초록 ▼

5. 최종 연구결과 요약
□ 제1세부과제명: 바이러스의 소독제 효력시험의 개선
1) 국가별(미국, 영국, 유럽) 소독제 효력시험지침 조사
○ 국가별 test organism별 기준, 조건 및 시험법을 조사
○ 국가별(미국, 영국, 유럽)바이러스 소독제 효력시험을 비교
• 계열별 소독제 1품목을 선정하여 stock virus의 역가가 10^8.5 EID₅₀/ml 인 저병원성 조류 인플루엔자 바이러스(H9N2)를 사용하여 영국(DEFRA) 과 유럽연합(CEN) 시험법에 따

5. 최종 연구결과 요약
□ 제1세부과제명: 바이러스의 소독제 효력시험의 개선
1) 국가별(미국, 영국, 유럽) 소독제 효력시험지침 조사
○ 국가별 test organism별 기준, 조건 및 시험법을 조사
○ 국가별(미국, 영국, 유럽)바이러스 소독제 효력시험을 비교
• 계열별 소독제 1품목을 선정하여 stock virus의 역가가 10^8.5 EID₅₀/ml 인 저병원성 조류 인플루엔자 바이러스(H9N2)를 사용하여 영국(DEFRA) 과 유럽연합(CEN) 시험법에 따라서 시험을 수행(단, 유럽연합의 경우는 세포배양법이나 종란접종법으로 결과를 확인함)
• 소독제효력시험지침(검역본부 고시 제2018-16호)에 따른 시험결과와 비교 결과, 소독제 4품목 모두 소독제에 의한 종란독성은 없었고 병원체 대조군과 비교하여 10⁴ 배 이상의 감소를 보였음
• 병원체 대조군 역가는 영국(DEFRA) 시험법에서는 10^5.8 EID₅₀/ml로 우리나라(APQA) 시험법 (10^6.6 EID₅₀/ml) 과 비교했을 때 낮게 나타났고 유럽연합(CEN) 시험법에서는 10^7.4 EID₅₀/ml로 다소 높게 나타났음
• 우리나라(APQA)와 영국(DEFRA) 시험법에서는 바이러스와 소독제의 비율을 1 : 1로 stock 바이러스를 희석하여 사용하는 한편, 유럽연합(CEN) 시험법은 유기물, 바이러스와 소독제의 비율을 1 : 1 : 8로 바이러스를 희석하지 않고 stock 바이러스를 사용함
• 영국(DEFRA) 시험법은 소독제와 바이러스 반응물의 200배 중화용액을 사용하므로 중화용액을 너무 많이 쓰게 되는 것이 단점임

2) 바이러스의 소독제 효력시험에 대한 세부사항 설정
○ (소독제 시험용액 준비) 소독제 희석조건, 중화반응후 접종액 희석방법 추가 제안
○ (소독제 반응) 바이러스액과 희석액의 양에 대한 예시문 수정제안
○ (대조군의 검정 등) 세포(종란)독성이 있을 경우 바이러스 함유량 계산에 반영 제안
○ (유효배수 평가) 유효배수의 평가 조항 수정 제안
○ “소독제 유효희석배수 결정시험 설계 시 처리구” 유기물조건의 병원체 대조군 설정 제안

3) AI 바이러스의 소독제 효력시험법 비교분석
○ AI 바이러스에 대한 소독제 효력시험법(세포배양법)을 확립을 위한 시험조건을 설정하고 소독제 34목에 대해 효력시험을 수행하여 종란접종법과 비교분석
• 저병원성 AI 바이러스의 세포배양을 위해서 WHO에서 추천하는 MDCK cell line을 사용하였고 CPE 발현을 위해서는 배지에 1㎍/ml의 TPCK trpsin을 첨가하였음
• LPAI virus A/chicken/Korea/MS96/1996(H9N2)를 사용하여 MDCK cell에서의 역가를 알아 본 결과 바이러스 역가는 10^7.0 TCID₅₀/ml 였음
• 소독제 12품목에 대하여 효력시험 수행시 바이러스액과 유기물희석액의 비율을 1:19와 1:9으로 하였을 때, 병원체 대조군 역가는 각각 10^5.1 TCID₅₀/ml 와 10^5.5 TCID₅₀/ml 였으며 12품목 모두 세포배양법과 종란접종법 모두 병원체 대조군과 비교하여 4 log reduction 이상의 감소를 보였으나 MDCK 세포에서의 바이러스 reduction 감소치가 종란접종법에 비하여 1~2 log 가 낮았음. 하지만, 바이러스액과 유기물희석액의 비율을 1:4로 하였을 때, 소독제 효력시험결과 병 원체 대조군의 역가는 ml 당 10^5.8 ~ 10^6.3 TCID₅₀/ml이었음
따라서, 바이러스액과 유기물희석액의 비율을 1 : 4 가 적절하다고 판단되어 추가 시험을 진행하였음
• 소독제 34품목(산화제 14, 산성제 10, 알데하이드제 5, 계면활성제 5)에 대해서 3회 반복하여 효력시험결과, 18품목(산화제 4, 산성제 6, 알데하이드제 4, 계면활성제 4)이 희석배수 10^-1에서 독성이 나타났고 이때 독성이 있는 희석배수는 제외하고 다음 희석배수에서부터 TCID₅₀//ml 값을 계산하였음
• 최종적으로, 소독제 34품목 중 3품목은 세포배양법과 종란접종법 모두 병원체 대조군과 비교하여 4 log reduction 미만의 감소를 보였고 나머지 31품목은 종란접종법에서 모두 병원체 대조군과 비교하여 4 log reduction 이상의 감소를 보였으나 5품목이 세포배양법에서는 4 log reduction 미만의 감소를 나타내어 세포배양법과 종란접종법 결과사이에서 85.3 %의 일치율을 보였음

