초록 ▼

□ 연구개요
암의 발생과정에 중요하게 관여하는 헤지호그(Hedgehog) 신호 경로를 조절 하는 식품성분인 Garcinone C 등과 직접 결합하는 단백질을 LC-MS/MS를 통한 동정함. 동정된 단백질과 Garcinone C와의 결합을 검증하고 헤지호그(Hedgehog) 신호 경로와의 상호작용을 분석하여 작용기작을 규명함.

□ 연구 목표대비 연구결과
⦁ Synthesis of compound-biotin product
- Garcinone C에 biotin을 labeling 하여 biotin-lab

□ 연구개요
암의 발생과정에 중요하게 관여하는 헤지호그(Hedgehog) 신호 경로를 조절 하는 식품성분인 Garcinone C 등과 직접 결합하는 단백질을 LC-MS/MS를 통한 동정함. 동정된 단백질과 Garcinone C와의 결합을 검증하고 헤지호그(Hedgehog) 신호 경로와의 상호작용을 분석하여 작용기작을 규명함.

□ 연구 목표대비 연구결과
⦁ Synthesis of compound-biotin product
- Garcinone C에 biotin을 labeling 하여 biotin-labeled Garcinone C를 합성함.
⦁ Affinity based pull-down assay
- 위암 세포주 (AGS cells) 및 대장암 세포주(HCT116 cells)에서 Avidin-Biotin affinity를 이용하여 Garcinone C와 결합하는 direct target proteins 분획 정제함.
⦁ Direct target protein identification
- Garcinone C와 결합하는 direct target proteins 분획를 trypsin 처리 후, HPLC-MS/MS를 이용한 단백질 동정함.
⦁ Validation
- 위암 세포주 및 대장암 세포주에서 Garcinone C와 결합하는 단백질 중, 두 개 세포주에서 동시에 동정된 단백질인 succinate dehydrogenas (SDH)을 선정하고 CESTA assay 등을 통해 검증함.
- Garcinone C에 의해 증가된 SDH 활성으로 세포내 succinate 함량이 감소하고 이에 따른 헤지호그(Hedgehog) 신호 경로와의 상호작용을 분석함.
- Garcinone C는 SDH와 직접 결합하여 효소 활성을 증대시키고 succinate를 fumarate로 변환시켜 세포내 sucinate 함량을 감소시켜 헤지호그(Hedgehog) 신호 경로를 억제함으로써 대장암 및 위암 세포의 증식을 억제함을 확인함.

□ 연구개발성과의 활용 계획 및 기대효과(연구개발결과의 중요성)
- 천연물의 직접적인 결합 표적 단백질 규명을 통하여 작용기작을 분자단위에서 명확하게 규명하여, 다양한 상위 신호전달 체계에 따른 분자표적 연구에 대한 플랫폼 마련에 활용될 수 있음.
- 헤지호그(Hedgehog) 신호 경로는 암화과정에만 관여하는 것이 아니라 지방세포의 분화 및 뼈세포의 증식에도 관여하기 때문에 본 연구에서의 direct target protein identification은 다른 만성 질환의 효능 연구에도 활용 가능함.
- 기능성 소재의 direct target protein 기반하여 향후 기능성 식품 소재 개발에 있어 효율적으로 활용 가능하며 기능성 식품 산업의 확대 발전에 기여할 수 있음.

(출처 : 연구결과 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 1.1. 연구의 최종목표 ... 4
• 1.2. 연차별 연구의 목표 및 내용 ... 4
• 2. 연구개발과제의 수행 과정 및 수행 내용 ... 4
• 2.1. Biotin-labeled Garcinone C 합성 ... 4
• 2.2. Competitive binding assay를 통한 Garcinone C target protein 분획 정제 ... 5
• 2.3. Competitive binding assay를 통한 Garcinone C direct target protein 동정 ... 5
• 2.4. Garcinone C와 direct target protein의 상호작용 검증 ... 7
• 2.5. Succinate와 헤지호그(Hedgehog) 신호경로의 상호작용 검증 ... 9
• 2.6. Garcinone C의 SDH binding 및 그에 따른 헤지호그(Hedgehog) 신호와의 상호작용 ... 10
• 3. 연구개발과제의 수행 결과 및 목표 달성 수준 ... 10
• 1) 정성적 연구개발성과(연구개발결과) ... 10
• 2) 세부 정량적 연구개발성과 ... 11
• 3) 목표 달성 수준 ... 11
• 4) 목표 미달 시 원인 분석 ... 11
• 4. 연구개발성과의 관련 분야에 대한 기여 정도(연구개발결과의 중요성) ... 12
• 5. 연구개발성과의 관리 및 활용 계획 ... 12
• 6. 참고문헌 ... 12
• 붙임1. 세부 정량적 연구개발성과 ... 13
• 붙임2. 연구책임자 대표적 연구실적 및 증빙(요약문 및 사본) ... 15
• 끝페이지 ... 21