초록 ▼

□ 연구개요
1. 이식시 폐조직(정상 graft)과 동일환자에서 만성이식폐기능부전(CLAD)이 발생한 폐조직을 RNA sequencing, whole genome sequencing을 시행하고 DEG 분석을 통해 EMT, TGF-beta singaling과 관련된 후보 표적을 선정함.
2. 후보 유전자 periostin (POSTN)을 인간폐조직, CLAD와 control에서 IHC, western blot을 통해 단백질 발현 확인
3.periostin (POSTN)을 정상폐조직과 CLAD폐조직에서 IHC염색을 통해

□ 연구개요
1. 이식시 폐조직(정상 graft)과 동일환자에서 만성이식폐기능부전(CLAD)이 발생한 폐조직을 RNA sequencing, whole genome sequencing을 시행하고 DEG 분석을 통해 EMT, TGF-beta singaling과 관련된 후보 표적을 선정함.
2. 후보 유전자 periostin (POSTN)을 인간폐조직, CLAD와 control에서 IHC, western blot을 통해 단백질 발현 확인
3.periostin (POSTN)을 정상폐조직과 CLAD폐조직에서 IHC염색을 통해 표적 세포선정 및 세포실험을 통해 EMT, TGF-beta signaling확인
4.CLAD동물모델에서 periostin (POSTN)발현을 IHC와 western blot, RT-PCR로 확인

□ 연구 목표대비 연구결과
1.이식시 폐조직(정상 graft)과 동일환자에서 만성이식폐기능부전(CLAD)이 발생한 폐조직을 RNA sequencing, whole genome sequencing을 시행하고 DEG 분석을 시행. 332개의 DEG (up 230개, down 102) 확인
2.이중 EMT, TGF-beta singaling과 관련된 후보 표적 15개 선정함.
3.인간폐조직, 정상과 CLAD폐조직의 IHC염색을 통해 periostin(POSTN)의 발현 확인
4.western blot을 통해 periostin을 후보 단백질로 선정
5.표적세포로 BEAS-2B cells 선정하고 in vivo실험 시행, BEAS-2B 세포에 TGF-beta 1 5ng/ml를 처리하고 EMT marker와 POSTN을 기준시점인 24시간과 48 시간에 측정함. 시간이 지나면서 상피 마커인 E-cadherin(p<0.05)은 약화되었고, a-SMA(p<0.05)와 vimentin(p<0.001)을 포함한 중간엽 마커는 POSTN 발현과 함께 상향조절됨.
6.시험관 내에서 EMT에 대한 POSTN의 기능적 효과를 연구하기 위해 POSTN shRNA로 BEAS-2B 세포를 형질감염시키고 TGF 베타-1 유도 EMT를 수행함.POSTN 녹다운 후 EMT는 양성 및 음성 대조군과 비교하여 POSTN 녹다운 BEAS-2B 세포에서 약화됨. POSTN이 기관지 상피의 TGF 베타-1 유발 EMT 세포 모델에서 주요 역할을 함을 확인함.
7.CLAD동물마우스모델 개발: C57BL/6J(C57) 및 Balb/c 마우스(BALB/c)를 사용하여 기관을 피하로 동종이계 및 동계 이식을 수행하고 3주에 BO 유사 반응을 확인함. 정량적으로, IHC와 웨스턴 블롯은 POSTN 및 EMT마커는 동종 이식편에서 더 높게 발현됨을 확인함.

□ 연구발성과의 활용 계획 및 기대효과(연구개발결과의 중요성)
1. CLAD의 발병 및 진행에 대한 새로운 병태생리학적 이해를 제공하여, 질병 관리 전략을 개선하고 맞춤형 치료 접근을 가능하게 함
2.periostin의 과발현과 EMT의 연관성을 규명함으로써, 추후 signaling 탐구에 대한 기초배경을 제시함. EMT와 관련한 CLAD의 발생 기전 탐구를 통해 CLAD의 치료 target을 탐색. 이는 장기적으로 CLAD의 조기 진단 및 진행 예측을 위한 신뢰할 수 있는 바이오마커를 개발 하는데 도움이 됨.
3.후속연구를 통해 조기 진단 및 효과적인 치료 전략을 통해 폐이식환자의 입원율과 장기 치료에 따른 의료비용을 절감함
4.기존의 EMT는 암발생 및 전이, 조직섬유화에 대해 연구가 진행되어왔으며 일부 EMT의 억제에 대해 후보약제들이 제시되었음. 이러한 약제들을 실험실적으로 검증하여 폐이식 CLAD의 치료제로써의 가능성을 평가할 수 있음. 후속연구를 통해 섬유화의 빠른 진행을 조절하거나 늦추는 새로운 치료기술을 개발함으로써 폐이식 환자의 생존율을 향상시키고 질병의 악화를 지연시키는 치료 옵션을 제공함

(출처 : 연구결과 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 1) 연구의 목표 및 내용 ... 4
• 2) 연구의 필요성 ... 4
• 2. 연구개발과제의 수행 과정 및 수행 내용 ... 6
• 1) 1년차 후보 물질 발굴 ... 6
• 2) 2년차 in vitro검증 ... 7
• 3)3년차 in vivo검증 ... 8
• 3. 연구개발과제의 수행 결과 및 목표 달성 수준 ... 10
• 1) 정성적 연구개발성과(연구개발결과) ... 10
• 2) 세부 정량적 연구개발성과 ... 10
• 3) 목표 달성 수준 ... 10
• 4. 연구개발성과의 관련 분야에 대한 기여 정도(연구개발결과의 중요성) ... 11
• 1) 연구결과의 의미 및 중요성 ... 11
• 2) 기술적, 사회․경제적 파급효과 ... 11
• 5. 연구개발성과의 관리 및 활용 계획 ... 12
• 1)추가연구의 필요성 ... 12
• 2) 성과 관리 추진체계 ... 12
• 3) 예상되는 연구개발성과의 활용분야 및 활용 방안 ... 12
• 6. 자체점검표 ... 13
• 7. 참고문헌 ... 13
• 끝페이지 ... 24