[보고서]생태친화형 고성능 미세조류 개발

오희목

생태친화형 고성능 미세조류 개발
Development of eco-friendly and high efficiency microalgae 원문보기

보고서 정보
주관연구기관	한국생명공학연구원 Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology
연구책임자	오희목
참여연구자	박연일 , 이영숙 , 정병률 , 정원중
보고서유형	최종보고서
발행국가	대한민국
언어	한국어
발행년월	2019-08
주관부처	과학기술정보통신부 Ministry of Science and ICT
등록번호	TRKO202100019215
DB 구축일자	2022-03-12
키워드	미세조류.바이오매스.유용물질.지질.형질전환.microalgae.biomass.value compound.lipid.transformation.

초록 ▼

· 토착미세조류 648주 분리 및 우수한 미세조류주 선별/보존/무균배양유도 방법개발
· 미세조류(Chlorella, Ettlia, Nannochloropsis) Web DB　구축 및 유전자 발현 조절 시스템과 게놈　편집 기술 확립
· 지질대사 연관 유전자(신호전달, 수송, 분비) 및 전사인자 조절을 통한 바이오매스/지질 증대 미세조류 형질전환체 개발
· 오믹스 기반 미세조류 지질대사 조절 및 스트레스 반응 기작 규명
· 스트레스 기반 카르테노이드(루테인, 베타카로테인) 증대 조건 확립
· 4건의 기술이전

목차 Contents

표지 ... 1
제 출 문 ... 2
보고서 요약서 ... 3
요약문 ... 4
목차 ... 5
1. 연구개발과제의 개요 ... 6
가. 연구개발 목적 ... 6
나. 연구개발의 필요성 ... 6
다. 연구개발 범위 ... 10
2. 연구수행 내용 및 성과 ... 13
1세부-미세조류의 지방생산 유전자 개발 ... 13
2 세부 - 유전체, 생리·생태적 특성 기반 바이오 매스 조류개량 ... 61
3세부-미세조류 탄소 고정 재설계 ... 301
4세부-바이오연료 생산을 위한 미세조류의 유전적 변형과 생물학적 엔지니어링 ... 393
3. 목표 달성도 및 관련 분야 기여도 ... 433
3-1. 목표 ... 433
3-2. 목표 달성여부 ... 434
4. 연구개발성과의 활용 계획 ... 443
4.1. 활용계획 ... 443
4.2. 기대효과 ... 443
5. 참고문헌 ... 444
끝페이지 ... 455

표/그림 (300)

