보고서 정보
주관연구기관 |
농림축산검역본부 Animal and Plant Quarantine Agency |
연구책임자 |
구현옥
|
참여연구자 |
박성원
,
이희
,
김효비
,
박영일
,
김수희
,
강환구
,
소병재
,
송재영
,
정상희
,
송성옥
|
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
|
발행년월 | 2016-12 |
과제시작연도 |
2016 |
주관부처 |
농림축산식품부 Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs(MAFRA) |
등록번호 |
TRKO202000030874 |
과제고유번호 |
1545011811 |
사업명 |
농림축산검역검사기술개발 |
DB 구축일자 |
2020-11-21
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키워드 |
동물용의약품.잔류허용기준.휴약기간.플루메타손.잔류소실시험.Maximum residue limit.withdrawal period.altrenogest.pig.veterinary drug.Aminopyrine.sulpyrine.Flumethasone.corticosteroid.residue depletion.
|
초록
▼
5. 최종 연구결과 요약
< 2014년:1년차 >
가. 제1세부과제명: 잔류허용기준 및 휴약기간 평가방법 표준화와 적용 연구
1) 잔류허용기준 및 휴약기간 평가 지침 표준화
○ CODEX, 유럽연합 및 미국의 잔류허용기준 및 휴약기간 설정 방법 비교 분석
- Marker residue 이용, 방사능표지 시험잔류시험,대사시험 및 통계적 처리 등
○ 잔류허용기준 및 휴약기간 평가방법 세부지침서 작성
- 무독성량 등 독성지표 설정,안전계수 활용 일일섭취허용량 설정,Marker residue 선정 방법
5. 최종 연구결과 요약
< 2014년:1년차 >
가. 제1세부과제명: 잔류허용기준 및 휴약기간 평가방법 표준화와 적용 연구
1) 잔류허용기준 및 휴약기간 평가 지침 표준화
○ CODEX, 유럽연합 및 미국의 잔류허용기준 및 휴약기간 설정 방법 비교 분석
- Marker residue 이용, 방사능표지 시험잔류시험,대사시험 및 통계적 처리 등
○ 잔류허용기준 및 휴약기간 평가방법 세부지침서 작성
- 무독성량 등 독성지표 설정,안전계수 활용 일일섭취허용량 설정,Marker residue 선정 방법 및 목적동물에서 잔류소실실험 수행
- 식이노출평가 및 잔류소실시험을 이용한 가식부위별 잔류허용기준 설정
- 제품에 휴약기간 설정 방법 : 우수수의관리지침(GVP), 가식부위별 Marker residue 조사 프로그램을 이용한 통계적 휴약기간 설정 방법
2) 잔류허용기준 및 휴약기간 평가
○ 대상동물약품 선정 : 생산량,대체약품 유무,임상적인 중요성,독성 및 대사자료 유무 등을 고려하여 물질을 알트레노제스트로 선정
○ 독성지표
- 무독성량 : 0.004 mg/kg bw/day (반복투여독성 및 생식독성)
- 일일섭취허용량 : 0.0002 mg/kg bw/day(안전계수,20)
- Marker Residue : Altrenogest (Parent compound)
* 유럽연합,미국 등의 평가 정보를 활용
나. 제 2세부과제명: 기준 미설정 동물용의약품 잔류소실시험 연구
1) 알트레노제스트(잔류허용기준 미설정 물질)의 가식부위별 분석방법 설정
○ 질량분석기를 이용하여 분석컬럼으로 Acquity BEH C18(2.1 mm x 100 mm, 1.7 ㎛),이동상 용매로 0.1% formic acid가 포함된 증류수와 0.1% formic acid가 포함된 acetonitrile를 gradient program을 사용하여 유속은 0.4 ml/min으로 하는 분석법을 설정하였음
○ 돼지의 간장,신장,근육 및 지방에 추출방법을 확립하고,알트레노제스트 0.002 mg/kg을 validation level(VI)로 정하고 VI농도의 0, 0.25배,0.5배,1배,2배, 4배의 6단계 용량을 사용하여 표준곡선(surrogate법)를 작성하였으며,각각의 matrix(간장,신장,근육,지방)에 대한 표준곡선식의 r2값은 0.99 이상임을 확인하였음
