초록 ▼

□ 연구개요
- 세계 최초로 분리주를 확보한 박쥐 파라믹소바이러스 B16-40 (Shaanvirus)를 이용하여 인체세포를 포함한 다양한 배양세포에 감염 시, 관찰되는 숙주 유전자의 발현 특성을 보고자 함
- 본 과제를 통해 MARC-145 cell 기반 Passage 4 이하의 계대배양 바이러스주에 비하여 Passage 30 이상의 계대배양 바이러스가 HEK-293 세포에서 보다 빠르게 Adaptation되어 바이러스 증식능이 향상되는 것을 확인함
- 다양한 인체유래 세포주에서의 감염 양상 비교를 위해 HEK-29

□ 연구개요
- 세계 최초로 분리주를 확보한 박쥐 파라믹소바이러스 B16-40 (Shaanvirus)를 이용하여 인체세포를 포함한 다양한 배양세포에 감염 시, 관찰되는 숙주 유전자의 발현 특성을 보고자 함
- 본 과제를 통해 MARC-145 cell 기반 Passage 4 이하의 계대배양 바이러스주에 비하여 Passage 30 이상의 계대배양 바이러스가 HEK-293 세포에서 보다 빠르게 Adaptation되어 바이러스 증식능이 향상되는 것을 확인함
- 다양한 인체유래 세포주에서의 감염 양상 비교를 위해 HEK-293, A549, HRT18에서 박쥐 파라믹소바이러스 B16-40의 감염 여부와 증식 특성을 비교해 보았으며, 신장 유래의 세포주(HEK-293)을 제외한 폐와 결장 유래의 세포주는 계대가 진행되면서 CPE가 감소되는 것을 확인함
- 박쥐 파라믹소바이러스 B16-40의 감염 시, Transcriptome 분석을 통해 모든 인체 세포에서 원숭이 신장세포와 유사한 패턴의 바이러스 증식 특성을 확인할 수 있었으며, 분석한 세포 모두 바이러스 감염에 대한 선천면역 반응과 관련된 유전자의 발현이 높게 관찰되었음
- GO Enrichment Analysis, KEGG pathway 분석을 통해, 박쥐 파라믹소바이러스 B16-40의 인체세포 감염 시, IFN 기반의 선천면역을 유도하는 주요 유전자로서 Viperin, TLR3 등이 확인되어 다양한 후속연구의 가능성을 확보함

□ 연구 목표대비 연구결과
1) MARC-145 cell 기반 Passage 4 이하의 계대배양 바이러스주와 Passage 30 이상의 계대배양 바이러스의 HEK-293 세포에서 증식 특성 비교
- 인체 유래 HEK-293 세포주에 박쥐 파라믹소 바이러스 B16-40의 계대배양을 통해 MARC-145세포에서 저계대 바이러스의 경우 역가의 변화가 거의 없는 반면, 고계대를 진행한 바이러스는 인간 세포주에 배양을 하였을 때 기존의 역가보다 약 100배 이상 증가하는 것을 확인함
2) RNA-seq을 이용한 박쥐 파라믹소 바이러스 B16-40의 HEK-293 세포주 감염 후 24시간, 48시간 이후 세포 Gene expression 특성 규명
- 박쥐 파라믹소 바이러스의 세포주에 따른 감염 양상을 비교하기 위해 인체 신장, 폐, 결장 세포주 3종 (HEK-293, A549, HRT18)을 사용함
- 인간 유래 세포주 3종에 박쥐 파라믹소 바이러스를 감염 후 24시간 이후 감염된 세포의 RNA를 추출한 후 NovaSeq 6000 system법을 통해 Transcriptome sequencing을 진행하여 DEG에 기반한 Functional genomics 분석을 진행함
- 분석된 3종의 인체유래 세포주 모두 바이러스에 대한 방어 작용 메커니즘, 인터페론 typeⅠ관련 신호전달 pathway에 관련된 유전자들이 높게 발현되는 경향이 있었으며, RSAD2, OASL, OAS1, IFIT1등의 유전자들이 높게 발현되는 것으로 보아 바이러스의 생활주기, 바이러스의 전사 또는 세포에서 방출되는 과정에 대해 negative 조절과 관련된 메커니즘이 작용하는 것으로 예측됨
- KEGG pathway 분석을 통해 주로 Viral RNA (dsRNA, non-capped RNA)등에 의해 활성화되는 세포내 선천면역 반응이 관찰됨

□ 연구개발결과의 중요성
- 본 과제를 통해 얻어진 바이러스 감염에 따른 transcriptome 분석결과를 바탕으로 숙주세포의 선천면역 시스템과 바이러스의 상호 작용에 대한 실험실적인 후속연구가 가능할 것으로 판단됨
- 숙주세포에서의 적응정도와 숙주세포 변화에 따른 박쥐 파라믹소바이러스 B16-40의 증식특성을 확인한 만큼, 다양한 숙주환경 조건에서 바이러스의 진화 특성을 비교해 볼 수 있는 추가 연구의 필요성을 확인함

(출처 : 연구결과 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 2. 연구수행내용 및 연구결과 ... 7
• 3. 연구개발결과의 중요성 ... 13
• 4. 참고문헌 ... 14
• 5. 연구성과 ... 15
• 대표적 연구실적 ... 16
• 끝페이지 ... 19