표 각 균주별 배양 조건에 따른 지질 염색 dye의 형광 세기 정도의 변화. sta6는 일반 조건 (A)에 비해 지질 합성을 유도하는 질소 결핍 조건 (B)에서 지방체에 대한 Nile red 형광 세기가 7배 이상 증가하였다
표 Chlamydomonas reinhardtii 균주들의 생장곡선. Chlamydomonas center로부터 분양받은 여러 종류의 Chlamydomonas 균주들의 생장을 알아보기 위해 고체 TAP 배지에 키워 각 시간별로 세포수를 세어 균주들 간에 생장을 분석했다
표 질소 결핍에 의한 Chlamydomonas의 지방체 형성 관찰. Chlamydomonas CC-2290 세포들을 질소가 첨가된 TAP 배지 (N+)와 질소가 결핍된 TAP 배지 (N-)에서 3일 동안 배양한 후 Nile red 와 BODIPY형광 시약으로 염색하여 형광현미경하에서 지방체를 관찰함. 질소결핍 조건에 의해 Nile red와 BODIPY의 형광이 증가됨을 확인
표 BODIPY와 Nile red의 형광 세기 비교. (A) BODIPY는 지질이 없는 조건에서도 매우 강한 형광 세기를 보이기 때문에 외부의 BODIPY에 대한 형광을 제거하는 방법이 필요하다. (B) Nile red는 지질이 없는 조건에서는 blank (증류수) 조건과 비슷한 형광값을 보인다
표 (A) Chlamydomonas에서 지질을 추출한 후 중성지방과 인지질을 분리하는 방법을 성공적으로 구축하였다. (B) 추출한 지질을 GC-MS를 이용하여 정성적 및 정량적 분석이 가능하다
표 삽입 돌연변이체를 이용한 지질합성 관련 돌연변이 선별. (A) CC-125 균주의 nucleus genome에 Hygromycin B 저항성 유전자인 APH7을 삽입하여 돌연변이체를 제작한다. (B) High-throughput screening을 실시한다. 중성지방을 염색하는 Nile red로 각각의 mutant를 염색한 후 형광세기를 multiplate reader로 비교하여 그 세기가 강한 돌연변이체를 선발한다. (C) Multiplate reader 뿐만 아니라 형광현미경을 통해 증가된 오일바디를 관찰한 후 1차 screening에서 선별된 돌연변이체를 2차, 3차 screening을 통해 재확인한다. (D) 3차 screening으로 부터 선별된 돌연변이체에서 지질을 추출한 후 thin layer chromatography (TLC), gas chromatography를 이용하여 정량적 및 정성적 분석을 통해 최종 돌연변이체를 선반한다
표 (A) 96-well plate와 48-well plate를 이용한 1차, 2차, 3차 screening 과정으로 3일 동안 배양한다. (B) 서로 다른 세 가지 조건(TAP(+N), TAP(-N), TAP(-N, -Acetate))에서 배양된 돌연변이체를 Nile red로 염색한 후 형광세기를 비교하여 중성 지방 함량이 변한 돌연변이체를 선별한다
표 Chlamydomonas chemical screening 개요
표 Chemical screening 선별 과정. 각 well에서의 cell density 및 Nile red 형광 값을 음성 대조군을 1 로 하여 그 상댓값을 도출하였다. FI/FIDMSO가 1.4 이상인 화합물질들을 선별하였다. 현재 10,000개의 chemical library중에서 6,480개의 library에 대해서 선별을 완료하였으며, 9개의 후보군을 선별하였다
표 Chemical screening을 통해 선별한 9개의 후보군들. 9개의 화합물질 중 1 개를 제외하고는 생장이 음성 대조군의 80% 수준으로 큰 영향을 받지 않았다. 한편 Nile red의 형광 세기는 음성 대조군에 비해서 40% 이상 증가한 것을 확인할 수 있었다
표 (A) Yarrowia의 지질 생성을 유도하는 chemical (E4) 및 derivates (E4OH, E4Bz)의 구조. (B) E4를 처리한 Yarrowia cell이 음성 대조군에 비해 BODIPY에 대한 형광 세기기 더 강하게 나타나는 것을 현미경을 통해 확인할 수 있었다. (C) E4 및 그 derivates인 E4OH와 E4Bz 역시 음성 대조군에 비해 BODIPY 형광 세기가 최고 86%까지 증가하였다
표 BFA의 지질 생성 효과 확인. (A) 현미경 관찰을 통해 BFA를 처리한 cell이 음성 대조군에 비해 지방체에 대한 형광 값이 증가한 것을 확인하였다. (B) Flow cytometry를 통해 BFA를 처리한 cell이 음성 대조군에 비해 Nile red 형광 세기가 큰 cell들의 수가 증가한 것을 확인하였다. (C) BFA를 처리하였을 때 음성 대조군에 비해 TAG의 축적량이 33% 증가하였다. (D, E) BFA에 대한 지질 증가는 탄소 및 질소 결핍 조건과는 독립적으로 일어난다. (F, G) Chlorella에 BFA를 처리하였을 때에도 지방체에 대한 Nile red 형광 세기가 증가한 것을 확인하였다
표 BFA 처리에 따른 TAG를 구성하는 fatty acid 조성과 membrane lipid 변화 분석. (A) BFA를 처리한 Chlamydomonas로부터 TAG를 추출한 후 GC-MS를 이용하여 fatty acid 조성을 조사한 결과 대조군에 비해 16:0, 18:0, 18:3(5,9,12)이 증가한 것을 관찰할 수 있었다. (B) Membrane lipid의 경우 ER을 구성하는 주성분의 하나인 DGTS의 양이 감소한 것을 발견했다
표 Fenpropimorph를 처리하여 변화한 Chlamydomonas의 TAG, phospholipids. Fenpropimorph는 곰팡이의 스테롤 합성을 억제하여 농업 및 산업 분야에서 곰팡이 약으로 사용되고 있는 화합물이다. (A) Fenpropimorph 처리한 Chlamydomonas는 대조구에 비해 4배 정도의 TAG를 축적했다. (B) Fenpropimorph 처리에 의해 축적된 TAG의 지방산 조성을 분석한 결과, 16:4(4,7,10,13)과 1 8:3(9,12,15)이 대조구보다 증가하였는데 이는 엽록체의 MGDG/DGDG를 주로 구성하는 fatty acid 로서, fenpropimoprh에 의하여 합성되는 TAG가 thylakoid membrane에서 유래하였음을 알 수 있었다. (C) Fenpropimoprh를 처리한 Chlamydomonas의 phospholipid를 분석한 결과 Chlamydomonas의 대표적 당지질인 MGDG와 DGDG의 양이 대조군 실험에 비하여 감소한 것을 확인했다
표 시간별 fenpropimorph 처리에 의한 Chlamydomonas의 TAG 축적 양상 (A) Fenpropimorph에 의한 TAG 축적은 그 반응 속도가 매우 빨라서 40분 만에 축적이 포화되었다. (B) 이 화합물을 처리한 Chlamydomonas에서는 대조군 실험에 비하여 총 지방산 양이 크게 변하지 않았다. 이로 미루어 보아 이 화합물에 의한 TAG합성은 신생합성이 촉진 되는 것이 아니라 기존에 있는 지질 또는 탄소원이 TAG로 전환되어 일어나는 것을 알 수 있었다
표 종자의 저장 지방 합성에 관여하는 ABCA9의 기능 연구. (A) ABCA9을 과발현한 mutant는 야생종에 비해 큰 종자를 생성했다. (B) ABCA9을 과발현한 mutant 종자에서 야생종에 비해 종자의 TAG 함량 증가함. (C) ABCA9을 과발현한 mutant 종자의 배아 세포는 야생형보다 증가함. (D) 야생종과 mutant의 배아를 분리하여 14C-acetate, 14C-oleyol-CoA, 14C-Oleic acid가 포함된 buffer에서 uptake assay 수행하여 TAG를 추출해 DPM 값을 측정한 결과, mutant의 경우 14C로 label된 fatty acid를 TAG 합성 장소인 ER로 수송하는 능력이 상실되어 야생종에 비해 TAG 합성이 적게 된 것으로 생각한다