○ 각 시료별 알트레노제스트의 검출한계 및 정량한계는 간장에서 0.62, 1.87, 신장 0.13, 0.40, 근육 0.14, 0.41,지방 0.28, 0.85이었으며 평균 회수율은 간장 56.5~65.5%, 신장 51.5~57.8%, 근육 62.3~69.8%, 지방 56.8~58.6% 이었음
2) 잔류허용기준 설정을 위한 잔류소실 시험
○ 체중 80 kg 이상 성돈 20마리를 5개군(A~E)으로 나누고 상용제품[레규메이트,Altrenogest 0.4%(4 mg/ml)]을 용법에 따라 2배 용량[(1 일/1회 18일간,10 ml (40 mg/day/pig 기준)]으로 사료에 혼합하여 투여하였음
〇 마지막 투여가 끝난 후,5일,10일,15일,30일에 시료(돼지간장,신장,근육 및 지방)을 채취하였으며 경시별 잔류랑을 측정한 결과,간장,신장,지방 모두 휴약 30일 이후부터 그리고 근육에서는 휴약 4일부터 검출한계 이하로 나타남
3) 잔류소실시험에 따른 휴약기간 설정
○ 다음의 절차에 따라 레규메이트의 휴약기간 결정함 : 개체별 가식부위별 잔류소실시험 자료를 보정 후 입력-〉통계프로그램을 이용하여 가식부위별 자료의 균질성 검증-〉경시별 altrenogest의 직선회귀식 산정-〉프로그램을 이용하여 가식부위별 잔류허용기준(안) 산출-〉잔류표지물질 (Marker residue)의 잔류허용기준(안)을 전체 잔류물질로 환산-〉가식부위별 경시별 식이노출 평가 시행-〉경시별 식이노출량과 ADI 비교-〉휴약 후 경시별 전체 식이노출량 산출-〉장기별 휴약기간 결정-〉제품의 휴약기간 결정
○ 레규메이트의 휴약기간은 95%신뢰구간에서 33일로 결정
< 2015년:2년차 >
가. 제1세부과제명: 국내일률기준 적용물질의 휴약기간 조사 연구
1) 일률기준 적용물질을 포함한 제품의 인허가 현황 (단일 또는 복합제품) 조사
〇 20종 물질중 판매실적이 있는 물질은 14종이었으며 품목수로는 총 50품목이었음
2) 단일 및 혼합제품에 대한 유효성분별 잔류허용기준 및 제품별 휴악기간 조사
〇 제품별 휴약기간 검토를 위한 잔류성 자료 조사
3) 축산물 잔류조사 및 휴약기간의 설정이 필요한 물질 및 제품 선정
〇 축산물 내 잔류 가능성,판매량 및 용법을 고려한 잔류조사 우선순위 설정
- 아미노피린〉메토크로프라미드〉베르베란〉디펜하이드라민〉테트라메트린〉테트라미졸〉아크리플라반〉디에칠카바마진 순이었음
4) 휴약기간 평가
〇 대상동물약품 선정 : 아미노피린 (Aminopyrin) 및 설피린 (Sulpyrin) 복합제제
- 아미노피린 및 설피린 복합제제는 최근 총 판매액이 46,376,000원이며,7개 품목이 현재 생산,판매 중이었음
〇 대상동물약품의 잔류소실시험을 위한 용량 및 투여기간 결정
- 시험군 선정: 대조군,투여 후 각각 1,2,3 및 5일 후 시료채취 군 총 5군
- 동물약품의 용량 및 횟수 선정: D업체 동물용의약품 〇〇피린 주, 10mL/두,하루 2회,연속 3일간 둔부 근육내 주사하였음
〇 잔류소실시험을 위한 시료 채취 및 시료 보관
- 약물 투여 후 1,2,3 및 5일 후 시료채취 (근육,주사부위,간,신장,지방)하였음
- 각 시료는 분석 전까지 냉동보관 (-20℃) 후 분석에 사용하였음
나. 제 2세부과제명: 일률기준적용 동물용의약품 잔류소실시험 연구
1) 아미노피란/설피린(잔류허용기준 미설정 물질)의 가식부위별 분석방법 확립
〇 분석조건 확립
- 분석장비: LCMS-8040 System(Shimadzu, Japan)
- 컬럼: Atlantis dC18 컬럼(2.1 mm x 100 mm, 3 ㎛)
- 이동상 용매: 10 mM ammonium acetate가 포함된 증류수와 acetonitrile의 시간대 비율을 조절하는 gradient program을 사용,유속은 0.2 ml/min 하였을 때 최적의 분리능을 나타내었음
- 추출방법 : 돼지의 근육/근육주사부위,간장,신장 및 지방 5 g에 acetonitrile로 추출하고, 원심분리하여 상등액을 채취함. 채취된 상등액에 hexane을 가하여 간섭 물질을 제거한 뒤,acetonitrile 용액으로 재용해하여 0.2 ㎛ PVDF filter로 여과한 용액을 기기에 주입
〇 돼지시료의 검출한계(LOD), 정량한계(LOQ) 및 회수율(Recovery)을 확인
