보고서 정보
주관연구기관 |
이화여자대학교 Ewha Womans University |
연구책임자 |
이경림
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보고서유형 | 1단계보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2018-04 |
과제시작연도 |
2017 |
주관부처 |
(범부처사업) NTIS |
등록번호 |
TRKO202200019443 |
과제고유번호 |
9991006133 |
사업명 |
범부처전주기신약개발 |
DB 구축일자 |
2022-12-06
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키워드 |
히스타민방출인자.티씨티피.아토피피부염.펩타이드 약물.선도물질.Histamine releasing factor.TCTP.atopic dermatitis.peptide drug.leac compound.
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초록
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IV. 연구개발결과
□ 항아토피 효능을 갖는 dTBP2 펩타이드 효능 평가
• dTBP2 펩타이드 제작
- 고순도 약 98%로 합성하여 본 평가 이용함.
• dTBP2의 투여용량별 및 투여간격별 효능 평가
- 아토피성 피부질환 동물 모델 NC/Nga 마우스에서 dTBP2의 항아토피성 효능 실험을 통해서 다음과 같은 결과를 얻음. dTBP2의 투여용량과 투여간격은 체중 kg당 50 mg을 피하주사로 주 4회 투여 시 항아토피성 효능이 가장 효과적임. 관능평가 와 조직학적 검사 결과, 대조군에 비해 아
IV. 연구개발결과
□ 항아토피 효능을 갖는 dTBP2 펩타이드 효능 평가
• dTBP2 펩타이드 제작
- 고순도 약 98%로 합성하여 본 평가 이용함.
• dTBP2의 투여용량별 및 투여간격별 효능 평가
- 아토피성 피부질환 동물 모델 NC/Nga 마우스에서 dTBP2의 항아토피성 효능 실험을 통해서 다음과 같은 결과를 얻음. dTBP2의 투여용량과 투여간격은 체중 kg당 50 mg을 피하주사로 주 4회 투여 시 항아토피성 효능이 가장 효과적임. 관능평가 와 조직학적 검사 결과, 대조군에 비해 아토피성 피부염이 완화되고 부종이 감소하여 유의한 결과가 나타남. 상기 2가지 평가만 본다면 NC/Nga 마우스에서 항아토피성 효능은 대조약물인 덱사메타손과 비교 시 동등하거나 유사한 것으로 판단됨. 염증의 지표가 되는 혈청 IgE와 히스타민 생산량 역시 대조군에 비교하여 dTBP2 투여군에서 투여용량 및 투여간격 의존적으로 감소함. 또한, 피부 조직에서 염증성 사이토카인인 IL-4, IL-5, IL-6, IL-13의 유전자 발현량을 조사한 결과, 대조군에 비교하여 dTBP2 투여군에서 투여용량 및 투여간격 의존적으로 유전자 발현량이 감소함으로써 항염증 및 항아토피성 효능이 피부질환 동물 모델에서 실험적으로 입증됨.
□ dTBP2의 약동학(PK) 평가 및 안정성 평가
• 분석법 개발
- dTBP2의 PK 평가와 안정성 평가를 위해 분석법을 개발함. 본 연구팀은 HPLC 및 LC-MS/MS를 이용하여 혈청 내 dTBP2 검출을 위한 분석법을 확립하였으며, 확립된 분석법으로 분석 시 혈청 내 dTBP2의 회수율이 약 70% 이상이었음.
• dTBP2의 PK 평가
- PK 동물 모델을 수컷 위스타 랫트(Wistar rat)로 설정한 다음, dTBP2를 체중 kg당 100 mg을 피하주사로 1회 투여 후 약동학적 파라미터 산출 및 기초데이터 확보함. 또한, dTBP2의 최소, 중간 및 최대 투여용량을 피하주사 후 혈청 내 dTBP2를 검출 및 정량하여 dTBP2의 약동학적 특징을 파악함.
□ dTBP2의 in vitro stability study
• In vitro metabolic stability 시험
- 다양한 metabolizing enzyme을 포함하고 있는 species-specific (mouse, rat, human) liver microsome을 이용하여 dTBP2의 metabolic stability를 평가한 결과, 개와 원숭이에서는 % remaining이 50% 이상으로 비교적 안정한 것으로 측정되었으나 human 을 비롯하여 mouse와 rat에서 30% 이하의 값으로 다소 metabolic stability가 불안정한 화합물로 측정됨.
• dTBP2의 물성평가
- Kinetic solubility를 평가한 결과, dTBP2는 500 μM (572.5 μg/ml) 이상으로 측정되 었으며, Sirius사의 T3 장비를 이용하여 측정하였을 때 친지질도(logP) 값이 1.82로 나왔음. 따라서, dTBP2는 비교적 양호한 물성을 나타냄.