표 ABCG26의 knockout 돌연변이체는 종자를 거의 맺지 못하였는데 (A, abcg26-1과 abcg26-2), 꼬투리의 발달 자체에 문제가 있었다 (B, abcg26-1과 abcg26-2). 꽃을 관찰한 결과, 돌연변이체가 성숙한 꽃가루를 만들지 못하는 것이 원인임을 발견하였고 (C, abcg26), ABCG26이 꽃가루 벽 형성 시기에 매우 특이적으로 융단층에서 발현한다는 것을 알아내었다 (D, blue signal). 과연 돌연변이체는 꽃가루 벽을 제대로 형성하지 못하였고 (E, abcg26), 반대로 꽃가루 벽 지질의 전구체를 만들어 내보내는 융단층 안에는 밖으로 나가지 못한 전구체로 보이는 물질들이 돌연변이체에 축적되어 있었다 (F, abcg26).
표 꽃가루 코트 지질 형성에 관여하는 ABCG9과 ABCG31의 기능 연구. Anther에서 강하게 발현하면서, 서로 발현양상이 유사한 ABCG9와 ABCG31 (A, blue signal)을 분리하였고, double knnockout 돌연변이체 abcg9 abcg31을 제작하였다. abcg9 abcg31 식물은 정상적인 조건에서 꽃가루의 활성이 야생종이나 single knockout 돌연변이체에 비해 절반 정도로 떨어져 있었고 (B, abcg9 abcg31-1, abcg9 abcg31-2), 이는 습도가 높은 조건에서 다시 회복되었다 (C, abcg9 abcg31-1). abcg9 abcg31 꽃가루는 건조한 조건에서 쉽게 찌그러지거나 서로 뭉쳐져 존재하는 모습을 보였고 (D), 이런 결과가 환경적인 스트레스에 꽃가루가 잘 견디지 못한 때문이라 생각하여, 또 다른 환경 스트레스인 저온 조건에서 종자의 생산성을 비교한 결과, abcg9 abcg31 식물은 야생종이나 single knockout 돌연변이체들에 비해 종자를 거의 맺지 못하였다 (E, cold, abcg9 abcg31-1). abcg9 abcg31 꽃가루는 코트 발달이 미성숙한 표현형을 보였는데 (F, abcg9 abcg31-1), 꽃가루의 지질 분석 결과, streyl glycoside 함량이 감소해있었고 (G, abcg9 abcg31-1), steryl glycoside를 합성하지 못하는 돌연변이체도 abcg9 abcg31처럼 꽃가루의 활성이 감소하고 (H, pollen viability, ugt80A2 ugt80B1)건조 조건에서 쉽게 꽃가루가 찌그러지는 것을 관찰하였다 (H, EM picture, ugt80A2 ugt80B1)
표 Chlamydomonas의 ABCA2의 분자 생화학적 분석 결과. (A) ABCA2의 세포 내 위치 분석. (B) 야생종과 ABCA2 과발현체의 TAG 함량 분석
표 야생종 (WT) 과 돌연변이 (E3L) 의 nile red assay
표 야생종 (WT)과 E3L에서 흡광도와 세포 수의 관계 비교
표 E3L에서 insertion site 탐색 및 유전자 발현 확인
표 투과 전자현미경 (Transmission Electron Microscopy) 를 이용한 야생종 (WT) 과 E3L의 내부구조 관찰
표 야생종 (WT) 과 E3L의 starch 양 비교
표 애기장대, 벼, Chlamydomonas의 Maltose Transporter (MEX)의 아미노산 서열 비교
표 Mutant 1-12의 TAG 표현형 분석. (A) 질소결핍 조건에서 야생종과 mutant 1-12를 배양한 후, 단위 바이오매스 (Cell OD750) 당 nile red의 형광세기를 비교한 결과 1-12에서 그 강도가 낮은 것을 관찰하였다. (B) 동일한 조건에서 배양한 세포로부터 TAG를 추출한 후 GC-MS를 이용해 TAG 양을 분석한 결과, 1-12가 단위 바이오매스 당 적은 양의 TAG를 함유하고 있는 것으로 나타났다. (C) 하지만 전체지질에 포함된 TAG 양을 비교하였을 때는 야생종에 비해 1-12에 더 많은 양의 TAG가 존재하였다. 이는 1-12 세포의 크기가 야생종에 비해 작으므로 (D) 바이오매스 당 중성지방의 양은 야생종보다 적지만 (A, B) 세포 내 지질성분 당 포함된 TAG의 합성은 증가한 것을 의미한다
표 mutant 1-12 genome 상의 AphVII 삽입위치 동정. (A) Inverse PCR을 이용하여 mutant 1-12 genome의 SDR 유전자 3’ UTR region에 AphVII이 삽입된 것을 동정하였다. (B) RNA 발현 정도를 분석한 결과 SDR의 발현이 현저히 감소하였을 뿐만 아니라 인접한 유전자인 LPAAT1의 발현 또한 증가한 것을 관찰할 수 있었다. (C) Chlamydomonas SDR 단백질과 유사한 애기장대 SDR 단백질 (오른쪽)은 엽록체 내부로 단백질을 수송하는데 중요한 역할을 하는 TIC complex의 구성요소 중 하나이며, LPAAT1 (lysophosphatidic acid acyl transferase, 왼쪽)은 lysophosphatidic acid (lysoPA)의 sn-2 position에 acyl-CoA를 연결하는 효소로 알려져 있다. 특히 CreLPAAT1은 애기장대의 색소체에 존재하는 AtLPAAT1과 유사하였다
표 mutant 1-12의 지질분석. (A-C) 질소결핍 조건에서 배양된 세포에서 지질을 추출하여 전체 지방산 조성(A, B) 및 phosphatidyl glycerol (PG, C)을 분석하였다. 그 결과 야생종과 비교하여 1-12에 더 많은 C16 지방산과 PG가 존재하는 것을 관찰할 수 있었다. 이러한 표현형은 (D)에서 설명된 것과 같이 CrLPAAT1의 발현이 증가하여 lysoPA에 C16 지방산의 ester 결합이 촉진된 것에 기인할 것으로 추측된다
표 돌연변이 1-12의 E.coli complementation 실험. Chlamydomonas LPAAT1 유전자는 E.coli lpaat 돌연변이체의 표현형을 회복시킴. Chlamydomonas LPAAT1을 도입한 E.coli lpaat mutant는 42℃에서 배양하여도 돌연변이체에 비하여 잘 성장하였다 (A). 그리고 16:0 지방산이 감소하는 표현형도 회복되었다. 이는 Chlamydomonas LPAAT1이 LPAAT로서의 생화학적 활성을 가진다는 것을 의미한다 (B)
표 Mutant 1-12에 축적되는 TAG의 양과 엽록체 막 지질인 MGDG와 DGDG의 지방산 조성 분석. 1-12는 TAG를 더 높은 수준으로 축적하였고 (A), 색소체 내부의 지질에서 발견되는 MDGD와 DGDG에서 지방산 조성이 야생종과는 달랐다 (B)
표 CrLPAAT1의 세포내 위치 분석 실험
표 소포체 스트레스 조건에서 Chlamydomonas의 반응 (A) Chlamydomonas (CC-4533)에 다양한 농도(0, 1, 5, 10 μg/ml)의 소포체 스트레스 유도 화합물인 tunicamycin (Tm)을 처리했을 때 시간에 따른 반응 (0, 12, 24, 48 hours) (B) 현미경으로 관찰한 Chlamydomonas 배양액 (A). Black arrow heads, 뭉쳐있는 세포들; white arrow heads, chlorosis가 일어난 세포들 (C) Tunicamycin 처리 조건에서 배양액 내 Chlamydomonas의 총 세포수 (왼쪽), 관찰된 세포수 (오른쪽)
표 Yeast 돌연변이체 Δire1 mutant를 이용한 Chlamydomonas IRE1 (CrIRE1)의 complementation test. (A) 실험에서 사용한 다양한 IRE1 단백질 구조. (B-C) 다양한 형태의 IRE1으로 형질전환된 Δire1 yeast strain KMY1515 의 성장 비교 (D) IRE1으로 형질전환된 효모에서 측정한 소포체 스트레스의 세기 비교
