[보고서]HIV 감염 세포에서 HIV proviral DNA를 제거하기 위한 새로운 AIDS 치료 기술 및 해당 활성 분자의 개발과 연구

배준현

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[국가R&D연구보고서] HIV 감염 세포에서 HIV proviral DNA를 제거하기 위한 새로운 AIDS 치료 기술 및 해당 활성 분자의 개발과 연구
Development and research of new AIDS therapeutic technology and active molecule to remove HIV proviral DNA from HIV infected cells 원문보기

보고서 정보
주관연구기관	가톨릭대학교 Catholic University of Korea
연구책임자	배준현
보고서유형	최종보고서
발행국가	대한민국
언어	한국어
발행년월	2022-05
과제시작연도	2020
주관부처	교육부 Ministry of Education
연구관리전문기관	한국연구재단 National Research Foundation of Korea
등록번호	TRKO202200017307
과제고유번호	1345344175
사업명	이공학학술연구기반구축(R&D)
DB 구축일자	2022-11-23
키워드	후천성면역결핍 바이러스.에이즈.뉴클레오캡시드.재조합효소.프로바이러스.HIV.AIDS.Nucleocapsid.Recombinase.Provirus.

초록 ▼

□ 연구개발 목표 및 내용
￭ 최종 목표
Brec1 recombinase와 HIV NC를 이용하여 HIV 감염 세포에서 HIV proviral DNA를 제거할 수 있는 새로운 AIDS 치료 기술 및 해당 활성 분자의 개발
￭ 전체 내용
⦁ Brec1과 HIV nucleocapsid (NC) 결합단백질 (NC-Brec1) 발현 plasmid DNA 제작 및 검증
⦁ NC-Brec1의 HIV-1에 대한 항바이러스 효능 평가 및 기전 확인
⦁ Brec1 및 NC-Brec1 재조합 단백질 정제 제작 및 검증
⦁ Brec1 및 NC-Brec1 재조합 단백질의 세포 투과율 검증 및 항바이러스 효능 비교 분석

□ 연구개발성과
⦁ NC-Brec1 expression vector를 제작하고 발현 여부 확인
⦁ NC-Brec1의 HIV-1에 대한 항바이러스 효능을 확인
⦁ 세포 내 NC-Brec1의 재조합 활성을 확인

□ 연구개발성과 활용계획 및 기대 효과
⦁ AIDS를 완전히 치료할 수 있는 새로운 치료제 개발에 기여
⦁ AIDS 감염률 감소와 효과적인 치료를 통한 의료비용 절감
⦁ HIV NC가 AIDS 치료제뿐만 아니라 여러 다른 치료제 개발에 응용될 수 있는 발판을 마련
⦁ 후속 연구개발을 진행하여 국제적으로 AIDS 치료제와 여러 의약품 시장 진출 및 경쟁력 확보

(출처 : 요약문 2p)

목차 Contents

표지 ... 1
요 약 문 ... 2
목차 ... 3
1. 연구개발과제의 개요 ... 4
2. 연구개발과제의 수행 과정 및 수행 내용 ... 5
1) 1차 년도 ... 5
2) 2차 년도 ... 6
3. 연구개발과제의 수행 결과 및 목표 달성 정도 ... 6
1) 연구수행 결과 ... 6
4. 연구개발성과의 관련 분야에 대한 기여 정도 ... 12
5. 연구개발성과의 관리 및 활용 계획 ... 13
6. 참고문헌 ... 13
끝페이지 ... 13

표/그림 (7)

표 Brec1 recombinase의 작용 메커니즘
표 Construction of cell-permeable NC-Brec1 recombinant protein. (A) Schematic representation of Brec1 and NC-Brec1 recombinant protein constructs. (pcDNA3.1_Brec1, NC-Brec1). (B) Western blot analysis of Brec1 and NC-Brec1 recombinant protein from HEK293T cells by using anti-His antibody
표 Localizations of Brec1 and NC-Brec1 protein in HeLa cells. Immunofluorescence was performed at 48 h after transfection of the expression plasmid. Transfected cells were stained in DAPI for nuclei (Blue) and anti-His antibody for His tagged Brec1 protein (Rhodamine, Red)
표 Recombination activity of Brec1 protein in transfected cells (A) Luciferase activity in HEK293T cells co-transfected with reporter vector (pGL_LTR-F-luc-3’UTR), expression vectors (pcDNA3.1, pcDNA3.1_Brec1, pcDNA3.1_NC-Brec1) and internal control plasmid (pDS-Red). (B-C) Genomic DNA isolated from HEK293T cells co-transfected with reporter (pGL_LTR-F-luc-3’UTR) and expression plasmids (pcDNA3.1, pcDNA3.1_Brec1, pcDNA3.1_NC-Brec1) was analyzed at the indicated days after transfection by PCR using primers to detect the transient circular excision product. The results are representative of three independent experiments. The means ± standard deviations of three independent experiments are shown
표 Anti-viral efficiency against HIV-1 of NC-Brec1. (A-B) Genomic DNA isolated from HEK293T cells co-transfected with proviral DNA (pNL4.3_EGFP) and expression plasmids (pcDNA3.1_Brec1 and NC-Brec1) was analyzed at the indicated days after transfection by PCR using primers to detect the transient circular excision product. (C) HIV-1 p24 ELISA
표 Affinity purification of His-tagged protein from E. coli lysate. (A) Determination of target protein expression and solubility. (B) Naturing conditioned affinity purification. (C) Denaturing conditioned affinity purification (D) Protein refolding
표 Expression and Solubility Test

참고문헌 (25)

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