- 아미노피린의 LOQ는 근육/신장/간장/지방에서 6.47/2.56/2.29/1.94 ng/g이었으며 LOD는 2.14/0.84/0.76/0.64 ng/g로 확인되었음
- 설피린의 LOQ는 근육/신장/간장/지방에서 12.57/23.40/39.01/58.49 ng/g이었으며 LOD는 4.15/7.72/12.87/19.30 ng/g로 확인되었음
- 평균 회수율은 아미노피린의 경우 근육/신장/간장/지방에서 91.5~103.7/50.83/ 52.16/40.70 %, 설피린의 경우 근육/신장/간장/지방에서 88.7~91.5/57.41/24.83/ 32.81 % 이었음
2) 휴약기간 설정을 위한 잔류소실 시험
〇 체중 40 kg, 수컷돼지 20마리를 4마리씩 5개군(A~E)으로 나누고 상용제품 [D사,〇〇피린주,성분 및 함량: aminopyrine 50 mg/ml, sulpyrine 200 mg/ml]을 용법에 따라 2배 용량[1 일/2회,3일 간,10 ml(0.25 ml/kg)]으로 IM(Intramuscular) 으로 투여
〇 제품에 대한 잔류허용기준 및 휴약기간 설정을 위하여 마지막 투여가 끝난 후, 휴약 1일, 휴약 2일,3일,5일에 4마리씩 도축하고 가식부위(돼지의 근육,간장,신장 및 지방)를 채취하여 경시별로 잔류량을 측정하였음
3) 잔류소실시험에 따른 휴약기간 설정
- 가식부위별로 개체별/경시별 잔류량과 통계프로그램(WT1.4)을 이용하여 일률기준이 적용된 가식부위별 휴약기간을 구한 결과 95%신뢰구간에서 아미노피린의 근육에서 3.5일,설피린 근육/간장/신장/지방에서 각각 2.6/3.8/5.0/2.7일이었음
- 제품의 최종 휴약기간은 설피린이 투여 된 신장에서의 5.0일을 기준으로 95%신뢰구간에서 5일로 설정하였음
< 2016년: 3년차 >
가. 제1세부과제명: 국내 일률기준 적용물질의 휴약기간 조사 연구
1) 시험대상물질 선정
〇 일률기준(0.01 ppm)을 적용한 26종 물질 중 선정
2) 일률기준 적용물질이 포함된 제품의 인허가 현황 조사
〇 판매량이 많은 순: 아르사닐산(2제품)>염산메틸에페드린(4제품)>미노싸이클린(1제품)>플루메타손(3제품)
3) 기준적용 물질이 포함된 제품의 인체위해성 조사
〇 플루메타손(Flumethasone)의 경우 반려동물, 말에서만 허가돼있는 미국,유럽과 달리 우리나라에서는 식용동물에서도 3제품이 허가돼 있음
〇 유사약물인 덱사메타손의 잔류허용기준과 비교하여,플루메타손에 적용되는 일률기준이 10배나 높아 일률기준을 그대로 적용하는 것은 축산물 섭취에 의한 인체위해성 우려가 높음
4) 축산물 잔류조사 및 휴약기간의 설정이 필요한 물질 및 제품 선정
〇 대상동물약품 선정 : 플루메타손(Flumethasone) 주사제
- 플루메타손이 포함된 제품은 현재 국내에서 3제품이 허가되어 있으며 2015년 1.5톤이 판매되었음
- 플루메타손은 소,말, 돼지 등의 축종에서 항염증제 및 항알러지 제제임
〇 유사약물인 덱사메타손의 잔류허용기준 설정 현황
- 덱사메타손의 경우 소,돼지,염소,양,말,가금에서 기준이 설정되어 있으며 유,알에서는 더 3~10배 더 낮게 설정돼있음
- 플루메타손의 일률잔류허용기준인 0.01mg/kg은 유사약물인 덱사메타손의 잔류허용기준인 0.001mg/kg과 비교하여 10배나 높아 안전기준이라 보기 어려움
〇 플루메타손이 포함된 제품의 휴약기간 평가
- 플루메타손의 휴약기간은 제품별 용법·용량이 유사함에도 불구하고 소,말,돼지에서 4~5일로 설정되어 있으며 유에서는 1일 혹은 5일로 설정돼있어 휴약기간 설정 근거가 명확치 않음
나. 제 2세부과제명: 일률기준적용 동물용의약품 잔류소실시험 연구
1) 플루메타손(잔류허용기준 미설정 물질)의 가식부위별 분석방법 확립
〇 분석조건 확립
- 분석장비: Shimadzu Nexera LC - ABsciex QTrap 6500 MS(LC-MS/MS)
- 컬럼: C18 Column (2.1 mm x 100 mm, 3.5 ㎛)
- 이동상 용매: 5mM ammonium acetate and 0.1% formic acid in water와 0.1% formic acid in acetonitrile를 gradient flow로 사용,유속은 0.3 ml/ min 하였을 때 최적의 분리능을 나타내었음