표 새로운 Chlamydomonas 돌연변이체 ire1-1 , ire1-2 순수분리. (A) Chlamydomonas 돌연변이체 ire1-1 , ire1-2 의 insertion cassette 위치. (B) ire1-1 , ire1-2 돌연변이체의 genotyping 결과. (C) 소포체 스트레스 조건에서 ire1-1 , ire1-2 돌연변이체의 CrIRE1 발현양상
표 ire1 돌연변이체의 소포체 스트레스 반응성 및 표현형 관찰 (A) Tunicamycin 처리 조건에서 ire1 돌연변이체의 chlorosis (B) Tunicamycin 처리 조건에서 ire1 돌연변이체 cytolysis 현상 관찰. Red arrow heads, cytolysis of ire1 mutant cells. (C) Tunicamycin 처리 조건에서 배양액 내 Chlamydomonas의 총 세포수 (위), 관찰된 세포수 (아래) (D) Tunicamycin 처리 조건에서 Chlamydomonas의 엽록소 양 비교 (E) Tunicamycin 처리 조건에서 발생한 lipid droplet 비교 (F) Tunicamycin 처리 조건에서 축적된 TAG 정량 비교
표 crire1 돌연변이체의 tunicamycin(Tm) 민감성 표현형에 대한 유전학적 분석 (A) Tetrad 분석방법을 이용한 표현형과 유전자형의 상관성 증명 (B) 돌연변이체 ire1-1 , ire1-2 의 insertion cassette 위치. (C) 돌연변이체 ire1-1 , ire1-2 배수체(diploid) 의 유전자형 분석. (D) Spot assay를 이용한 돌연변이체 ire1-1 , ire1-2 배수체의 tunicamycin 민감성 조사
표 돌연변이체 ire1 의 소포체 민감성과 ROS의 관련성. (A) 야생종(CC-4533)과 돌연변이체 ire1 의 산화적 스트레스 반응 유전자의 발현 양상 (B) 야생종(CC-4533)과 돌연변이체 ire1 의GSH synthetase 유전자들의 발현 변화 (C) Tunicamycin 처리 조건에서 야생종(CC-4533)과 돌연변이체 ire1 의 총 GSH 정량 비교 (D) Tunicamycin 처리 조건에서 돌연변이체 ire1 에 GSH를 공급해줬을 때 회복능력 측정
표 소포체 스트레스 처리 조건에서 마커 유전자의 발현 패턴 변화
표 소포체 스트레스 센서 Chlamydomonas IRE1의 타겟 전사인자 bZIP1 동정(A) Chlamydomonas bZIP 전사인자들의 phylogenetic tree 분석 (B) 소포체 스트레스 조건에서 소포체 스트레스 센서 IRE1에 의해 splicing 되는 bZIP1 전사인자 발견. Unspliced bZIP1, bZIP1u; spliced bZIP1, bZIP1s. (C) bZIP1u mRNA 와 bZIP1s mRNA 의 구조 (D) bZIP1u 와 bZIP1s 아미노산의 구조 (E) Anti-bZIP1 antibody를 이용한 western blot 의 결과 (F) Transient expression을 이용한 bZIP1u-sGFP 의 세포 소기관내 위치. Bars= 50μm (G) 효모 돌연변이체 hac1p을 이용한 Chlamydomonas bZIP1s 의 complementation test
표 Chlamydomonas bZIP1 돌연변이체의 소포체 스트레스 표현형 분석. (A) 소포체 스트레스 조건에서 야생종과 bzip1 돌연변이체, complementation line의 chlorosis 표현형 분석 (B) 야생종과 bzip1 돌연변이체, complementation line의 성장 및 tunicamycin 처리 조건에서의 세포 활성 분석
표 bzip1 돌연변이체의 소포체 스트레스 마커 유전자 분석 결과
표 Chlamydomonas의 bZIP1 전사인자는 소포체 스트레스 조건에서 DGTS의 합성을 조절한다. (A) bzip1 돌연변이체는 소포체 스트레스 조건에서 야생종과 달리 DGTS의 합성을 촉진시키지 못 하였다. (B) DGTS합성 모식도 (C) 소포체 스트레스 조건에서 DGTS합성 효소 BTA1의 발현 분석 (D) bZIP 전사인자와 BTA1 promotor의 yeast one hybrid 실험 결과
표 bZIP1 전사인자는 소포체 스트레스 조건에서 pinolenic acid의 합성을 조절하였다. (A) 전체 지질과 DGTS에서 pinolenic acid의 함량 비교 분석 (B) Pinolenic acid 합성 경로 (C) 소포체 스트레스 조건에서 pinolenic acid 합성에 관여하는 유전자들의 발현 분석 (D) Yeast one hybrid 실험을 통한 CrDES promoter와 bZIP1 전사인자의 binding 분석 결과 (E) crdes 돌연변이체의 tunicamycin 민감성 테스트 결과
표 소포체 스트레스 조건에서 bzip1 돌연변이체의 DGTT1과 PDAT1 유전자 발현 분석 결과 (A) PDAT1과 DGTT1에 의해 매개되는 TAG 합성 메커니즘 (B) Tunicamycin 처리 조건에서 DGTT1과 PDAT1의 발현 분석 비교
표 crdes 돌연변이체 분리 및 분석 (A) crdes 돌연변이체의 유전자형 분석, (B) 글리세롤 지질(glycerolipids), 전체 지방산 (Total FAs), PE, DGTS의 총 량. crdes1-1 와 crdes1-2 돌연변이체에서 제거되거나 감소한 pinolenic acid (파란 화살표), coniferonic acid (녹색 화살표)를 표시하였고 증가한 alpha-linolenic acid (빨간 네모 상자)를 나타냄
표 crdes 돌연변이체는 소포체 스트레스 조건에서 감수성을 보임 야생종 (C-9,CC-4533), 돌연변이체 (crdes1-1, crdes1-2, crbzip1-1, crbzip1-2) 의 스팟 테스트
표 RNA sequencing을 통한 소포체 스트레스 조건에서의 막 지질 생합성 경로 규명
표 BLZ8 돌연변이체의 마커 유전자 삽입 위치 및 발현양 분석 (A) Chlamydomonas와 애기장대의 bZIP 전사인자를 이용한 phylogenetic 분석 (B) BLZ8 전사인자의 모식도 및 blz8 돌연변이체의 마커 유전자 삽입 위치 (C) blz8 돌연변이체의 BLZ8 발현 분석 결과
표 blz8 돌연변이체의 산화적 스트레스 표현형 분석 결과 (A) blz8 돌연변이체의 superoxide를 일으키는 화합물에 대한 내성 분석 (B) blz8 돌연변이체의 peroxy-radical을 일으키는 화합물에 대한 내성 분석
표 blz8-1 돌연변이체에 BLZ8 gDNA fragment를 이용한 complementation test. (A) 야생종 균주, blz8 결손 균주, 그리고 두 개의 complementation 균주의 BLZ8 발현량 (B) 두 개의 complemenation 균주의 산화적 스트레스 저항성 테스트
표 클라미도모나스 bZIP 전사인자 BLZ8의 전사체 분석 (A) 산화적 스트레스 조건에서 BLZ8 OX 균주의 전사체 분석 결과의 상관관계 행렬 (B) BLZ8의 하위 유전자로 예상되는 CCM 관련 유전자군
표 blz8 돌연변이체의 낮은 CO2 높은 pH 스트레스 조건에서 표현형 분석 결과 (A) 낮은 CO2 높은 pH 조건에서 blz8 돌연변이체의 성장 표현형 분석 (B) 낮은 CO2 높은 pH 조건에서 blz8 돌연변이체의 chlorophyll a+b 정량
표 낮은 CO2 조건에서 CCM 유전자의 발현량 분석
표 BLZ8 전사인자의 작용 기작
표 Chlamydomonas DTH1 단백질의 돌연변이체 선별 (A) Chlamydomonas의 DTH1 유전 정보와 각각의 돌연변이체의 마커 유전자 삽입 위치 (B) 3개의 crdth1 돌연변이체의 genotyping 결과
표 질소 결핍조건(N-)과 질소원을 재공급되는 regrowth 조건(N+)에서의 CrDTH1의 발현 패턴 분석