□ 제2 세부 과제명 : 세균의 소독제 효력시험의 개선
1) 국가별(미국, 영국, 유럽) 소독제 효력시험지침 조사
○ 국가별 test organism별 기준, 조건 및 시험법을 조사
○ 국가별(미국, 영국, 유럽)세균 소독제 효력시험을 비교
• 계열별 소독제 1품목을 선정하여 세균의 농도가 1x10⁸ ~ 4.1 x 10⁸ cfu/mL인 Salmonella enterica serovar Typhimurium (ATCC 14028)를 사용하여 영국(DEFRA) 과 유럽연합(CEN) 시험법에 따라서 시험을 수행
• 소독제효력시험지침(검역본부 고시 제2018-16호)에 따른 시험결과와 비교한 결과, 소독제 3품목은 우리나라(APQA), 영국(DEFRA) 과 유럽연합(CEN) 시험결과 판정 기준에 모두 적합하였으나 우리나라(APQA)와 영국(DEFRA) 시험법에서 5개 튜브 중 2개와 4개의 세균 증식을 보인 소독제 1품목은 유럽연합(CEN) 시험법에서 10⁵ 배 미만의 균의 감소를 보였음
• 우리나라(APQA)시험법은 9 ml 중화용액에 1 ml의 반응물을 첨가하고 중화반응 후 100㎕를 5개의 튜브에 각각 옮기는 반면 Defra standard는 중화용액 10 ml에 100㎕의 반응물을 첨가하고 중화반응 후 1 ml를 10 ml의 5개 튜브에 각각 옮기는 것이 다름
⟹ 두가지 방법 모두 균의 사멸정도를 정량적으로 알 수 없음
• 유럽연합(CEN) 시험법에 따른 Test suspension의 균수(N)은 8.4(기준 : 8.17 ~ 8.70), 반응물의 균수(N₀)은 7.4(기준 : 7.17 ~ 7.70), validation suspension(N_vo)은 67(기준 ：30 ~ 160), validation suspension(A), experimental conditions control(B)는 각각 68, 59.5(기준 : ≥ 0.5 x N_vo) 이고 neutralizer control(C)는 소독제인 산화제, 산성제, 알데하이드제, 계면활성제 각각 45.5, 38, 36.5, 40.5(기준 : ≥ 0.5 x N_vo)으로 모두 기준을 충족하였음
• 소독제 성분에 따라 중화용액을 선택해야 하지만, 본 연구에서 사용한 Dey/Engley neutralizing broth는 대표적인 중화용액으로 사용 가능한 결과를 확인함
• 유럽연합(CEN) 시험법은 소독제의 세균 사멸작용을 평가하기 위한 정량적인 suspension 방법으로 test suspension을 희석하여 validation suspension(3.0 x 10² cfu/ml ~ 1.6 x 10³ cfu/ml)을 준비하고 contr이과 method validation을 위한 실험과정 후 결과를 정해진 계산식에 대입해야 하는 등 우리나라(APQA)와 영국(DEFRA) 시험법에 비해서 실험과정이 복잡하고 숙련도를 요함

2) 세균의 소독제 효력시험에 대한 세부사항 설정
○ 중화반응후 접종할 영양배지의 용량 설정, 유기물희석액 조제방법(수정), 세균증식여부의 판정(수정) 제안(정책건의 채택 '19.1.22)

