초록 ▼

□ 연구개요
농수산물 중에 존재 가능한 항생제인 ceftiofur 및 florfenicol에 대한 lanthanide chelate 기반 시간분해형광면역측정법(time-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA)을 연구하고자 하였다. 이를 위하여 본 연구에서는 상기의 타깃 항생제 2종에 대한 TRFIA 측정시스템 구성, 해당물질 측정을 위한 바이오물질로서 항체와 lanthanide chelate 제작 및 확보, 코팅항원 제작과 lanthanide chelate와 항체의 접합기술을 먼저 확립하였다. 이 후 이들

□ 연구개요
농수산물 중에 존재 가능한 항생제인 ceftiofur 및 florfenicol에 대한 lanthanide chelate 기반 시간분해형광면역측정법(time-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA)을 연구하고자 하였다. 이를 위하여 본 연구에서는 상기의 타깃 항생제 2종에 대한 TRFIA 측정시스템 구성, 해당물질 측정을 위한 바이오물질로서 항체와 lanthanide chelate 제작 및 확보, 코팅항원 제작과 lanthanide chelate와 항체의 접합기술을 먼저 확립하였다. 이 후 이들 코팅항원과 항체 conjugate를 이용하여 항생제 측정을 위한 비경합 및 경합형 TRFIA 연구를 행한 후 검체를 대상으로 한 측정을 기존방법과 비교하여 수행하였음.

□ 연구 목표대비 연구결과
○ 타깃 항생제 2종에 대한 TRFIA 측정시스템 구성: Florfenicol과 ceftiofur에 대한 filter 및 monochromator 기반 다기능 microplate reader 및 washer 시스템을 구축하고 시스템 구동을 위한 소프트웨어 작동법 확립
○ 바이오물질과 lanthanide chelate 확보: 타깃 항생제 측정에 사용되는 바이오물질로서 florfenicol 및 ceftiofur에 대한 다클론항체 각 1종을 제작하고 lanthanide chelate로서 europium 및 terbium chelate 확보
○ 코팅항원 제작 및 항체 접합기술 확립: 비경합형 TRFIA 연구에 필요한 코팅항원을 타깃 항생제와 소혈청 알부민(bovine serum albumin) 혹은 난백단백질(ovalbumin)을 결합시켜 제조하였다. 항체와 lanthanide chelate를 접합시킨 후 PD-10 column 등을 사용하여 정제하여 Eu 및 Tb-항체 conjugate를 제작함.
○ 항생제 측정 TRFIA 연구: 결합항체와 측정항체를 사용하는 direct coating법에 의하여 타깃 항생제 2종을 측정할 수 있는 비경합형 TRFIA 측정시스템을 구축하고 측정조건을 최적화 하였다. 또한 간접경합 방식의 TRFIA 측정시스템을 구축하고 0.005-50 ng/mL 농도범위의 analyte에 대한 측정을 성공적으로 행하였음.
○ 시료분석과 기존방법과의 비교: 우유 등에 대하여 매트릭스 효과를 검토하여 분석용 시료 및 타깃 항생제 spiking에 의한 모델시료를 제조한 후 기존의 ELISA Kit와 비교분석을 행하고 TRFIA Kit를 구성함.

□ 연구개발결과의 중요성
○ 농약, 호르몬제 등과 같이 농수산물에 존재 가능한 저분자 유해잔류물질에 대한 고감도측정을 위한 신규분석법 개발에 있어 기반기술로서 활용 가능
○ 본 연구결과의 항생제 고감도검출을 위한 TRAFIA 기술은 ELISA, HPLC 등 기존방법과 함께 항생제 모니터링에 활용 가능할 것으로 기대
○ 본 연구를 통하여 항체와 lanthanide chelate의 접합기술, 코팅항원 제작기술, 포맷별 면역반응 최적화 등과 같은 TRFIA 핵심기술의 확보 가능
○ 간편한 고감도 형광면역측정기술 확보로 농수산물 및 그 가공제품의 건전성 확보에 기여 가능
○ 독창적 연구결과에 따른 학술적 가치 창출과 각종 농수산 검체에 대한 평가수요 증대에 효율적으로 대처할 수 있는 차세대 모니터링 수단 확보에 활용가능
○ 독창적 연구결과에 따른 분석생화학분야 학문발전에 기여

(출처 : 연구결과 요약문 3p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 3
• 목차 ... 4
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 가. 연구개발의 필요성 ... 4
• 나. 연구가설 ... 5
• 다. 최종목표 및 연구범위 ... 5
• 2. 연구수행내용 및 연구결과 ... 6
• 가. Target 항생제 2종에 대한 TRFIA 측정시스템 구성 ... 6
• 나. 바이오물질과 lanthanide chelate 확보 ... 7
• 다. 코팅항원 제작 및 항체 접합기술 확립 ... 9
• 라. 항생제 측정 TRFIA 연구 ... 12
• 마. 시료분석과 기존방법과의 비교 ... 23
• 3. 연구개발결과의 중요성 ... 28
• 4. 참고문헌 ... 28
• 5. 연구성과 ... 29
• 끝페이지 ... 29