보고서 정보
주관연구기관 |
농림축산검역본부 Animal and Plant Quarantine Agency |
연구책임자 |
노인순
|
참여연구자 |
손현주
,
김효진
,
서태영
,
박경제
,
엄재구
,
김용관
,
김종택
,
강해은
|
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
|
발행년월 | 2016-12 |
과제시작연도 |
2016 |
주관부처 |
농림축산식품부 Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs(MAFRA) |
등록번호 |
TRKO202000030939 |
과제고유번호 |
1545011877 |
사업명 |
농림축산검역검사기술개발 |
DB 구축일자 |
2020-11-21
|
키워드 |
표준실험실 운영.진단.표준화.CWD.OIE.Korean water deer.monitoring.PRNP.polymorphism.
|
초록
▼
5. 최종 연구결과 요약
ㅇ 세부과제명: CWD OIE 표준실험실 운영
- OIE 회원국 진단기술전수 및 교육을 위해 '13 베트남(파라핀블럭/프리온항체 보급), '14 아시아 12개국 26명(TSE 검사법 전수), '15 베트남 실무자 10명(초청 및 OIE expert 파견 교육 실시), '16년 아시아 3개국 6명에게 CWD에 대한 개요 및 항원 ELISA, IHC, WB 기술을 전수함
- 자체 생산 항체 10종의 정제를 통해 각 항체의 epitope과 축종별 반응성을 확인함
- CWD 항원생산을 위해 P
5. 최종 연구결과 요약
ㅇ 세부과제명: CWD OIE 표준실험실 운영
- OIE 회원국 진단기술전수 및 교육을 위해 '13 베트남(파라핀블럭/프리온항체 보급), '14 아시아 12개국 26명(TSE 검사법 전수), '15 베트남 실무자 10명(초청 및 OIE expert 파견 교육 실시), '16년 아시아 3개국 6명에게 CWD에 대한 개요 및 항원 ELISA, IHC, WB 기술을 전수함
- 자체 생산 항체 10종의 정제를 통해 각 항체의 epitope과 축종별 반응성을 확인함
- CWD 항원생산을 위해 PMCA 기법을 활용하였으며, PMCA를 통해 생산된 항원은 고유의 항원과 그 특성이 유사하여 진단용으로 활용 가능하였음
- CWD OIE 표준실 운영 및 검사 신뢰도 제고를 위해, KS Q ISO/IEC 17025 국제공인시험기관 인정을 운영・유지하고 있음, 이에 따라 진단에 필요한 절차, 지침 등의 문서 및 기술과 관련된 장비 및 방법 지침서를 작성, 최신본 유지를 위한 제・개정 등의 문서 관리를 수행하고 있으며 ‘16년에는 갱신평가를 무사히 마쳐 지속적인 국제공인시험기관을 유지하고 있음
- 비정형 BSE 진단법을 확립하여, 정형 BSE와의 strain 감별기법을 확립함
- Na-PTA(Sodium phosphotungstic acid)이용, TSE의 항원양이 적거가 질병의 초기단계의 감염 개체를 검출할 수 있는 NA-PTA법을 확립함
- CWD 감염에 필수적으로 사용되는 형질전환마우스(TgElk)에 대한 임상증상별 변형프리온 감염시기를 확인, 100일 전・후의 잠복기를 기준으로 감염 시기를 판단하는 기준을 마련함
- TSE 유사중상 개체에 대한 진단 및 예찰을 실시, '16년 CWD 예찰을 통해 경남 진주 사슴농장에서 CWD 발생을 조기 확인하여, 질병의 잔존 및 전파가능성을 최대한 배제하고자 노력함, 현재 6개 농장 44두에서 CWD 양성이 확인되었음
ㅇ 세부과제명: TSE 진단법 표준화 연구
- 검사시료 사후변화가 TSE 원인체 검출에 미치는 영향을 조사하기 위하여 3가지 종류의 시료를 준비하였음. 첫 번째 시료는 PMCA법으로 제작된 CWD 양성시료를 3TC 에서 1주, 2주, 3주, 4주, 3개월, 4개월, 6개월, 9개월, 12개월, 24개월에 걸쳐 준비하였고, 두 번째 시료는 37℃ 에서 O.D값이 다른 3가지의 CWD 감염 사슴 시료를 2주, 4주, 8주동안 유지하였음. 세 번째 시료는 60℃의 온도 하에서 12주간 CWD 감염 사슴뇌유제액을 유지시켰음. 그 결과, 37℃에서 유지된 시료는 모두 PrPGWD가 확인되었으나, 60℃의 온도에서 유지되었던 시료는 12주에 확인되지 않았음. 또한, 온도가 PRNP 유전자 부위에 미치는 영향을 알고자 3개의 다른 epitope에서 생산된 항체를 이용하여 WB를 진행한 결과, 온도와 유전자 부위와의 관계는 없는 것으로 확인되었음. 60℃의 온도에서 0, 8, 12주에 걸쳐 유지된 시료의 감염력 확인을 위해 TgElk에 감염실험을 실시한 결과, 잠복기의 증감만 있을뿐 모든 시료에서 공격력이 확인되었음
- ‘15년에 포르말린 고정 파라핀 블록(FFPE)에 대한 prpGWD 검출기법을 확립하고, 이에 대한 사슴 CWD 양성 시료에 대한 후향적 검사를 실시하였음. 2001년부터 보관된 사슴 FFPE에 대해 확립된 기법을 도입한 결과, 2001년부터 보관된 FFPE 조직에서도 CWD의 변형프리온이 검출되었음.