표 crdth1 돌연변이체의 TAG 함량 분석 (A) 야생종 (dw15)와 돌연변이체 dth1-1의 TAG 함량 분석 결과 (B) 야생종 (CC4533)와 돌연변이체 dth1-2, dth1-3의 TAG 함량 분석 결과
표 돌연변이체 crdth1의 lipid droplet 형광 관찰 (A) Regrowth 조건에서 야생종 (dw15)과 dth1-1 돌연변이체의 nile red로 염색한 형광 현미경 사진 (B) Regrowth 조건에서 야생종 (CC4533)과 dth1-2, 1-3 돌연변이체의 nile red로 염색한 형광 현미경 사진
표 Apolipoprotein-like protein과 구조적 유사성을 보이는 CrDTH1AP 펩타이드를 순수 분리함 (A) CrDTH1의 중간 지점에 Apolipoprotein-like protein domain과 구조적 유사성을 보이는 부분 표시 (B) MBP가 결합된 CrDTH1AP 펩타이드 제작 (C) Amylose resin을 이용한 CrDTH1AP 펩타이드를 순수분리하여 coomassie blue staining(좌) 과 western blotting(우) 수행한 결과
표 Lipid binding assay를 통해 recombinant CrDTH1AP이 Phosphatidylethanolamine(PE)과 특이적으로 결합하는 활성 관찰함
표 Chlamydomonas에서 지질 축적에 중요한 역할을 하는 전사인자 탐색
표 Chlamydomonas에서 지질 축적을 조절하는 전사인자 스크리닝
표 질소 결핍 조건과 소포체 스트레스 조건에서 발현이 상승하는 Chlamydomonas MYB1 전사인자 선정
표 다양한 스트레스 조건에서 myb1 돌연변이체의 반응와 지질 축적 감소 표현형 관찰. 야생종 (CC-4533) 과 myb1-1 돌연변이체에서 스트레스 조건 (질소 결핍조건, 인 결핍조건, 소포체 스트레스 조건) 에서 축적하는 전체 지방산과 TAG의 양을 측정함
표 myb1 돌연변이체 순수분리 (A) myb1 돌연변이체의 유전형 분석, (B) MYB1 단백질의 topology 분석 (C) 야생종 (CC-4533) 과 myb1 돌연변이체에서 측정한 질소결핍조건에서 MYB1 유전자의 발현량 변화
표 질소 결핍조건에서 지질 합성에 관여하는 MYB1 전사인자의 역할의 유전학적 검증
표 야생종 (CC-4533) 과 myb1 돌연변이체 간의 지방산 조성 비교. 야생종과 myb1 돌연변이는 질소 결핍조건에서 3일간 처리한 뒤 GC-FID를 이용하여 지질 분석을 진행하였음
표 야생종(CC-4533) 과 myb1 돌연변이체에서 엽록체 유래 지방산 을 수송하는 FAT1 유전자의 발현 비교 (A) Chlamydomonas의 TAG 대사경로와 엽록체에서 합성된 지방산을 소포체로 수송하는데 FAT1 단백질의 대사경로 상의 위치 (B) 질소결핍조건에서 FAT1 유전자의 발현량 변화
표 다양한 미세조류의 서식환경(채집지)
표 고체배지에서 분리한 미세조류 현미경 사진(x200, x400)
표 국내 토착 미세조류의 채집, 분리 및 확보 현황
표 FACS를 이용하여 분리한 미세조류의 현미경 사진(x200)
표 미세조류 서식지(가: 실전지, 나: 문동저수지, 다,라: 부남호 일대)
표 광학현미경으로 관찰된 미세조류의 사진(X400)
표 국내 토착 미세조류의 채집, 분리 및 확보 현황
표 1차년도 선별된 미세조류의 광학현미경 사진(x200, x400)
표 2차년도 선별된 미세조류의 광학현미경 사진(x200, x400)
표 1차년도 선별된 총 15주의 총 지질 함량 분석
표 2차년도 선별된 총 21주의 총 지질 함량 분석
표 1차년도 선별된 미세조류(천안 6, 당진 6, 제주 3)의 생장곡선
표 2차년도 선별된 미세조류(순천 4, 충남 15, 하수처리장 2)의 생장곡선
표 선별된 미세조류 15주의 biomass 생산성, 지질 함량 및 지질 생산성
표 10% 이산화탄소 조건에서 배양된 4종의 분리균주 생장 특성
표 분리 한 YC001과 NCBI database의 18S rDNA 염기서열을 바탕으로 분석된 phylogenetic tree
표 공기 및 5%, 10% CO2 공급으로 배양된 Ettlia sp. 생장곡선
표 다양한 농도의 이산화탄소를 공급한 조건에서 Ettlia sp. YC001의 지질함량 및 지질생산성
표 녹색과 적색의 Ettlia sp. YC001에서 클로로필과 카로테노이드의 함량 비교
표 혼합배양 후 배양 시간에 따른 chlorophyll-a 변화
표 Co-cultured 실험군과 대조군의 oleic acid 함량 비교. A, GC profiles of single cultured B. braunii; B, GC profiles of co-cultured B. braunii
표 Co-cultured 후 B. braunii의 지방산 함량 변화
표 Axenic 유도 방법
표 Ettlia xenic에서 분리 된 박테리아
표 항생제 cocktail AC-3 과 AC-5의 미세조류 생존률과 박테리아 저해률
표 Xenic(a, b) 와 Axenic (c, d)의 SYBR green 염색 관찰
표 SEM 관찰. (a) xenic, (b) axenic
표 FACS 분석. (a) xenic (b) axenic (c) population results
표 sonication 세기와 시간의 Contour plots. Scenedesmus sp.(a)와 옥외 배양시스템에서 채취한 미세조류(b)
표 FACS 분석의 다양한 분석인자와 Scendesmus sp. 선택 특이성에 대한 관계도
표 개발한 타겟 미세조류의 분리방법에 대한 비교
표 sonication 세기와 시간의 Contour plots. Scenedesmus sp. 특이적 구간(a)과 환경 미세조류 군집의 SSC-CV(b)
표 Chlorella vulgaris의 주(strain) 수준의 식별을 가능하게 하는 chloroplast based specific locus
표 Chlorella vulgaris의 주(strain) 수준의 식별을 가능하게 하는 chloroplast based specific locus의 염기서열 정보
표 1단계 연구에서 개발된 microsatellite 마커의 combined genotype
표 Chlorella vulgaris의 chloroplast based specific locus의 유전자형(SNP; genotype)
표 FAME 함량 변화. 반응조건(상)과 바이오매스 생산량 대비(하)
표 다양한 종에서 two-step transesterification을 이용한 바이오디젤 생산량 비교
표 바이오매스 증가(상)와 바이오매스 당 FAME 변화에 따른 FAME 함량 비교
표 30시간 이내 저온 스트레스동안의 유전자 발현 수준 비교
표 저온 스트레스동안 Ettlia sp.의 생리학적 특성
표 3가지 독립변수에 대한 설정 값
표 저온스트레스가 동결보존 생존률에 미치는 영향
표 RSM 기반 3가지 변수에 대한 15개 실험 설계와 CFU 결과
표 Two-step 방법을 통한 최적 보존 조건
표 Vitrification을 통한 해동온도에 따른 생존률 영향
표 10% methanol을 사용해 동결보존된 Ettlia sp.의 생존률을 평가하기 위한 RSM의 contour plots
표 최적조건으로 동결보존 된 Ettlia sp.의 장기보존 검증
표 Chlamydomonas의 지질 합성 대사
표 지질대사유전자 발현 조절을 통한 지질대사회전 연구 및 중성지질 증대 미세조류주 개발
표 qRT-PCR을 통한 BTA1 gene expression level 확인
표 gPCR(a)와 2가지 제한효소를 이용한 Southern blot(b, c)
표 Chlamydomonas reinhardtii CC-124의 4일간 배양 후, phenotype 분석
표 FAME 분석을 통한 당, 인지질의 정량분석
표 DGTS의 정량분석(위) 및 mol%(아래) 분석
표 MGDG의 정량분석(위) 및 mol%(아래) 분석
