초록 ▼

5. 최종 연구결과 요약

ㅇ 세부과제명: 조류인플루엔자 바이러스 유래 벡터를 이용한 재조합 바이러스 제작 기술 개발
- 신규 역유전학 벡터 시스템 개발을 위한 RNA polymerase I promoter 부위 탐색
• 2개 후보군(오리, 메추리) 선정 후 18s rRNA 유전자를 이용하여 RNA polymerase I promoter 부위 탐색
• 오리에서만 잠재적인 RNA polymerase I promoter 부위가 확인되어 2개 후보 유전자 합성(250bps & 470bps)
- 재조합 바

5. 최종 연구결과 요약

ㅇ 세부과제명: 조류인플루엔자 바이러스 유래 벡터를 이용한 재조합 바이러스 제작 기술 개발
- 신규 역유전학 벡터 시스템 개발을 위한 RNA polymerase I promoter 부위 탐색
• 2개 후보군(오리, 메추리) 선정 후 18s rRNA 유전자를 이용하여 RNA polymerase I promoter 부위 탐색
• 오리에서만 잠재적인 RNA polymerase I promoter 부위가 확인되어 2개 후보 유전자 합성(250bps & 470bps)
- 재조합 바이러스 제작을 위한 세포주 도입 및 구축
• ATCC로부터 CCL-141; duck embryo fibroblast를 도입 후 구축
- 사람유래 promoter를 오리유래 promoter로 치환
• 현재, 인플루엔자 재조합 바이러스를 제작하는데 사용하고 있는 벡터의 rna polymerase Ipromoter 부위를 오리유래의 promoter부위로 치환 후 바이러스 생성 및 polymerase 작동여부 확인 중

(출처 : 5. 최종 연구결과 요약 1p)

Abstract ▼

Previously, reverse genetics systems to rescue influenza viruses have been based on the use of a human polymerase I (Poll) promoter to direct the synthesis of the eight viral RNAs. They can only be used on cells from primate origin due to the species specificity of the Poll promoter. The objective o

Previously, reverse genetics systems to rescue influenza viruses have been based on the use of a human polymerase I (Poll) promoter to direct the synthesis of the eight viral RNAs. They can only be used on cells from primate origin due to the species specificity of the Poll promoter. The objective of this study was to develop an alternative reverse genetics system for influenza vims using the avian poll promoter sequence that works efficiently in the avian-origin cell line.
To identify the avian Poll promoter region, we searched the duck and quail chromosome that contains the 18S rRNA genes in the database of the genome. We then performed a homology search of the Poll transcription initiation site. Through these analyses, we predicted that the duck Poll transcription initiation site sequence was positioned at approximately 10 kb upstream of the 18S rRNA gene. We therefore generated new vectors containing the upstream regions (consisting of 470 or 250 nt) from the predicted transcription initiation site，which most likely contained the duck Poll promoter sequence.
To determine whether our new vectors functioned in avian-origin cells, we obtained new avian-origin cell line, duck embryo fibroblast (CCL-141； duck-origin), from ATCC. To compare the transfection efficiency, we transfected CCL-141 cells with pEGFP reporter plasmid that expresses green fluorescent protein (GFP). Compared to mammalian-origin 293T cells, CCL-141 cells showed low transfection efficacy. Recently, we obtained another avian-origin cell line，QT-6 (quail-origin). We will try to compare the transfection efficiency and generate the 01310 virus by reverse genetics using QT-6 cells.

(출처 : Ⅹ. 영문초록 15p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• I. 연구배경 및 목표 ... 2
• 1. 연구배경 ... 2
• 2. 연구최종목표 ... 3
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 3
• II. 연구방법 및 수행전략 ... 4
• 1. 재 료 ... 4
• 2. 연구전략 및 방법 ... 4
• III. 연구결과 ... 5
• IV. 연구결과요약 ... 10
• V. 고 찰 ... 11
• VI. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 13
• VII. 연구사업 추진상 문제점 및 건의사항 ... 13
• VIII. 주요연구과제 변경사항 ... 14
• IX. 참고자료 ... 14
• X. 영문초록 ... 15
• 끝페이지 ... 15