보고서 정보
주관연구기관 |
연세대학교 Yonsei University |
연구책임자 |
윤보현
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2020-03 |
과제시작연도 |
2019 |
주관부처 |
과학기술정보통신부 Ministry of Science and ICT |
등록번호 |
TRKO202100001413 |
과제고유번호 |
1711085969 |
사업명 |
개인기초연구(과기정통부)(R&D) |
DB 구축일자 |
2021-06-12
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키워드 |
자궁내막증.난모세포.산화스트레스.불임.코티졸 분비 호르몬.
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초록
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연구개요
본 연구는 자궁내막증 환자와 대조군에서 난포 환경의 차이를 확인하여 자궁내막증이 난자의 질에 직접적으로 영향을 주어 불임을 일으킨다는 가설을 입증하고 관련 물질들의 자궁내막증의 새로운 치료제 개발을 위한 표적분자로서 유용성을 확인하고자 하였음.
1차년도: 자궁내막증군과 대조군 간 난포액 (Follicular fluid) 내 oxidative stress (RAGE), stress 인자 (CRH, urocortin), 염증성 사이토카인(TNFa, IL-6, IL-8)의 차이를 비교함.
2차년도: 사람 난포액에
연구개요
본 연구는 자궁내막증 환자와 대조군에서 난포 환경의 차이를 확인하여 자궁내막증이 난자의 질에 직접적으로 영향을 주어 불임을 일으킨다는 가설을 입증하고 관련 물질들의 자궁내막증의 새로운 치료제 개발을 위한 표적분자로서 유용성을 확인하고자 하였음.
1차년도: 자궁내막증군과 대조군 간 난포액 (Follicular fluid) 내 oxidative stress (RAGE), stress 인자 (CRH, urocortin), 염증성 사이토카인(TNFa, IL-6, IL-8)의 차이를 비교함.
2차년도: 사람 난포액에서 granulosa-theca cell을 분리하여 primary cell culture 조건을 확립하고, 분자생물학적 실험이 가능하도록 배양한 primary cell 의 증식 조건을 개선함.
3차년도: 난포액에서 분리한 granulosa-theca cell 의 primary culture를 통해 얻은 granulosa cell과, 확립된 granulosa cell line인 HGL5에 oxidative stress를 가해 cell prolfieration & apoptosis, RAGE, CRH, Urocortin, CRH Receptor-1, inflammatory cytokine (TNFa, IL-6, IL-8), NF-kB, E2, P4의 발현 및 분비를 비교함.
연구 목표대비 연구결과
1차년도: 체외 수정 주기를 시행하는 자궁내막증 환자 20명과 대조군 20명을 대상으로, 난포액의 RAGE, CRH, Urocortin level 비교 결과, RAGE는 대조군에 비해 자궁내막증 군에서 유의하게 분비 감소(P=0.04), CRH는 자궁내막증 군에서 유의하게 분비증가(P=0.0008), Urocortin도 자궁내막증 군에서 유의하게 분비증가(P=0.024), 염증성 사이토카인인 TNFa는 자궁내막증 군에서 분비증가(P=0.0004), IL-6 & IL-8은 자궁내막증 군에서 분비감소 (P=0.003, 0.0025) 하였음. 자궁내막증 군의 난포액에서 염증성 물질 및 스트레스 인자의 유의한 증가를 확인함.
2차년도&3차년도: 체외수정 주기를 시행하는 환자에서 난자채취 시 얻은 난포액에서 granulosa-theca cell을 분리, primary cell culture를 통해 세포를 얻기 위해 배양 조건을 확립함. 난포액에서 분리한 granulosa-theca cell 의 primary culture를 통해 얻은 granulosa cell과, 확립된 granulosa cell line인 HGL5에 recombinant HMGB-1으로 oxidative stress를 가해, 농도 증가에 따라 cell proliferation 감소, apoptosis가 증가하는 양상을 확인함. 또한 두 종류의 granulosa cell에 rHMGB1처리 후 염증반응에 관여하는 물질들인 RAGE와 COX2를 추가하여 발현 변화를 관찰하였음. 계획했던 CRH, urocortin, CRH Receptor, IKK(NF-kB)에 대한 qRT-PCR을 현재 진행 중이며, supernatant에서의 TNFa, IL-6, IL-8, E2, P4에 대한 ELISA를 진행할 예정임.
연구개발결과의 중요성
Granulosa cell은 난자의 주변 세포로, 난자와의 signal cross-talk을 통해 난자의 성숙과 수정력에 영향을 주는 주요한 factor임. 그러나 vulnerable한 cell character로 인해 primary culture가 매우 어려운 것으로 되어 있고, cancer cell line이 아닌 정상인의 난포액에서 분리된 granulosa cell line은 세계적으로 HGL5 cell 1 종류 밖에 없음. 본 연구진이 금번 연구를 통해, 난포액에서 granulosa cell을 분리하고, 분자생물학적 실험이 가능하도록 배양하는 기법을 개선하였다는 데 연구 성과의 의미가 있음. 또한 현재까지 결과를 도출한 oxidative stress로 인한 granulosa cell의 apoptosis 증가 및 inflammation pathway의 변화와의 관련성 증명 뿐 아니라, 스트레스 인자와 관련된 남은 실험이 완료된 후의 최종 연구 결과를 기대함. 본 연구 결과는 자궁내막증에서 CRH inhibitor인 Antarlamin이나, NF-kB inhibitor 등의 새로운 치료제의 적용에 대한 기반 연구로서의 역할을 할 수 있을 것으로 사료됨.
(출처 : 요약문 2p)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 연구결과 요약문 ... 2
- 목차 ... 3
- 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
- 2. 연구수행내용 및 연구결과 ... 5
- 3. 연구개발결과의 중요성 ... 9
- 4. 참고문헌 ... 10
- 5. 연구성과 ... 10
- 대표적 연구실적 ... 12
- 끝페이지 ... 18
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