3) 세균의 소독제 효력시험법 비교분석
○ 유럽연합(CEN) 시험법(EN 1656)을 참고하여 세균의 소독제 효력시험법(정량시험법)을 확립하고 계열별 소독제 10품목(산화제 3, 산성제 3, 알데하이드제 2, 계면활성제 2)을 선정하여 세균의 농도가 1.5 x10⁸ ~3.8x 10⁸ CFU/ml의 Salmonella Typhimurium (ATCC 14028)를 사용하여 효력시험을 2회 수행하여 소독제효력시험지침(검역본부 고시 제2018-16호)에 따른 시험결과와 비교분석
• 10°C 30분의 반응조건으로 소독제 효력시험 결과, 우리나라(APQA)의 시험방법에서 5개의 시험 관중 1개 이하의 균의 증식이 있는 소독제 6품목은 세균이 ml 당 10⁵ CFU 이상(≥ 5 log reduction)의 감소를 나타내었으나, 5개 시험관 중 5개 시험관에서 균의 증식이 나타난 소독제 4품목 중 2품목은 5 log reduction 미만의 균의 감소를 나타내었고 나머지 2품목은 5 log reduction이상의 균의 감소를 나타내었음
• 4°C 30분의 반응조건으로 소독제 효력시험 결과, 우리나라(APQA)의 시험방법에서 5개의 시험관 중 1개 이하의 균의 증식이 있는 소독제 6품목은 세균이 ml 당 10⁵ CFU 이상(≥ 5 log reduction)의 감소를 나타내었으나, 5개 시험관 중 5개 시험관에서 균의 증식이 나타난 소독제 4품목 모두 5 log reduction 미만의 균의 감소를 나타내었음
국 10°C 30분의 반응조건에서 효력적합인 소독제 2품목이 4°C 30분의 반응조건에서 효력미흡으로 나타나 온도가 소독제의 효력에 영향을 미치는 것으로 사료됨
• 최종적으로, Salmonella Typhimurium (ATCC 14028)를 사용하여 4°C 30분의 반응조건으로 소독제 효력시험 결과,
유럽연합(CEN) 시험법과 우리나라(APQA)시험법 적부 결과가 일치하므로, 향후 확립된 정량검사법을 육안적 판별이 어려운 시료나 검사 부적합시료에 대한 확인검사용으로 활용가능

(출처 : 5. 최종 연구결과 요약 2p)

Abstract ▼

Research for improvement of guideline for efficacy of disinfectants for veterinary use ( Improvement of guideline for virucidal efficacy of disinfectants )
The disinfectant efficacy test for AI virus was established, and 34 items of disinfectant for each series(Oxidizing agent 14, Acid 10, Aldehy

Research for improvement of guideline for efficacy of disinfectants for veterinary use ( Improvement of guideline for virucidal efficacy of disinfectants )
The disinfectant efficacy test for AI virus was established, and 34 items of disinfectant for each series(Oxidizing agent 14, Acid 10, Aldehyde 5, surfactant 5) were selected and 3 times repeated efficacy test result showed 85.3% agreement between the cell culture method and the inoculation method.

(출처 : Abstract 30p)

Research for improvement of guideline for efficacy of disinfectants for veterinary use ( Improvement of guideline for bactericidal efficacy of disinfectants )
After establishing the bactericidal efficacy test method by referring to the European Union test method(EN 1656) and selecting 10 items of disinfectants for each series(Oxidizing agent 3，Acid 3，Aldehyde 2, Surfactant 2)and performing the test twice with a reaction condition of 30 minutes at 4 degrees Celsius, the results of pass or not judgments of the EU test method and Korean test method(APQA) were consistent.

(출처 : Abstract 30p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• I. 연구배경 및 목표 ... 5
• 1. 연구배경 ... 5
• 2. 연구최종목표 ... 6
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 6
• II. 연구방법 및 수행전략 ... 7
• 1. 재 료 ... 7
• 2. 연구전략 및 방법 ... 7
• III. 연구결과 ... 7
• 1. 제1세부과제명 : 바이러스의 소독제 효력시험의 개선 ... 7
• 2. 제2세부과제명 : 세균의 소독제 효력시험의 개선 ... 14
• IV. 연구결과요약 ... 25
• 1. 제1세부과제명 : 바이러스의 소독제 효력시험의 개선 ... 25
• 2. 제2세부과제명 : 세균의 소독제 효력시험의 개선 ... 26
• V. 고 찰 ... 27
• 1. 제1세부과제명 : 바이러스의 소독제 효력시험의 개선 ... 27
• 2. 제2세부과제명 : 세균의 소독제 효력시험의 개선 ... 28
• VI. 참고자료 ... 29
• VII. 영문초록 ... 30
• 끝페이지 ... 30