ㅇ 세부과제명: 야생사슴(고라니 등)에 대한 CWD 조사
- 야생사슴에 대한 CWD 조사는 '14~'15년 2년간 진행되었으나, CWD 잠복기가 3~5년임을 감안, 추가조사가 필요하였음. 2016년은 사육 사슴에서 CWD가 발생함으로 국내 CWD 발생이 추후 지속적으로 발생될 우려와 더불어, 우점종인 야생고라니에 대한 추가 검사를 실시함
- 2016년에도 국립환경과학원 및 강원도 야생동물구조센터와의 협업을 통해 야생사슴의 시료 및 결과를 공유하여 총 112두의 시료를 수집하였고 수집된 조직인 뇌의 빗장부위(obex), 인후두림프절 및 편도에서 CWD 검사를 실시한 결과, 모두 음성으로 확인됨.
- 검사 시료는 야생고라니로 강원(38두), 경기(11), 경북(13두), 경남(15두), 전남(6두), 전북(1두), 충남(13두), 충북(15두) 지역에서 수집되었으며 고라니의 체중은 대부분 14kg 이상의 것만 선별하여 조사에 활용하였음
(출처 : 5. 최종 연구결과 요약 1p)
Abstract
▼
Chronic wasting disease (CWD) is a transmissible spongiform encephalopathy (TSE) of captive and free-ranging white-tailed deer (OdocoileusVirginianus), mule deer (O. hemionus)and Rocky Mountain elk (Cervuselaphus) in several US states and Canadian provinces. Korean CWD was introduced by elk imported
Chronic wasting disease (CWD) is a transmissible spongiform encephalopathy (TSE) of captive and free-ranging white-tailed deer (OdocoileusVirginianus), mule deer (O. hemionus)and Rocky Mountain elk (Cervuselaphus) in several US states and Canadian provinces. Korean CWD was introduced by elk imported from Canada in 1997. CWD outbreaks in farmed animals have been reported five times through 2001, 2004, 2005, 2010 and 2016 in Republic of Korea. CWD surveillance of wild Korean water deer that lived in die country has not been performed. Here, we described preliminary data of CWD monitoring in Korean water deer for last two years.
All tissue samples of Korean water deer were obtained from Korean Association for Wild Animal Protection in the eight provinces and National Institute of Environmental Research. For all animals (n=462), obex, retropharyngeal lymph node, tonsil and rectal mucosa were tested for PrPCWDusing TeSeETM SAP Combi Kit(Bio-Rad).
Our sample sizes were adequate to detect CWD even at a prevalence of 5% for inhabited Korean water deer at normal risk with 95% confidence.
Korean water deer that is estimated to be about 610,000 is inhabited in Korea. Based on statistical significance, we investigated CWD from 2014 to 2015. By province, in Kangwon (229), Gyounggi (43), Gyeongnam (56), Gyeongbuk (16), Jeonnam(43), Jeonbuk (11), Chungnam (30), Chungbuk (34), we have collected a total of 462 samples of Korean water deer. Most of those being run over have been struck and killed by car. They were selected for the only weight 14 kg or more objects. The obex, Korean water deer were negative for PrPCWD.
Monitoring for CWD in Korean water deer was carried out from 2014. and has been investigated for about two years. To date, there has not been confirmed for CWD infected Korean water deer. However, in consideration of the incubation period of CWD, CWD investigation of Korean water deer should be carried out 5 or more years. Furthermore, although the format population of Korean roe deer is small, it must also promote research of those populations.
Chronic wasting disease (CWD) is a transmissible spongiform encephalopathy (TSE) or prion disease, fatal neurological disorder, that occurs in free ranging cevids, including white-tailed deer, mule deer, elk, and moose. CWD has occurred five times up to now since it was first reported in 2001 in Republic of Korea (ROK). Korean water deer (Hydropotesinermisargyropus) is the species of the wild deer in ROK. Polymorphisms in the PRNP gene can lead to different conformation of prion protein that modulates individual susceptibility to and progression of TSE infection. The aim of this study was to identify the PRNP polymorphism related to CWD in a large number of free-ranging Korean water deer.
PRNP genes have been sequenced in one hundred forty four Korean water deer. Four amino acid changes were identified within the 256 amino acid open reading frame in the third exon of the PRNP gene. Four Polymorphisms in Korean water deer were G96D (1.4%), N100S (23.6%), D170G (0.7%), A187V (100%) when compared to the reference gene (GenBank, DQ358969.1). The PrP amino acid sequence of the Korean water deer showed 98.4~99.2%, 97.9~98.8% and 98.8~99.6% homology with those of American elk, mule deer and white-tailed deer, respectively.
We found four novel polymorphism of PRNP gene for Korean water deer comparing our results with published date. Newly discovered PRNP polymorphisms have not been confirmed whether there is a rela仕onship between CWD infectivity and polymorphism. The PrP allele for CWD susceptibility of the Korean water deer is not yet determined. However, the amino acid sequence of Korean water deer was shown to high genetic similarities to those of the elk, white-tailed deer, and mule deer. Furthermore, we focused on identifying known polymorphisms in the PRNP gene, related potential risk for natural CWD infection of the Korean water deer, the allele for CWD susceptibility of the Korean water deer.
(출처 : Ⅹ. 영문초록 33p)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- I. 연구배경 및 목표 ... 3
- 1. 연구배경 ... 3
- 2. 연구최종목표 ... 4
- 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 4
- II. 연구방법 및 수행전략 ... 5
- 1. 재 료 ... 5
- 2. 연구전략 및 방법 ... 5
- III. 연구결과 ... 6
- IV. 연구결과요약 ... 28
- V. 고찰 ... 29
- VI. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 30
- VII. 연구사업 추진상 문제점 및 건의사항 ... 31
- VIII. 주요연구과제 변경사항 ... 31
- IX. 참고자료 ... 31
- X. 영문초록 ... 33
- 끝페이지 ... 34
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.