- 추출방법 : 돼지 근육,주사부위(근육),신장 및 간장 10g을 가수분해한 후,acetonitrile 추출함. QuEChER kit를 첨가하고 원심분리한 후,채취된 상등액에 MgSO4와 C18을 가하여 다시 원심 분리함. 다시 상등액을 취하여 농축후,0.45 ㎛ PTFE filter로 여과한 용액을 기기에 주입
〇 표준곡선 (matrix standard curve) 작성
- 현재 플루메타손의 잔류허용기준의 1/10인 0.001 mg/kg를 validation level(VL)로 정하고, 0.3125 부터 10ng사이의 6단계 용량을 사용하여 표준곡선을 작성함. 돼지근육,신장,간장에 대한 표준곡 선식의 r2값은 모두 0.998이상이었음
〇 돼지시료의 검출한계 (LOD),정량한계 (LOQ) 및 회수율(Recovery) 확인
- 플루메타손의 LOD는 근육/신장/간장에서 0.22/0.38/0.59 으뜸이었으며 LOQ는 0.67/1.16/0.76/1.79 ng/g로 확인되었음
- 평균 회수율은 농도가 0.001mg/kg일 때 근육/신장/간장에서 101.96/92.65/92.26%, 농도가 0.005mg/kg일 때 근육/신장/간장에서 94.21/100.21/81.41%이었음
2) 휴약기간 설정을 위한 잔류소실 시험
〇 체중 30 kg 돼지를 암,수 섞어 4마리씩 5개군(A~E)으로 나누고 상용제품 [W사,코O발 주,성분 및 함량: flumethasone 0.25 mg/ml]을 용법에 따라 1일/1회, 3일간,5 ml(0.25 m]/kg)]으로 근육내 (Intramuscular) 투여
〇 제품에 대한 휴약기간 설정을 위하여 마지막 투여가 끝난 후,휴약 12시간,1일,2일,3일째에 4마리씩 도축하고 가식부위(돼지의 근육,간장, 신장 및 주사부위)를 채취하여 경시별로 잔류량을 측정하였음
〇 코〇〇 제품에 대한 잔류소실 양상 확인
- 경시별 잔류량을 측정한 결과 근육에서 휴약 1일부터,신장에서 휴약 2일부터,간장에서는 휴약 12시간 이후부터 검출한계 이하로 나타났음
3) 잔류소실시험에 따른 휴약기간 설정
- 가식부위별로 개체별/경시별 잔류량과 통계프로그램(WT1.4)을 이용하여 일률기준이 적용된 가식부위별 휴약기간을 구한 결과 95%신뢰구간에서 근육/신장/간장/주사부위에서 각각 0/3.2/0.3/2.5일이었음
- 제품의 최종 휴약기간은 설피린이 투여된 신장에서의 3.2일을 기준으로 95%신뢰구간에서 4-5일이 적절하였음
(출처 : 5. 최종 연구결과 요약 1p)
Abstract
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Establishment of maximum residue limit and withdrawal period on veterinary drugs (Establishment of MRL and Withdrawal Period for Altrenogest Product in Pigs)
Altrenogest is an orally active (pro)gestagen used in pigs for estrus synchronization.
Total sales of Regumate, one of the altrenog
Establishment of maximum residue limit and withdrawal period on veterinary drugs (Establishment of MRL and Withdrawal Period for Altrenogest Product in Pigs)
Altrenogest is an orally active (pro)gestagen used in pigs for estrus synchronization.
