초록 ▼

□ 연구개요
본 연구는 소세포폐암의 특이적인 전사 조절인자 RBFOX를 동정하고, RBFOX의 소세포폐암 암줄기 세포능 획득에 대한 관련성을 확인하며, RBFOX 결합 전사체와 번역체 분석을 통해 암 줄기세포 유도와 관련된 소세포폐암 특이적 유전체를 도출하여 새로운 치료 타겟 유전체를 발굴하고자 하였다. 이에 RBFOX가 소세포폐암에서 특이적 RNA결합 단백질로 작용하는지 세포주와 조직에서 그 발현을 확인하고, 세포주 실험을 통해 RBFOX의 암줄기 세포능 관련성을 확인하며, RIP(RNA Immunoprecipitation)

□ 연구개요
본 연구는 소세포폐암의 특이적인 전사 조절인자 RBFOX를 동정하고, RBFOX의 소세포폐암 암줄기 세포능 획득에 대한 관련성을 확인하며, RBFOX 결합 전사체와 번역체 분석을 통해 암 줄기세포 유도와 관련된 소세포폐암 특이적 유전체를 도출하여 새로운 치료 타겟 유전체를 발굴하고자 하였다. 이에 RBFOX가 소세포폐암에서 특이적 RNA결합 단백질로 작용하는지 세포주와 조직에서 그 발현을 확인하고, 세포주 실험을 통해 RBFOX의 암줄기 세포능 관련성을 확인하며, RIP(RNA Immunoprecipitation) sequencing을 통해 전사/번역 과정에서 RBFOX와 관련되는 특이적 변이 유전체를 발굴하고 암 줄기세포능과의 관련성을 확인하고자 하였다.

□ 연구 목표대비 연구결과
◇ 소세포폐암에서 RBFOX 발현 확인
- Western blotting과 qRT-PCR 실험기법을 이용하여 NSCLC와 비교한 결과 SCLC에서 높은 수준의 RBFOX2,3가 발현하는 것을 확인할 수 있었다. 또한 immunocytochemistry를 통하여 사람의 소세포폐암 조직에서 RBFOX2,3의 cell 내부 위치를 확인하였다.
◇ 소세포폐암에서 RBFOX의 기능 확인
- siRNA를 처리하여 진행한 PCR에서는 RBFOX2의 knockdown을 확인할 수 있었으나 RBFOX3의 knockdown은 미미하였다. RBFOX와 EMT등과의 관련성 여부에 대한 추가 실험을 진행 중이다.
◇ RNA binding immunoprecipitation
- 암줄기세포를 분리하기 이전에 소세포폐암 세포주에서 가장 유효한 전사체가 RBFOX2,3와 결합하는지 확인하기 위해서 RNA binding immunoprecipitation을 진행하였다. 소세포폐암의 발암기전과 관련있다고 보고된 전사체인 ASCL1과 NEUROD1을 대상으로 진행한 결과, 해당 전사체들이 RBFOX2,3와 연관이 있음을 알 수 있었다. siRNA knockdown 후 해당 요소들을 대상으로 진행한 PCR에서 역시, RBFOX2,3의 감소에 따른 해당 요소들의 감소를 확인할 수 있었다.
◇ 암줄기세포 분리
- 암줄기세포를 찾기 위해서 CD44, CD133와 같은 암줄기세포 마커를 cell line에 염색하여 진행한 FACs에서 H69 cell line에서 균일한 정도의 세포가 마커에 의해 염색되는 것을 확인하였다.

□ 연구발성과의 활용 계획 및 기대효과 (연구개발결과의 중요성)
현재까지 소세포폐암과 관련하여 전사 조절인자에 대한 연구는 매우 드물다. 최근 들어 ASCL1, NEUROD1, YAP, DLL등 소세포폐암의 발암 기전과 관련된 전사인자들에 대한 연구가 진행되고 있는데, 전사조절인자들이 이러한 발암 기전과 관련된 전사조절인자와 연관성이 있는지에 대해서는 발표된 바가 없다. 본 연구는 소세포폐암에서 RBFOX가 특이적으로 발현한다는 것을 처음으로 확인하였고, RNA binding immunoprecipitation 결과 ASCL1과 NEUROD1과 같은 전사체들이 RBFOX와 관련이 있다는 것을 처음으로 확인하는 결과를 얻었다. 그러나 아직 보완과 반복을 통해 추가 검증이 필요한 부분이 있으며, 가설 검증을 위한 추가 실험이 필요하다. 추가 실험을 완료하여 학술지에 발표할 예정이다.

(출처 : 연구결과 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 1-1. 연구의 목표 ... 4
• 1-2. 연구의 필요성 ... 4
• 1-3. 연구의 가설 ... 4
• 1-4. 연구 범위 ... 4
• 2. 연구개발과제의 수행 과정 및 수행 내용 ... 4
• 2-1. 소세포폐암에서 RBFOX동정 ... 4
• 2-2. 소세포폐암에서 RBFOX의 기능 확인 및 암줄기세포 분리 및 RBFOX와의 관련성 확인 ... 6
• 3. 연구개발과제의 수행 결과 및 목표 달성 수준 ... 9
• 1) 정성적 연구개발성과(연구개발결과) ... 9
• 2) 세부 정량적 연구개발성과 ... 10
• 3) 목표 달성 수준 ... 10
• 4) 목표 미달 시 원인 분석 ... 10
• 4. 연구개발성과의 관련 분야에 대한 기여 정도(연구개발결과의 중요성) ... 11
• 5. 연구개발성과의 관리 및 활용 계획 ... 12
• 6. 참고문헌 ... 12
• [붙임1] 세부 정량적 연구개발성과 ... 13
• [붙임2] 연구책임자 대표적 연구실적 및 증빙(요약문 및 사본) ... 15
• 끝페이지 ... 26