초록 ▼

4. 당해년도 연구결과 요약

o GFP 발현 재조합 바이러스(ERAGS-GFP)에서 RT-PCR과 염기서열 분석을 통해 삽입된 GFP 유전자 확인
o 전자현미경을 통해 ERA와 ERAGS 바이러스와 같이 ERAGS-GFP 바이러스에서도 탄환모양의 바이러스 입자를 확인
o ERAGS-GFP 바이러스 배양 세포를 형광현미경에서 직접관찰한 것, 아세톤 고정만 한 것과 형광염색을 한 것을 비교한 결과, 아세톤 고정만 한 세포에서 형광이 약해지거나 거의 사라지는 것이 관찰됨
o ERAGS-GFP 바이러스를 광견병

4. 당해년도 연구결과 요약

o GFP 발현 재조합 바이러스(ERAGS-GFP)에서 RT-PCR과 염기서열 분석을 통해 삽입된 GFP 유전자 확인
o 전자현미경을 통해 ERA와 ERAGS 바이러스와 같이 ERAGS-GFP 바이러스에서도 탄환모양의 바이러스 입자를 확인
o ERAGS-GFP 바이러스 배양 세포를 형광현미경에서 직접관찰한 것, 아세톤 고정만 한 것과 형광염색을 한 것을 비교한 결과, 아세톤 고정만 한 세포에서 형광이 약해지거나 거의 사라지는 것이 관찰됨
o ERAGS-GFP 바이러스를 광견병바이러스 특이항체 이용 Peroxidase Linked Assay(PLA)-DAB 염색을 통해 특이 발색 확인
o ERA 및 ERAGS 바이러스와 같이 ERAGS-GFP 바이러스도 3종 세포(BHK21, Vero CCL81, Vero CRL1586)에서 10⁷ TCID₅₀ /mL이상의 증식능 확인
o 혈청검사용 고정주 CVS11 바이러스와 증식능 비교한 결과, CVS11에 비해 ERAGS-GFP 바이러스는 3종 세포에서 고르게 증식함
o ERAGS-GFP 바이러스를 3종 세포에서 접종후 일자별 역가를 측정한 결과, 모든 세포에서 접종 후 5일에 가장 높은 바이러스 역가를 나타냄
o BHK21세포에서는 접종후 4일부터 형광이 세포형태에 따라 뭉쳐보이다가 약해졌지만, 2종의 vero세포에서는 8일까지 형광발현이 확대되면서 유지되는 것을 확인
o 계대에 따른 바이러스 역가 및 GFP발현 변화를 본 결과, 20계대까지 바이러스 역가가 10⁶~10^7.5 TCID₅₀/0.1 mL 사이를 유지하면서 형광도 변화없이 잘 발현됨
o 백신주 ERA 및 ERAGS 바이러스와 함께 ERAGS-GFP 바이러스의 안전성을 마우스에서 15일 간 확인한 결과, ERA 바이러스 그룹은 접종후 5일부터 체중이 감소하다가 13일째에 모두 죽었지만, ERAGS와 ERAGS-GFP 바이러스 그룹은 체중감소 없이 모두 생존함
o 국제표준혈청을 이용하여 ERAGS-GFP 바이러스를 300 TCID₅₀ 으로 접종하는 형광항체중화시 험법(GFP-FAVN)을 구축하고, 개혈청 62개를 이용하여 기존 혈청검사법과 비교한 결과 상관계수(R) 0.96으로 두 시험법간에 높은 상관관계가 있음을 확인

(출처 : 요약 1p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• I. 연구배경 및 목표 ... 3
• 1. 연구배경 ... 3
• 2. 연구최종목표 ... 4
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 5
• II. 연구방법 및 수행전략 ... 6
• 1. 재 료 ... 6
• 2. 연구전략 및 방법 ... 6
• III. 연구결과 ... 8
• 1. GFP 발현 재조합 바이러스(ERAGS-GFP)에서 GFP 유전자 확인 ... 8
• 2. 전자현미경을 통한 광견병바이러스 입자 생성 확인 ... 8
• 3. ERAGS-GFP 바이러스 세포 접종후 형광 발현 비교 ... 9
• 4. Peroxidase Linked Assay (PLA)를 이용한 재조합 바이러스 확인 ... 10
• 5. 백신주 ERAGS 및 고정주 CVS-11 바이러스와 증식능 비교 ... 11
• 6. 세포별, 시간대별 증식능 및 GFP발현 비교 ... 12
• 7. 계대수에 따른 바이러스 역가 및 GFP발현 변화 ... 13
• 8. 실험동물(마우스)에서 ERAGS-GFP 바이러스의 안전성 평가 ... 13
• 9. ERAGS-GFP 바이러스를 이용한 형광항체중화시험 개량법 (FAVN-GFP) 구축 및 개 혈청 샘플 적용 ... 14
• IV. 연구결과요약 ... 16
• V. 금후 추진계획 ... 17
• VI. 참고자료 ... 18
• 끝페이지 ... 18