초록 ▼

□ 연구개발 목표 및 내용
○ 최종 목표
1. 후성유전체기법을 이용한 키메리즘(chimerism) 검사법을 개발
2. 개발된 검사법을 개발된 검사법을 다양한 임상 증상 및 질병에 적용하여 임상적 유용성을 확인
3. 개발된 검사법으로 진단키트개발 가능성을 타진

○ 전체 내용
본 연구는 in vitro 실험 및 공용 데이터베이스의 데이터를 통해 계통·조직·괴사 특이적 CpG를 확인하여 키메리즘 검사법의 후성유전학적 표지자로써의 가능성을 확인하였음. 더불어 Linkage-disequilibrium

□ 연구개발 목표 및 내용
○ 최종 목표
1. 후성유전체기법을 이용한 키메리즘(chimerism) 검사법을 개발
2. 개발된 검사법을 개발된 검사법을 다양한 임상 증상 및 질병에 적용하여 임상적 유용성을 확인
3. 개발된 검사법으로 진단키트개발 가능성을 타진

○ 전체 내용
본 연구는 in vitro 실험 및 공용 데이터베이스의 데이터를 통해 계통·조직·괴사 특이적 CpG를 확인하여 키메리즘 검사법의 후성유전학적 표지자로써의 가능성을 확인하였음. 더불어 Linkage-disequilibrium 관계에 있는 두 개의 인접한 SNP들을 표지자로 하여, 기존의 검사법 보다 정밀한 예측을 하도록 고안한 방식(Chimerism assay using SNPs adjacent and in linkage-disequilibrium; CASAL)이며, 총 84쌍의 시발체와 multiplex-PCR을 통하여 증폭한 산물을 사용하여 차세대 염기서열 분석법 (next generation sequencing; NGS)으로 분석함. 여러 임상 검체 이용한 데이터를 자체 개발한 알고리즘로 분석을 진행하였음.

○ 1단계
● 목표
1. 표적 발굴을 위한 임상 검체 획득
2. 공개 데이터 분석
● 내용
- 혈구 세포 분리 및 배양, 고형 조직 획득
- 공개 데이터베이스 분석을 통한 표적 부위 선별

○ 2단계
● 목표
1. DNA methylome 분석을 통한 CpG 부위 선별
2. 키메리즘 검사법 pilot study
● 내용
- 혈구 계통 특이적, 조직 특이적 CpG 부위 선별
- 임상 검체를 사용한 키메리즘 검사법 예비 실험

○ 3단계
● 목표
1. 키메리즘 검사법 최적화
● 내용
- 예비실험 결과를 토대로 키메리즘 검사법 프로토콜 최적화

○ 4단계
● 목표
1. 임상검체 검사
● 내용
- 확립 된 키메리즘 검사법으로 임상검체 검사 및 분석

○ 5단계
● 목표
1. 임상검체 검사
● 내용
- 확립 된 키메리즘 검사법으로 임상검체 검사 및 분석

○ 6단계
● 목표
1. 임상검체 검사
2. 상용화 타진
● 내용
- 확립 된 키메리즘 검사법으로 임상검체 검사 및 분석
- 진단키트 개발 및 국내 업체와 협력 구상

□ 연구개발성과
1. 계통·조직·괴사 특이적 CpG 부위 선별
- 말초혈액 세포 분리, 세포실험 및 공용 데이터베이스를 활용하여 각기 계통 특이적, 조직 특이적 CpG 부위를 선별
2. 선별된 CpG 부위를 목표로 하는 최적화된 NGS 검사법 개발
- CpG 및 개별 표지자로써의 SNP르 모두 포함하는 시발체 (primer) 개발
- NGS 검사법 프로토콜 최적화 및 전용 분석 알고리즘 개발
3. Dual SNP를 표지자로 하는 키메리즘 검사법 (CASAL) 후보 SNP 부위 선별
- 공용데이터베이스를 통하여 perfect linkage-disequilibrium 관계에 있는 서로 인접한 SNP 후보 선별
4. 선별된 SNP 표지자를 이용한 최적화 된 NGS 검사법 개발
- 다양한 성능 평가 지표를 통해 기존의 STR 검사법과의 비교 평가 진행
- 기존 방식 대비 개선된 성능 확인

□ 연구개발성과 활용계획 및 기대 효과
본 연구를 통하여 다양한 임상 증상에 활용 가능한 키메리즘 검사법을 개발하고 성능을 검증하였다. 후성유전학적 표지자 (CpG)를 활용한 키메리즘 검사법에 효용성 및 가능성을 타진해보았고, CASAL과 STR 검사법이 유사한 결과를 보였으며 일부 경우 보다 높은 민감도를 통해 이식거부 반응의 조기 감지에 성공함. Background noise로 인하여 3-5% 이하의 낮은 donor fraction은 확인이 어려웠던 기존 방식의 단점을 해결한 임상 활용도가 높은 방식을 개발함. 임상 사용 가능한 새로운 후성 유전학적 키메리즘 검사법을 연구자들에게 제시할 수 있을 것으로 기대한다.

(출처 : 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 요 약 문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 1) 연구개발의 필요성 ... 4
• 2) 연구 최종 목표 ... 5
• 3) 연구 범위 ... 5
• 2. 연구개발과제의 수행 과정 및 수행 내용 ... 6
• 1) 1차년도 연구 수행 내용 ... 6
• 2) 2차년도 연구 수행 내용 ... 7
• 3) 3차년도 연구 수행 내용 ... 8
• 4) 4차년도 연구 내용 ... 9
• 5) 5차년도 연구 내용 ... 9
• 6) 6년차 연구 내용 ... 10
• 3. 연구개발과제의 수행 결과 및 목표 달성 정도 ... 10
• 1) 연구수행 결과 ... 10
• 4. 연구개발성과의 관련 분야에 대한 기여 정도 ... 22
• 1) 학술적·임상진단 분야에서의 의미 ... 22
• 2) 경제적·산업적 측면에서의 의미 ... 22
• 5. 연구개발성과의 관리 및 활용 계획 ... 22
• 6. 참고문헌 ... 22
• 끝페이지 ... 25