표 Nile red 염색을 통한 LD의 fluorescence intensity
표 qRT-PCR을 통한 ER stress marker Bip1 유전자의 발현 비교
표 Nile red 염색을 통한 Confocal image
표 TAG의 FAME 정량 분석
표 미세조류 지질대사 재편 기술을 통한 중성지질 증대 기작
표 Ettlia Transformation Tool-box 개발 순서도
표 Ettlia antibiotics susceptibility test
표 Ettlia sp. Axenic broth culture (TAP medium)의 생장곡선
표 Electroporation 최적화를 위한 parameter
표 pCR102 vector map
표 Electroporation 의 Electric field에 따른 transformation efficiency
표 2차 선별을 위한 다양한 Hygromycin 농도에서 Transformats 생장 결과
표 전사체 분석을 통한 세포 성장 단계에 고발현 유전자 탐색 (a) 및 배양 시간에 따른 4개의 promoter 후보 유전자의 발현 분석(b)
표 Gene annotation 결과를 바탕으로 gene structure 분석
표 FGENESH을 이용한 psaD promoter 예측
표 Ettlia의 psaD와 crt 유전자의 프로모터 구성요소 분석
표 CRT와 psaD promter를 포함한 vector map
표 Ettlia sp.와 다른 미세조류의 GC contents
표 CFP의 codon 최적화
표 DNA copy number를 확인하기 위한 southern blotting
표 Hygromycin 생존성 (a), cDNA 수준에서 aphVII과 CFP PCR (b), 및 CFP probe를 사용한 western blotting (c)
표 qRT-PCR을 통한 CFP 발현 수준과 CFP flourescence intentsity에 기초한 두가지 promoter 효율 비교
표 FACS를 통한 CFP event의 shifting 비교
표 Confocal image를 통한 CFP 발현
표 Chlamydomonas의 전사인자 Class 별 정보
표 질소결핍조건에서 Chlamydomonas 의 막 지질(a)과 중성지질대사(b)와 전사인자의 네트워크 분석[Gargouri et. al. 2015]
표 GO, EggNog, UniportKB의 DB 기반 annotation 된 Ettlia 전사인자의 분석
표 Ettlia의 bHLH Class의 2가지 isoforms 유전자 구조
표 Ettlia의 bZip, MYB, bHLH class의 전사인자
표 Ettlia의 Ire1 전사인자의 유전자 구조
표 Ettlia의 Wri의 Class의 3가지 유전자 구조
표 식물에서 Orange protein의 역할(Park et al. 2016, Kang et al. 2017)
표 Ettlia의 carotenoid synthesis pathway에서 Annotation 된 대사관련 효소 (color boxed)
표 Orange protein의 상동성 비교
표 Or protein의 Ettlia와 Chlamydomonas O/E 전략
표 CRISPR-Cas9의 Ettlia 적용 실험 전략
표 Carotenoids 생합성 경로
표 5-FI (5-Fluoroindole) 존재 하에 Ettlia wild type의 독성 측정
표 cDNA기반 Ettlia target gene PCR 확인
표 CRISPR를 적용하기 위한 target gene 정보
표 Ettlia PSY 정보 및 Blast search
표 Ettlia PDS 정보 및 Blast search
표 Ettlia TBS 정보 및 Blast search
표 Ettlia PDS gene structure 및 creRNA 디자인
표 PSY gene과 TSB gene의 구조 및 sgRNA의 위치(빨간색:　First exon 시작지점, 초록색: Exon지역, 무색: Intron 지역, 하늘색: Forward Primer, 주황색 : Reverse Primer, 보라색: sgRNA와 붙는 지역)
표 (a) PSY gene과 TSB gene의 in vitro assay결과, (b) 작동한 sgRNA의 정보
표 CRISPR-Cas9 기반 Knock In/out 전략
표 In vivo test를 위한 실험 설계
표 형질전환체 선별 결과 (a) Positive conolies 의 선별(a) 및 T7E1 처리를 통한 cas9 작용 결과 확인(b)
표 50ug Cas9 적용시의 PSY 유전자 교정 Indel 확인결과
표 RNPs와 ssODNs의 동시전달을 통한 Chlamydomonas 에서의 유전자 교정 효율 증대 (Ferenczi et. al. 2018)
표 2가지 Ribonucleoprotein(Cas9, cpf1)의 정제(a)와 상용화 된 enyme과 효율비교(b)
표 효소 정제에 사용된 3개의 plasmids
표 In vitro cleavage assay를 통하여 3가지 유전자별 crRNA의 검증 (a) 및 생산 된 돌연변이체의 생리적 특성 기반 선별 ((b)△zep : NPQ 감소, (c)△psy : colorless or pale green)
표 단서열(Paired-End)라 이브러리 제작
표 Ettlia genome assembly
표 Ettlia genome paired-end 데이터 (HiSeq2000)
표 Ettlia genome paired-end 데이터 (MiSeq)
표 Ettlia genome mate-pair 데이터 (HiSeq2000)
표 Scaffolding result
표 유전체 서열 및 구조분석 파이프라인
표 유전체 정보 (a)와 예측 된 유전자(b) 정보
표 Ettlia 유전체 연구 진행도
표 ISO-seq 진행절차
표 Size library의 SMRT raw 데이터 정보
표 SMRT raw 데이터의 read length
표 SMRT raw 데이터의 Quality 체크
표 SMRT raw 데이터의 분류별 정보 요약
표 Size Library별 Consensus isoforms 정보
표 최종 annotation 된 ISO-seq 정보 요약
표 Blastx-GO 분석 요약
표 Prokayote, Chlorella 2종, Chlamydomonas 2종 기반 KEGG 분석
표 Gene modeling을 위한 전체 작업과정
표 NGS 생산 Raw 데이터 QC
표 Transcriptome 과 Iso-seq Assemble을 통한 대표 유전자 셋 선별
표 대표 유전자 셋의 Contigs 분포도
표 유전자 셋의 통합 분석을 통한 대표 유전자 셋 선별
표 유전자 구조 구성에 따른 대표유전자 셋 비율
표 Annotation 된 유전자의 높은 상동성을 갖는 종 분포
표 Ettlia에 적용 된 분석 모식도
표 Ettlia 유전제, 전사체 원본 정보
표 대표 유전자 선발 과정
표 대표 유전자 중 서열 정제 작업을 통한 유전자 선정
표 NR plant(Viridiplantae)를 이용하여 대표 서열을 annotation하는데 사용된 유전자의 종별 개수
표 1차 선정된 대표 유전자(33,123)에 대하여 2차 서열정제 작업
표 TopHat mapping을 통한 2차 서열 정제작업
표 최종 선발된 유전자와 다른 미세조류 게놈 정보와의 비교
표 최종 선발된 유전자 세트
표 Ettlia Web-DB 구현
표 4가지의 DB를 통한 예측된 유전자의 상동성 분포
표 이성질체 유전자 분석
표 RbcS2의 유전자 구조 분석
표 단밸질 서열을 통한 유전자 구조 분석 보완 작업도
표 KEGG 분석으로 annotation 된 gene과 pathway 정보
표 KEGG 분석으로 Ettlia 유전자와 높은 상동성을 가진 미세조류
표 Biological process 기준으로 annotation 분석 된 Ettlia의 pathway
