초록 ▼

□ 연구개요
◈ 기회감염을 일으키는 칸디다균의 병원성 및 항진균제 내성 증가에 관여하는 전사 조절자들(Upc2, PDR1/3)의 작용기전을 규명하여 새로운 항진균제 타겟을 발굴하고자 하였음.
◈ 아졸 항진균제 내성에 중요한 역할을 하는 Upc2 전사인자의 스테롤 리간드에 의한 활성 및 내성 증가의 구조적 기전 규명하였고, 아졸계 항진균제를 보완할 수 있는 신규표적 가능성 및 저해제 검색 방법 원리를 제시하였음.

□ 연구 목표대비 연구결과
1. 스테롤 결합된 비활성형 Upc2 전사인자의 고해상도 분자 구조

□ 연구개요
◈ 기회감염을 일으키는 칸디다균의 병원성 및 항진균제 내성 증가에 관여하는 전사 조절자들(Upc2, PDR1/3)의 작용기전을 규명하여 새로운 항진균제 타겟을 발굴하고자 하였음.
◈ 아졸 항진균제 내성에 중요한 역할을 하는 Upc2 전사인자의 스테롤 리간드에 의한 활성 및 내성 증가의 구조적 기전 규명하였고, 아졸계 항진균제를 보완할 수 있는 신규표적 가능성 및 저해제 검색 방법 원리를 제시하였음.

□ 연구 목표대비 연구결과
1. 스테롤 결합된 비활성형 Upc2 전사인자의 고해상도 분자 구조 규명
Upc2 돌연변이에 의한 내성 증가 및 리간드에 의한 비활성화 기전을 이해하고자 하였음. 어고스테롤이 결합된 inactivated Upc2의 고해상도 3차 구조를 규명하여 리간드 인지 기전을 밝혔음. 자연리간드 어고스테롤이 결합된 비활성형 Upc2 구조 정보를 이용하여 초기 저해물질 설계에 이용하였음.
2. In vitro Upc2의 리간드 결합 시험 및 저해화합물 스크리닝법을 구축
Upc2의 activation loop에 형광 dye를 labeling하거나 형광리간드 치환법으로 리간드 결합에 의한 형광변화로 리간드 결합을 직접측정. 다양한 어고스테롤 변형 유도체 및 화합물 라이브러리 스크리닝으로 새로운 저해제 탐색방법을 개발함. 이를 이용하여 초기 Upc2 저해물질을 발굴함.
3. 내성 유발 전사인자의 조절 도메인 클로닝 및 단백질 정제, 구조 분석 시도
칸디다균의 항진균제 내성 및 병원성을 증가시키는 Zn-전사인자 (PDR1, PDR3, Stb5)의 조절 도메인 클로닝, 대장균 발현, 대량 정제를 통하여 활성 시험 및 단백질 구조연구에 필요한 시료 확보하였음. 리간드의 직접결합에 의한 전사인자의 활성 조절을 확인하기 위해, 표적 전사인자의 조절 부위의 단백질 정제하였고 및 리간드 결합 시험 하였음.
4. Upc2의 유전자 전사 조절 활성 및 진균 억제 활성 시험을 통한 신규 표적 가능성 확인
표적 단백질의 유전자가 knockout 된 strain을 이용하여 다양한 construct의 유전자 발현 조절 및 진균 저해 실험을 수행하였음. lacZ reporter assay및 아졸 항진균제 감수성 시험을 통하여 유전자 발현조절 및 Upc2 의존성 아졸 감수성을 확인하여, Upc2의 아졸에 대한 내성 기여도를 확인하였음.

□ 연구개발성과의 활용 계획 및 기대효과(연구개발결과의 중요성)
진균 감염 치료용 항진균제의 종류가 제한적임. 내성 칸디다를 제어하기 위한 새로운 표적 발굴과 신약 개발이 필요함. Upc2 작용 기전 연구를 수행하여 아졸 내성을 억제하는 적합한 신규 표적임을 제시하였음. 아졸 병행치료제로서 Upc2를 저해하는 선도물질을 탐색하는 방법을 개발하였고, 차후 후속 연구로 신규 저해제 개발에 필요한 원천기술을 확보하였음.
국제SCI논문 성과: Nature Chemical Biology를 포함하는 교신저자 논문 5편 출판 (상위 10% 논문 2편)
인력 양성: 석사학위 1명, 박사학위 1명 배출함

(출처 : 연구결과 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 2. 연구개발과제의 수행 과정 및 수행 내용 ... 5
• 1) 주요 연구 변경사항 ... 5
• 2) 연구과제의 수행 과정 및 수행 내용 ... 5
• 3. 연구개발과제의 수행 결과 및 목표 달성 수준 ... 12
• 1) 정성적 연구개발성과 (연구개발결과) ... 12
• 2) 세부 정량적 연구개발성과 ... 13
• 3) 목표 달성 수준 ... 14
• 4) 목표 미달 시 원인 분석 ... 15
• 4. 연구개발성과의 관련 분야에 대한 기여 정도 (연구개발결과의 중요성) ... 15
• 5. 연구개발성과의 관리 및 활용 계획 ... 16
• 6. 자체점검표 ... 16
• 7. 참고문헌 ... 16
• 붙임1. 세부 정량적 연구개발성과 ... 17
• 붙임2. 연구책임자 대표적 연구실적 및 증빙(요약문 및 사본) ... 19
• 끝페이지 ... 33