초록 ▼

4. 당해년도 연구결과 요약
1. 1530 bp의 dog nectin-4 유전자의 쿨로닝 및 nectin-4 발현 Vero 세포주를 작성하였다.
2. dog nectin-4 유전자를 발현하는 Vero 세포에 국내 분리주와 Lederle주를 접종한 결과 개 디 스템 퍼 바이러스의 특이적인 세포변성효과를 나타내었다.
3. 분리주를 포함하여 개 디스템퍼 바이러스의 진단을 위한 real-time RT-PCR용 프라이머를 선정하였고 이를 바탕으로 CD1901주와 Lederle주에 대하여 민감도를 확인한 결과 1 및 10 TC

4. 당해년도 연구결과 요약
1. 1530 bp의 dog nectin-4 유전자의 쿨로닝 및 nectin-4 발현 Vero 세포주를 작성하였다.
2. dog nectin-4 유전자를 발현하는 Vero 세포에 국내 분리주와 Lederle주를 접종한 결과 개 디 스템 퍼 바이러스의 특이적인 세포변성효과를 나타내었다.
3. 분리주를 포함하여 개 디스템퍼 바이러스의 진단을 위한 real-time RT-PCR용 프라이머를 선정하였고 이를 바탕으로 CD1901주와 Lederle주에 대하여 민감도를 확인한 결과 1 및 10 TCID₅₀/ml까지 나타났다. 개의 주요바이러스에 대하여 특이도를 확인한 결과 개 디스템퍼 바이러스만 증폭하였다.
4. Ceramic hydroxyapatite column (CHT)을 이용하여 개 디스템퍼 바이러스의 정제방법을 설정하였다. 이 컬럼을 이용하여 정제한 1.0 mg/ml의 단백질의 바이러스 함량은 10^4.5 TCID₅₀/ml로 나타났다.
5. 3종의 Vero 세포를 roller bottle에 증식하고 개 디스템퍼 바이러스 분리주 CD1901-100P 를 접종한 결과 ds/Vero 세포에서 10^7.0 TCID₅₀/ml까지 증식하여, 바이러스 증식세포로 ds/Vero세포를 선정하였다.
6. 선정된 ds/Vero 세포를 CO2 배양기에서 개 디스템퍼 바이러스를 증식하였을 때 10^6.6 TCID₅₀/ml까지 증식하여, 최적 배양조건은 CO2 배양기에서 바이러스와 세포를 동시에 감염시키는 방법을 설정하였다.
7. ds/Vero 세포에서 증식한 바이러스를 0.1% formalin으로 불활화하고, 에쥬번트를 carbopol 10%가 되도록 하여 개 디스템퍼 바이러스 불활화백신을 100 ml을 제조하였다.
8. TFF system을 이용하여 CD19이주를 8배 농축하여 바이러스 함량이 10^7.5 TCID₅₀/ml임을 확인하였고, 이를 불활화하여 농축백신을 제조하였다.
9. PEG 8,000을 이용하여 CD1901주를 8배 농축하고, 불활화하여 농축백신을 제조하였다.
10. 3종의 개 디스템퍼 불활화백신(CDV, CDVTFF, CDVPEG)의 면역원성을 비교하기 위하여 기니픽에 1두분씩 근육 접종하였다. 2차 접종 후 2주에 채혈하여 중화항체가를 확인한 결과 1,448배 (2^10.5)를 나타내었으며, 3종의 백신은 큰 차이를 나타내지 않았다.
11. 개 디스템퍼 불활화백신을 3두의 개에 3회 접종하고 항체가를 측정한 결과 207.9 배 (2^7.7) 를 나타내었으며, 공격접종 후 임상증상을 확인한 결과 1두에서 관절염과 식욕부진을 나타내었으나 10일째에 회복하여, 3두 모두 방어하였다.
12. 개 디스템퍼 바이러스 분리주 CD1901주를 100대까지 계대 하였으며, 전체 유전자 염기서 열을 확인한 결과 총 30개의 핵산과 17개의 아미노산이 변이하였다. 17개의 변이 중 5개가 융합단백질에서 일어났으며, 5개 중 4개가 신호전달부위에서 변이된 것으로 확인되었다.
13. 국내 분리주를 이용하여 개 디스템퍼 바이러스 혈청중화시험법을 설정하였다. 162개의 개 혈청을 CD1901-78P와 Lederle주로 중화시험을 실시하고 상관관계를 분석한 결과 r값이 0.87로 나타내었다.
14. 개 디스템퍼 바이러스 CD19이주의 N 유전자를 클로닝하여 재조합 베클로바이러스를 작성하여, N 단백질의 발현을 확인하였다.

(출처 : 요약 1p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• I. 연구배경 및 목표 ... 3
• 1. 연구배경 ... 3
• 2. 연구최종목표 ... 4
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 5
• II. 연구방법 및 수행전략 ... 6
• 1. 재 료 ... 6
• 2. 연구전략 및 방법 ... 6
• III. 연구결과 ... 7
• 가. 제 1세부 과제명: 국내 분리주 특성 조사 및 혈청 조사 ... 7
• IV. 연구결과 요약 ... 19
• V. 참고문헌 ... 20
• 끝페이지 ... 20