표 Glycolysis와 Gluconeogenesis pathway in Ettlia
표 TCA cycle pathway in Ettlia
표 Fatty acid biosynthesis pathway in Ettlia
표 광합성 안테나 수용 단백질 관련 유전자 정보
표 광합성 관련 유전자 정보
표 Glycerol lipid 대사 경로와 유전자 정보
표 ER 단백질 수송과 관련된 경로와 유전자 정보
표 ABC transporter 관련 유전자
표 Homologous recombination 경로와 유전자 정보
표 Chlamydomonas의 RNAi 관련 pathway
표 Ettlia의 RNAi 관련 protein search
표 Ettlia mRNA surveillance pathway 와 annotation protein(highlighted enzyme)
표 Ettlia RNA degradation pathway 와 annotation protein(highlighted enzyme)
표 ).
표 RNA-seq method (De novo assmbly)
표 RNA-seq 데이터 분석. Blast search 요약 (a), Blast matched 종 분포(b), GO 분석으로 category별 분포 (c)
표 log2 (Fold change) >6 데이터의 Heat map (a)과 up or down expression pattern (b)
표 log2 (Fold change) >6 의 KEGG category 분석
표 Carotenoid synthesis pathway
표 Porphyrin과 Chlorophyll 대사의 전사체 발현 패턴
표 Porphyrin과 Chlorophyll 대사경로
표 Ettlia genome circle 확인용 primer
표 Ettlia 와 다른 미세조류 mitochondria genome 특성 비교
표 Ettlia mitochondria genome map(a)과 2개(b, c)의 the complementary Inverted repeat gene(IR1,2,3)
표 UV-A 조사에 따른 카로테노이드 색소체 함량 및 지질 함량 변화
표 질소 결핍 조건에 따른 카로테노이드 색소체 조성 변화 및 지질 함량 변화
표 질소 고갈 조건의 Ettlia sp. 세포 색변화
표 질소 고갈 조건의 Ettlia sp. FAMEs 조성 변화
표 질소 고갈 및 고 광도 double-stress에 따른 Ettlia sp. 내 카로테노이드 조성 변화(A) 및 FAMEs 조성 변화(B)
표 광질 및 온도에 따른 Ettlia sp.의 최대 바이오매스 생산, 루테인 함량, 그리고 생산성
표 (A) 배양에 사용된 Ettlia sp. 현미경 사진 (B) 배양 0일차 광생물반응기
표 Green cultivation 배양의 바이오매스 및 지질 생산성 결과 그래프
표 (A) Red cell로 전환된 Ettlia sp. 광생물배양기 (B) 바이오매스 및 지질 함량 결과 그래프
표 Ettlia sp. 세포 내 카로테노이드 구성성분 변화
표 Tunicamycin 농도와 시간에 따른 Nile red fluorescence intensity
표 Tunicamycin 처리 16시간 후 농도에 따른 Nile red fluorescence intensity
표 Lipid droplets (LDs) fluorescence image
표 Nostoc sp. NK의 neighbor-joining 계통수
표 질소원과 광원의 종류에 따른 Nostoc sp. NK의 생장률 및 피코시아닌 농도
표 질소원과 광원의 종류에 따른 Nostoc sp. NK의 최종 피코시 아닌 함량비교
표 질소 무첨가 배지 내 Nostoc sp. NK의 광원의 종류에 따른 피코빌리단백질의 조성 변화비교
표 저장조건에 따른 Nostoc sp. NK의 피코빌리단백질 추출량 비교
표 Ettlia sp.의 Floc 형성 및 침전 효율에 대한 EPS 역할 모식도
표 미세조류 EPS 구조 모식도
표 EPS 분석을 위한 Ettlia sp. 배양 조건
표 Ettlia sp. 침전 효율 계산 공식
표 LB-EPS와 TB-EPS 추출 방법
표 EPS 정제 분석 방법
표 5%CO2 공급 유무에 따른 axenic 및 xenic 배양 생장 곡선(a), 배양 시기에 따른 axnic 및 xenic 배양액의 플록 형성 비교(b), 배양 26일에 Ettlia sp. 배양액의 플록 형성 비교(c)
표 Mid-exponential에서 Ettlia sp.의 axenic 세포 표면 구조(A-C)와 xenic 세포 표면 구조(D-F)의 SEM 이미지들
표 배양 시기에 따른 배양액 침전 효율 변화 관측
표 배양 시간에 따른 axenic과 xenic 배양액의 침전 효율 a 및 전위 변화
표 Xenic Ettlia sp. 배양액에서 세균 군집 분석. (A) Bray-Curtis 군집 차이의 NMDS ordination plot과 (B) 대응 히트 맵은 부착 및 부유성 세균 군집 구조를 순차적인 레벨로 보여주었다
표 배양 시기별 Ettlia sp.의 B-EPS, LB-EPS, 그리고 TB-EPS 함량 및 조성 변화
$다양한 성장 단계에서 SDS-PAGE에 의한 조성 (A) LB- 및 (B) TB-EPSP의 분석. 대응 히트 맵은 다른 크기의 fraction에서 단백질의 상대적 풍부를 나타낸다$ 표 다양한 성장 단계에서 SDS-PAGE에 의한 조성 (A) LB- 및 (B) TB-EPSP의 분석. 대응 히트 맵은 다른 크기의 fraction에서 단백질의 상대적 풍부를 나타낸다
표 A) 일반 단세포성 Ettlia sp.가 가라앉은 모습, B) Floc 형태로 뜨는 Ettlia sp., C) Floc 표면에 많은 공기방울이 형성되어있는 모습
표 Maximum Likelihood 방법을 통한 Colony1의 계통분석
표 Maximum Likelihood 방법을 통한 Colony3의 계통분석
표 Ettlia sp. floc 형성을 위한 실험과정
표 Ettlia sp. 건조를 위한 실험 조건
표 Ettlia sp. 건조 용기 내의 상대 습도
표 건조 환경에 노출 된 Ettlia sp.를 배양액에 넣은 후 관찰 되는 생장률
표 건조 환경에 노출 된 Ettlia sp.를 배양액에 넣은 후 관찰되는 광합성률
표 건조 환경에 노출 된 Ettlia sp.의 2D-PAGE 분석 예
표 건조 환경에 노출 된 Ettlia sp. 2D-PAGE 분석 데이터의 Principal component anaysis
표 발현 변화를 보인 단백질의 기능 기반 분류
표 건조 조건에 따른 단백질 발현 프로파일의 히트 맵
표 단백질 발현 프로파일을 기준으로 한 클러스터링. 각 건조조건에서의 발현량을 박스 -위스커 플롯으로 표현하였다. 건조 조건: NC (negative control), MD, (mild dehydration), ID (intermediate dehydration) and SD (strong dehydration)
표 건조 조건에 노출된 Ettlia sp. 단백체 변화 모델
표 온도에 따른 막 지질과 중성지질간의 지질 전환을 알아보기 위한 실험 계획
표 온도에 따른 세포의 생리적 특성분석
표 4℃와 42℃의 시간대별 지방산조성 비교
표 온도별 sample의 통계를 통한 상관관계 분석
표 Ettlia sp.의 지질 조성
표 당 지질, 인 지질, 중성지질 조성 비교
표 히트 맵을 통한 지방산 조성 비교
표 14 L의 연속배양 용 광생물반응기 (A)와 광원의 위치 (B)의 모식도
표 70 μmol/m2/s에서 희석배율에 따른 Ettlia sp.의 세포농도 및 biomass 생산성
표 450 μmol/m2/s에서 희석배율에 따른 Ettlia sp.의 세포농도 및 biomass 생산성
표 최대 바이오매스 생산성을 얻기 위한 광도, dilution rate, pH의 변화에 따른 Ettlia sp.의 바이오매스 농도 비교