Total sales of Regumate, one of the altrenogest products, are estimated to be 1,490,300,000 won in Korea during 2010 to 2012 (Korea Animal Health Products Association). Since MRL (maximum residue limit) is not yet set for altrenogest in Korea, the following studies were conducted to establish MRL (for residue) and withdrawal period (for product) for safe use of altrenogest in pigs. After oral treatment of Regumate with two times of recommended dose (40 mg/day for 18 consecutive days), pigs were slaughtered after withdrawal times of 5, 10, 15 and 30 days. Marker residue of altrenogest in tissue specimens (muscle, liver, fat and kidney) were analyzed by Analytical Toxicology Laboratory in QIA using LC/MS/MS. With the residue data, analysis of homeogenecity of data in each edible tissue was performed. Through linear regression of concentration of altrenogest in edible tissue, tolerance limits [μg/kg] of altrenogest were estimated. Dietary exposure of altrenogest was determined by multiply consumption (g/day/person) and estimate tolerance (ng/g). After comparison of total dietary intake with ADI by considering the ratio of maker to total residue, MRLs were determined for specific organs (liver,fat, kidney). Withdrawal period was obtained from residue data of residue depletion study using WP14 program. Based on the statistical estimation, estimated daily intake became lower than ADI ( 0.2 μg altrenogest/kg/day) after 12.78 days of withdrawal. As the estimated daily intake at 12.78 days were 0.2,2.75,0.31 and 1.71 μg/kg in muscle, liver, kidney and fat, respectively,MRLs(μg/kg) of altrenogest in those tissues were suggested as 0.5,3.0,0.5 and 2.0,respectively. Based on the residue depletion data, withdrawal period for specific organs were 33,22 and 27 days in liver, fat and kidney, respectively,with a 95 % confidence level. Therefore, the longest withdrawal period of 33days in liver was adopted and suggested as final withdrawal period for altrenogest product. In this study, MRLs in pig edible tissues were recommended according to their toxicological characteristics. Also, withdrawal period for altrenogest product were suggested according to good veterinary practice(GVP),resulting from residue depletion studies in pigs. These recommended MRLs and withdrawal period can be adopted for enforcement and regulatory purpose.
