초록 ▼

세계보건기구는 호흡기 세포융합바이러스(RSV) 백신을 개발이 시급한 최우선 순위로 지정하였으며, 백신개발이 활발히 진행 중임. RSV 백신 도입에 대비하여 백신 효능평가의 지표로써 표준화된 면역원성 시험법 구축이 필요함. 먼저, RSV의 주 항원인 prefusion F 단백 2종(DS-Cav1, SC-TM)을 유전자 조작을 통해 제작하고 정제하였음. 이후 각 단백질의 적절한 코팅 농도, 2차 항체 희석 배수, 비특이적 반응을 최소화하기 위한 blocking buffer를 선별하여 ELISA 시험법을 정립하였음. BEI 참조혈청과 건

세계보건기구는 호흡기 세포융합바이러스(RSV) 백신을 개발이 시급한 최우선 순위로 지정하였으며, 백신개발이 활발히 진행 중임. RSV 백신 도입에 대비하여 백신 효능평가의 지표로써 표준화된 면역원성 시험법 구축이 필요함. 먼저, RSV의 주 항원인 prefusion F 단백 2종(DS-Cav1, SC-TM)을 유전자 조작을 통해 제작하고 정제하였음. 이후 각 단백질의 적절한 코팅 농도, 2차 항체 희석 배수, 비특이적 반응을 최소화하기 위한 blocking buffer를 선별하여 ELISA 시험법을 정립하였음. BEI 참조혈청과 건강인 150명으로부터 수집한 혈청을 이용하여 ELISA 시험법을 검증하였으며, 정확도, 정밀도와 특이도를 평가하였음. R값으로 확인한 항원별 정확도는 DS-Cav1의 경우 0.90, SC-TM의 경우 0.86이었음. 두 항원 다 모든 희석배수에서 변동계수(CV) 15% 미만의 정밀도를 보였음. DS-Cav1, SC-TM 각각 특이적인 항원으로 흡착한 경우에 항체 역가가 많이 감소하며, G 단백으로 흡착시 감소하지 않아 특이적이었으나, DS-CaV1에 대한 항체 역가와 SC-TM 에 대한 항체 역가 간 상관계수가 전 연령군에서 유의한 상관도를 보여서 RSV prefusion F 단백에 대한 항체는 교차반응을 확인할 수 있었음(R² = 0.59-0.91). 30개의 혈청 샘플에 대해서 VRNT (virus reduction neutralization test)법으로 측정한 중화항체 역가와 IgG 항체(DS-Cav1, SC-TM , G 단백질) 역가를 비교했을 때 낮은 상관도를 보였음. 연령대 별로 혈청학적 유병률을 평가하기 위해서 연령군(5세 미만, 5-18세, 19-49세, 50-64세, 65세 이상 등)별로 각 30명을 포함한 총 150명을 대상으로 ELISA IgG 항체 역가를 측정하였음. 65세 미만의 대상자 중에서는 DS+Cav1와 SC-TM 에 대한 항체 모두 5-18세 연령군에서 가장 높았음(p<0.05). 5세 미만, 19-49세, 50-64세 연령군의 DS-Cav1 및 SC-TM 항체 역가 간에는 통계적으로 유의한 차이가 없었음. 5세 미만 대상자 중 RSV 질병부담이 더 큰 0-12개월의 영아(n=11)와 13-59개월 유아(n=19)의 항체 역가를 비교하였을 때 유의한 차이는 없었음. 65세 이상에서는 DS-Cav1에 대한 항체 역가가 타 연령군에 비해 유의하게 높았으나, SC-TM 항체 역가는 오히려 타 연령군에 비해 가장 낮았음. RSV 감염을 반복적으로 겪은 5 -18세 연령의 소아청소년에서 RSV 항체 역가가 가장 높았고 이후 연령대에서는 감소하였음. 5세 미만 소아와 65세 이상 고령자에서 RSV 항체 유병률이 높았는데, 이는 반복적인 노출 가능성이 높음을 의미함. 본 연구결과는 5세 미만 소아와 65세 이상 고령자에서 RSV 백신 접종 필요성의 근거가 될 수 있음

(출처 : 요약문 6p)

Abstract ▼

The World Health Organization (WHO) has designated the respiratory syncytial virus (RSV) vaccine as the highest priority for urgent development, and vaccine development is actively underway. In preparation for the introduction of RSV vaccine, it is necessary to establish a standardized immunogenicit

The World Health Organization (WHO) has designated the respiratory syncytial virus (RSV) vaccine as the highest priority for urgent development, and vaccine development is actively underway. In preparation for the introduction of RSV vaccine, it is necessary to establish a standardized immunogenicity assay as an indicator of vaccine efficacy evaluation. First, two types of prefusion F protein (DS-Cav1, SC-TM), which are the main antigens of RSV, were produced and purified through genetic manipulation. Thereafter, the ELISA method was established by selecting the appropriate coding concentration for each protein, the secondary antibody dilution factor, and a blocking buffer to minimize non-specific reactions. The ELISA method was validated using BEI reference sera and sera collected from 150 healthy people； the accuracy, precision and specificity were evaluated. The accuracy of each antigen confirmed by the R value was 0.90 for DS-Cav1 and 0.86 for SC-TM. Both antigens showed a coefficient of variation (CV) of less than 15% precision at all dilutions. When adsorbed with specific antigens for DS-Cav1 and SC-TM, respectively, the respective antibody titers specifically decreased, but not when adsorbed by G protein. There was a significant positive correlation between the antibody titers against DS Cav1 and SC-TM in all age groups (R< sup>2< /sup> = 0.59-0.91), suggesting cross-reactivity.

When comparing the neutralizing antibody titers measured by VRNT (virus reduction neutralization test) and IgG antibody titers (DS-Cav1, SC-TM, G protein) for 30 serum samples, the correlation was quite low. The RSV seroprevalence was investigated by age group, including a total of 150 subjects (30 for each age group； < 5 years, 5-18 years, 19-49 years, 50-64 years and >65 years). Among subjects under 65 years of age, both antibodies to DS-Cav1 and SC-TM were the highest in the age group 5-18 years old (p< 0.05). There were no statistically significant differences between the DS-Cav1 and SC-TM
antibody titers in the age groups < 5 years, 19-49 years and 50-64 years. There was no significant difference in antibody titers of infants aged 0-12 months (n=ll) at a greater RSV disease burden and young children aged 13-59 months (n=19). As for the old adults aged over 65 years, the antibody titers to DS-Cav1 was significantly higher than those of other age groups, but the SC-TM antibody titers were the lowest in the elderly compared to other age groups. RSV seroprevalence was the highest in children aged 5-18 years, who might experience repeated RSV infection, and then decreased. The
prevalence of RSV antibodies was high in children under 5 years and those aged 65 years and older, indicating a high likelihood of repeated exposure. The results of this study may provide evidence for the need for RSV vaccination in children under 5 years and the elderly people over 65 years.

(source : Summary 8p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 목차 ... 4
• I . 총괄연구개발과제 요약문 ... 5
• 국문 요약문 ... 6
• Summary ... 8
• II. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 10
• 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ... 10
• 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ... 20
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 25
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 63
• 제5장 총괄주요연구 변경사항 ... 67
• 제6장 총괄참고문헌 ... 68
• 제7장 총괄첨부서류 ... 70
• 끝페이지 ... 73