과제명(ProjectTitle) :	-
연구책임자(Manager) :	-
과제기간(DetailSeriesProject) :	-
총연구비 (DetailSeriesProject) :	-
키워드(keyword) :	-
과제수행기간(LeadAgency) :	-
연구목표(Goal) :	-
연구내용(Abstract) :	-
기대효과(Effect) :	-

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 제목(한글), 저자명(한글), 발행일자, 전자원문, 초록(한글), 초록(영문) 관리번호, 제목(한글), 제목(영문), 저자명(한글), 저자명(영문), 주관연구기관(한글), 주관연구기관(영문), 발행일자, 총페이지수, 주관부처명, 과제시작일, 보고서번호, 과제종료일, 주제분류, 키워드(한글), 전자원문, 키워드(영문), 입수제어번호, 초록(한글), 초록(영문), 목차
저장형식	Text(ASCII format) Excel format
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증

생태친화형 고성능 미세조류 개발
Development of eco-friendly and high efficiency microalgae 원문보기

초록 ▼

목차 Contents

표/그림 (300)

표/그림 (300)

연구자의 다른 보고서 :

참고문헌 (25)

연구과제 타임라인

관련 콘텐츠

원문 보기

이 보고서와 함께 이용한 콘텐츠

연관된 기능

AI-Helper ※ AI-Helper는 오픈소스 모델을 사용합니다.

선택된 텍스트

연합인증

생태친화형 고성능 미세조류 개발 Development of eco-friendly and high efficiency microalgae 원문보기

초록 ▼

목차 Contents

표/그림 (300) 모든 표/그림 보기

표/그림 (300) 슬라이드로 보기

연구자의 다른 보고서 :

오희목 (52) 정원중 (25)

참고문헌 (25)

연구과제 타임라인

전체(0) 논문(0) 특허(0) 보고서(0)

전체(0) 논문(0) 특허(0) 보고서(0)

관련 콘텐츠

원문 보기

이 보고서와 함께 이용한 콘텐츠

연관된 기능

AI-Helper ※ AI-Helper는 오픈소스 모델을 사용합니다.

선택된 텍스트

생태친화형 고성능 미세조류 개발
Development of eco-friendly and high efficiency microalgae 원문보기

표/그림 (300)

표/그림 (300)