초록 ▼

□ 연구개요
○ 갑상선 호르몬 독성평가에 활용 가능한 zebrafish 실험 모델 개발
- 관련 선행연구 및 갑상선 호르몬 교란 물질 노출 평가를 통하여 갑상선 호르몬 조절 및 독성에 중요한 핵심 유전자 선정
- Tol2 transposal element 유전자 재조합 기법 (또는 유전자합성 등)을 이용하여 형질전환에 필요한 construct 제작
- 미세주입(microinjection)을 통해 제작된 construct를 zebrafish embryo에 주입하고, founder에서 형질전환 확인과정(형광발현,

□ 연구개요
○ 갑상선 호르몬 독성평가에 활용 가능한 zebrafish 실험 모델 개발
- 관련 선행연구 및 갑상선 호르몬 교란 물질 노출 평가를 통하여 갑상선 호르몬 조절 및 독성에 중요한 핵심 유전자 선정
- Tol2 transposal element 유전자 재조합 기법 (또는 유전자합성 등)을 이용하여 형질전환에 필요한 construct 제작
- 미세주입(microinjection)을 통해 제작된 construct를 zebrafish embryo에 주입하고, founder에서 형질전환 확인과정(형광발현, 유전자 sequencing 등) 수행
- 면역염색법을 활용한 zebrafish 갑상선 호르몬 교란 평가법 확립
- 양성대조군(갑상선 호르몬 독성 유발 물질) 및 화학물질 노출을 통한 반응성 확인
○ HCS를 이용한 평가시스템 구축
- Zebrafish 모델(형질전환 모델 또는 면역염색법 모델)을 이용한 HCS 시스템 적용 및 조건 확립
- 양성대조군 및 환경성 화학물질 노출을 통한 HCS 갑상선 호르몬 독성평가 시스템 적용 시범 연구

□ 연구 목표대비 연구결과
○ 갑상선 호르몬 독성 및 약효 평가 시스템 구축
- 당초 계획은 형질전환 zebrafish를 개발하여 배양 시스템을 확보하는 것이었으나, 총 11번에 걸친 형질전환 시도(중복 포함 6종의 유전자 대상, 2가지 vector 적용) 결과, 갑상선 조직의 크기 및 해당 유전자의 발현 강도 등의 제한점으로 형질전환 line이 구축되지 않아, 대체 실험 모델로 활용할 수 있는 면역형광법 적용 zebrfiah 실험법을 구축함
○ HCS 적용 고속 대용량 평가 시스템 구축
- 면역형광법을 적용하여 HCS 시스템을 통한 고화질의 이미지를 확보할 수 있었으며, 개별 well의 이미지 최적화를 통해 HCS를 적용할 수 있었음
- 그러나, 초점의 개별화 및 갑상선 위치 자동 지정 등의 제한점으로 인해 현재 수준에서는 이미지 정량 분석 자동화에 한계가 있었음

□ 연구개발결과의 중요성
○ 대체 실험동물 모델로 최근 관심을 많이 받고 있는 zebrafish 모델을 이용하여 갑상선 호르몬 교란 영향 평가 실험 모델을 면역염색법을 이용하여 개발하였으며, 이를 통해 환경성 화학물질의 갑상선 호르몬 교란 또는 신규 후보물질의 약효 평가 등에 활용이 가능함
○ HCS 시스템의 zebrafish 갑상선 이미지 분석 적용에 제한점을 확인하였으며, 특정 조건에서 HCS 시스템 적용 및 제한점 해결방안 마련을 위한 고려점을 제시함

(출처 : 연구결과 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• ■ 필요성 ... 4
• ■ 최종목표 ... 5
• ■ 연구범위 ... 5
• 2. 연구수행내용 및 연구결과 ... 6
• ■ 핵심 유전자 파악 및 타겟 유전자 선정 ... 6
• ■ 형질전환 zebrafish 제작 ... 6
• ■ 면역염색법 적용 zebrafish 갑상선 호르몬 평가 모델 확립 ... 23
• ■ Zebrafish 면역염색법의 HCS 적용 가능성 확인 ... 26
• 3. 연구개발결과의 중요성 ... 28
• ■ 제브라피쉬 배아를 이용한 갑상선 호르몬 스크리닝 평가법 확립 ... 28
• ■ HCS 시스템을 통한 고속, 대용량 평가 시스템 구축 ... 28
• ■ 본 연구 결과의 중요성 ... 28
• 4. 참고문헌 ... 29
• 5. 연구성과 ... 30
• 끝페이지 ... 30