초록 ▼

4. 당해년도 연구결과 요약
○ 국내 개파보바이러스(Canine parvovirus : CPV) 발생현황 조사
- 지역별 유기견 센터 경북(포항, 영천, 성주), 경남(진주) 및 제주도에서 채취한 분변 682개 시료에서 항원검사 결과 양성이 288개(42%)로 검출 확인
- 국내 개파보바이러스 VP2 유전자 부위에 대하여 유전자 분석 결과 FPV, CPV 2, CPV 2a, new CPV 2a, 2b 및 CPV 2c로 확인되어 개파보바이러스 VP2 부위가 다양하게 유전자가 변이되는 것 확인
○ 개파보바이러스 항

4. 당해년도 연구결과 요약
○ 국내 개파보바이러스(Canine parvovirus : CPV) 발생현황 조사
- 지역별 유기견 센터 경북(포항, 영천, 성주), 경남(진주) 및 제주도에서 채취한 분변 682개 시료에서 항원검사 결과 양성이 288개(42%)로 검출 확인
- 국내 개파보바이러스 VP2 유전자 부위에 대하여 유전자 분석 결과 FPV, CPV 2, CPV 2a, new CPV 2a, 2b 및 CPV 2c로 확인되어 개파보바이러스 VP2 부위가 다양하게 유전자가 변이되는 것 확인
○ 개파보바이러스 항체 라이브러리 구축 및 항체유전자 선발
- 개파보바이러스 항체 라이브러리 구축 방법: 개비장 적출 → Total RNA 추출 → cDNA합성 → primer set을 이용한 PCR → phagemid에 삽입 → 박테리아 라이브러리 제작 → phage ligrary 제작 → panning 및 screening
* 동물실험윤리위원회(승인번호2020-521, 2020.3.11.) 승인후 동물실험 진행
- 개파보바이러스로 면역된 개 비장세포 확보 및 total RNA 분리
- cDNA 제작 : 비장세포에서 total RNA 분리, cDNA 제작 후 항체 library 실험 진행
- 개 비장 3두에서 VH(Heavy chain)와 VL(Light chain) PCR
- 개 비장 3두에서 VH(Heavy chain)와 VL(Light chain) 연결하는 2차 PCR
- 2차 PCR 결과물 제한 효소 처리
- 2차 PCR 결과물(VH-VL)을 phagemid vector에 삽입
- 배양 및 bacteria library 제작 : 개 항체 라이브러리 20개 제작 완료
- library rescue 진행 및 phage library stock 보관(다양성 7.5 × 10⁹ /ml)
- 개파보바이러스 항원에 코팅한 ELISA screening 결과, 98개 클론중 개파보바이러스 항원에 반응하는 클론 88개를 확인
- 개파보바이러스-2c 감염 A72 세포를 고정 후 파아지 상층액(scFv가 포함된 상층액) 면역염색 결과 반응성을 확인
- 개파보바이러스 항원에 코팅된 ELISA 결과 반응성이 있는 scFv CDRs(complementarity-determining regions) 유전자염기서열 10개 분석 완료
○ 개파보바이러스 특이 하이브리도마 확보 작성
- 개파보바이러스를 감염시킨 A72세포에서 개파보바이러스에 특이적인 하이브리도마 2주 확인

(출처 : 요약 1p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• I. 연구배경 및 목표 ... 3
• 1. 연구배경 ... 3
• 2. 연구최종목표 ... 5
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 5
• II. 연구방법 및 수행전략 ... 6
• 1. 재 료 ... 6
• 2. 연구전략 및 방법 ... 6
• III. 연구결과 ... 7
• 가. 개파보바이러스 항체 라이브러리 구축 및 항체치료제 개발 ... 7
• IV. 연구결과요약 ... 23
• 1. 국내 개파보바이러스(Canine parvovirus : CPV) 발생현황 조사 ... 23
• 2. 개파보바이러스 항체 라이브러리 구축 및 항체유전자 선발 ... 23
• 3. 개파보바이러스 특이 하이브리도마 확보 작성 ... 23
• V. 참고자료 ... 24
• 끝페이지 ... 25