use of immune checkpoint inhibitors in acute leukemia
A pilot clinical study of cellular immunotherapy for αβ T-cell-depleted haploidentical HCT and post-transplant immunotherapy using zoledronate and IL-2 suggested that potentiation of γδ T cells by zoledronate and IL-2 can be reproduced in vivo.
A pilot clinical study showed the effects of zoledronate and IL-2 on the reconstitution of γδ T cells after haploidentical HCT.

5. Benefit
The present study established the experimental method for γδ T cell immunotherapy, and suggested anti-leukemia and anti-tumor effect of γδ T cells based on a pilot clinical study. This treatment strategy is a novel immunotherapy which can potentiate anti-leukemia effect of γδ T cells using zoledronate and IL-2, and can be expected to contribute the improvement of treatment outcome of patients with refractory cancer.
αβ T-cell-depleted haploidentical HCT in this study are expected to be used as a platform for novel cellular immunotherapy

(출처 : Project Summery 6p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제 출 문 ... 2
• 목차 ... 3
• 요약문 ... 4
• Project Summery ... 6
• 1. 연구과제의 최종 연구개발 목표 ... 8
• 가. 연구개발의 개요 ... 8
• 나. 국내ㆍ외 연구동향 ... 8
• 다. 연구개발의 필요성 및 중요성 ... 10
• 라. 연구개발의 최종목표 ... 15
• 2. 연구과제의 연구대상 및 방법 ... 17
• 3. 연구과제의 연구개발결과 ... 22
• 4. 연구과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 54
• 가. 활용방안 ... 54
• 나. 기대효과 ... 54
• 다. 결론 ... 55
• 5. 연구과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 56
• 6. 연구과제의 활용계획 ... 66
• 7. 참고문헌 ... 67
• 8. 첨부서류 ... 68
• 끝페이지 ... 79