• dTBP2의 안정성 평가
- 일반적으로 많이 사용되는 3가지 pH buffer [sodium citrate buffer (pH 4.5), PBS (pH 6.5 or 7.4)]에 dTBP2를 넣고 고온(40℃)에서 얼마나 안정한지를 8주간 분석함. 손상되지 않은 dTBP2는 HPLC 분석을 통해 물리적 안정성을 평가한 결과, 3가지 pH buffer에 따른 차이는 미미한 것으로 나타났으며, 약 80% 이상 손상되지 않은 dTBP2가 검출됨. 따라서, 예상과 달리 dTBP2는 상기 조건에서는 비교적 안정한 물질이라 판단함.
(출처 : 요약문 5p)
Abstract
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R&D Results
□ Evaluation of efficacy of dTBP2 on the mouse model of atopic dermatitis
• Synthesis of dTBP2 peptide
- We synthesized dTBP2, with above 98% purity, and used in the following assays.
• Evaluation of dose-effect relationship
- Using house dust mite-induced atopic derma
R&D Results
□ Evaluation of efficacy of dTBP2 on the mouse model of atopic dermatitis
• Synthesis of dTBP2 peptide
- We synthesized dTBP2, with above 98% purity, and used in the following assays.
• Evaluation of dose-effect relationship
- Using house dust mite-induced atopic dermatitis in Nishiki-nezumi Cinnamon/Nagoya (NC/Nga) mice, we evaluated anti-atopic effect of dTBP2. 50 mg/kg of subcutaneous injection of dTBP2 (4 days a week) showed greatest efficacy. By evaluating clinical severity scores and histological assay, atopic dermatitis was relieved and edema was reduced in dTBP2 treated mice compared to control. From these two assays, we can cautiously suspect that dTBP2 has similar efficacy compared to dexamethsone. Serum IgE level, which is an indicator for inflammation, was reduced in dTBP2 treated mice in dose and time-dependent manner. Moreover, the mRNA levels of inflammatory cytokines, such as IL-4, IL-5, IL-6 and IL-13, were reduced dose and time-dependent manner, suggesting anti-inflamation and anti-atopic efficacy of dTBP2 in mouse model.
□ PK analysis of dTBP2 peptide
• Establish assessment method to evaluate PK of dTBP2
- Using HPLC and LC-MS/MS, we established assessment method to evaluate dTBP2 in serum and discovered that recovery rate of dTBP2 was above 70%.
• PK analysis of dTBP2
- We used Wister rat for PK analysis, and injected 50 mg/kg of dTBP2 subcutaneously once and acquired pharmacodynamic parameters to give background data for PK of dTBP2. Also we treated minimum, median and maximum dose of dTBP2 subcutaneously and detected serum dTBP2 level in order to identify pharmacodynamic characteristics.
□ In vitro stability assay of dTBP2 peptide
• In vitro metabolic stability assay of dTBP2 peptide
- The metabolic stability of dTBP2 was measured using species-specific (mouse, dog, monkey, rat and human) liver microsomes which contained diverse metabolizing enzyme. In dog and monkey liver microsome, the remaining dTBP2 was greater than 50%, suggesting resistance to metabolism. However, in human, mouse, and rat liver microsome, the remaining dTBP2 was less than 30%, suggesting stability of dTBP2 was weak in these microsome.
• Evaluation of physical property of dTBP2
- The kinetic solubility of dTBP2 was above 500 μM (572.5 μg/ml), and the lipophilicity of dTBP2 was 1.82, suggesting stable physical property of dTBP2.
• Stability assay of dTBP2
- We evaluated stability of dTBP2 in 40℃ three common pH bufffer (sodium citrate buffer (pH.4.5), PBS (pH 6.5 or 7.4) for 8 weeks. The intact dTBP2 was measured using HPLC assay and discovered that more than 80% of dTBP2 were undamaged in all three buffers. Thus the dTBP2 showed high stability in these above conditions.
(source : Summary 8p)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 제 출 문 ... 2
- 보고서 요약서 ... 3
- 요 약 문 ... 4
- SUMMARY ... 7
- CONTENTS ... 10
- 목차 ... 11
- 제1장 연구개발과제의 개요 ... 12
- 제1절 연구개발의 필요성 ... 12
- 제2절 연구개발의 목적 ... 15
- 제3절 연구개발의 범위 ... 17
- 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 18
- 제1절 국외 기술개발 현황 ... 18
- 제2절 국내 기술개발 현황 ... 18
- 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 20
- 제1절 dTBP2의 투여용량별 효능 ... 20
- 제2절 dTBP2의 투여간격별 효능 ... 28
- 제3절 dTBP2의 약동학(PK) 평가 및 안정성 평가 ... 33
- 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 44
- 제1절 목표달성도 ... 44
- 제2절 관련분야에의 기여도 ... 45
- 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 46
- 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 47
- 제7장 연구시설·장비 현황 ... 48
- 제8장 참고문헌 ... 49
- 끝페이지 ... 51
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