(출처 : Abstract 45p)
Establishment of maximum residue limit and withdrawal period on veterinary drugs (Establishment of withdrawal period for aminopyrine/sulpyrine products in pigs)
Aminopyrine and Sulpyrine combination products have been approved as antipyretic and analgesic combination drugs for food-producing animals in Korea. As the maximum residue limits (MRLs) for aminopyrine and sulpyrine in food-producing animals are recently established, we conducted residue depletion study in pigs to establish the product withdrawal period. Aminopyrine/sulpyrine combination products (containing 50mg/mL of aminopyrine and 200mg/mL of sulpyrine) were purchased from DAE SUNG microbiological labs. Co., Ltd. The combination product was administered intramuscularly at 10ml/head twice a day for three consecutive days in pigs, according to good veterinary practice (GVP). Pigs were slaughtered at 1, 2, 3 and 5days of withdrawal.
Each marker residue of Aminopyrine and sulpyrine in tissue specimens (muscle, liver, fat and kidney) were analyzed using LC/MS/MS. Withdrawal periods in each tissue were calculated using WP14 software program. Aminopyrine was detected below the MRL (10μg/kg in pig muscle) after 3 days of withdrawal. Sulpyrine was detected below the MRL (100ug/kg in muscle, fat, liver and kidney in pig) after 3 days of withdrawal in each tissue. Withdrawal time was estimated to be 3.5 days in aminopyrine-treated muscle and 2.6, 3.8, 5.0 and 2.7 days in sulpyrine-txeated muscle, liver, kidney and fat, respectively, at the 95% tolerance limit with 95% confidence level. Taken together, the longest withdrawal period of 5 days (in kidney administered with sulpyrine) was adopted and proposed as withdrawal period for aminopyrine/sulpyrine combination products. This study proposed withdrawal period for aminopyrine/sulpyrine combination drugs resulting from residue depletion data in pigs. This work can help improve food safety in Korea.
(출처 : Abstract 46p)
Establishment of maximum residue limit and withdrawal period on veterinary drugs (Evaluation of withidrawal period for flumethasone products in pigs)
Flumethasone products have been approved as anti-inflammatory and anti-allergic drugs for food-producing animals in Korea. As the maximum residue limits (MRLs) for flumethasone in food-producing animals are recently established, we conducted residue depletion study in pigs to evaluate the product withdrawal period. Flumethasone products which contain 0.25mg/mL of flumethasone were purchased from Woo-Jin B&G. The drug was administered intramuscularly at 5ml/head once a day for three consecutive days in 16 pigs, according to good veterinary practice (GVP). Pigs were slaughtered at 12 hours, 1,2 and 3days after last treatment. The tissue specimens (muscle, liver, fat and kidney) were analyzed using LC/MS/MS. Withdrawal periods in each tissue were calculated using WP14 software program. Flumethasone was detected below the LOQ (0.67μg/kg in muscle) after 1 days of withdrawal in muscle. Other edible tissues including kidney and liver showed lower flumethasone residue than LOQ. Withdrawal period was estimated to be 3 days in muscle at the 95% tolerance limit with 95% confidence level. This study evaluated withdrawal period for flumethasone products resulting from residue depletion data in pigs. This work can help improve food safety in Korea.
(출처 : Abstract 47p)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- I. 연구배경 및 목표 ... 6
- 1. 연구배경 ... 6
- 2. 연구최종목표 ... 7
- 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 7
- II. 연구방법 및 수행전략 ... 8
- 1. 재 료 ... 8
- 2. 연구전략 및 방법 ... 8
- III. 연구결과 ... 9
- IV. 연구결과요약 ... 37
- V. 고 찰 ... 42
- VI. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 42
- VII. 연구사업 추진상 문제점 및 건의사항 ... 44
- VIII. 주요연구과제 변경사항 ... 44
- IX. 참고자료 ... 44
- X. 영문초록 ... 45
- 끝페이지 ... 47
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