SDS-PAGE 에서 단백질 염색에 관한 여러가지 방법들이 보고되고 있지만, 지금까지 CBB 에 의한 염색 방법이 가장 널리 이용되고 있다. 본 실험에서는 SDS-polyacrylamide gel 상에서 분리된 단백질의 염색시 소요되는 시간과 감도 측면에서 기존의 방법을 개선하고자, 30 여종의 염색시약을 대상으로 예비실험을 행한 결과 실험목적에 가장 부합된 염색시약으로 1-(2-hydroxy-4-sulfo-1-naphthylazo)-2-hydroxy-3-naphthoic acid (...
SDS-PAGE 에서 단백질 염색에 관한 여러가지 방법들이 보고되고 있지만, 지금까지 CBB 에 의한 염색 방법이 가장 널리 이용되고 있다. 본 실험에서는 SDS-polyacrylamide gel 상에서 분리된 단백질의 염색시 소요되는 시간과 감도 측면에서 기존의 방법을 개선하고자, 30 여종의 염색시약을 대상으로 예비실험을 행한 결과 실험목적에 가장 부합된 염색시약으로 1-(2-hydroxy-4-sulfo-1-naphthylazo)-2-hydroxy-3-naphthoic acid (NN)를 얻었다. NN을 이용하여 전기영동과 동시에 단백질을 염색함으로써 전기영동후의 염색 과정을 생략할 수 있고, 나아가 염색법에 의한 단백질의 분리·확인에 소요되는 시간을 줄일 수 있었다. BSA 일정량을 전기영동한 후 0.1% CBBR-250으로 염색한 경우 50 ng, 0.01-0.015% NN 으로 전기영동과 동시에 염색한 경우 25 ng, 전기영동한 후 0.05 % NN으로 염색한 경우 10 ng까지 band가 확인되었으며 이 결과로부터 NN에 의한 단백질 염색이 CBBR-250 에서 보다 2-5 배 정도 감도가 큼을 알 수 있었다. 0.25-12.5 때 범위에서 4가지 정제된 단백질에 대한 염색 정도와 단백질 농도와의 관계를 비교한 결과 4가지 단백질 모두 CBBR-250 염색에 비해 우수한 직선성을 보였다. 또 한 SDS-polyacrylamide gel 에 있어서 NN을 이용한 동시 염색방법은 실험에 사용된 모든 단백질에 대해 기존의 염색 방법과 동일한 염색 pattern을 나타냈다. 따라서 새로운 염색 시약 NN에 의한 단백질의 염색은 기존의 CBBR-250 염색법 보다 감도 및 정량성 면에서 우수하여 polyacrylamide gel 상에서의 단백질의 검지 방법으로서 유용할 것이라 사료된다.
SDS-PAGE 에서 단백질 염색에 관한 여러가지 방법들이 보고되고 있지만, 지금까지 CBB 에 의한 염색 방법이 가장 널리 이용되고 있다. 본 실험에서는 SDS-polyacrylamide gel 상에서 분리된 단백질의 염색시 소요되는 시간과 감도 측면에서 기존의 방법을 개선하고자, 30 여종의 염색시약을 대상으로 예비실험을 행한 결과 실험목적에 가장 부합된 염색시약으로 1-(2-hydroxy-4-sulfo-1-naphthylazo)-2-hydroxy-3-naphthoic acid (NN)를 얻었다. NN을 이용하여 전기영동과 동시에 단백질을 염색함으로써 전기영동후의 염색 과정을 생략할 수 있고, 나아가 염색법에 의한 단백질의 분리·확인에 소요되는 시간을 줄일 수 있었다. BSA 일정량을 전기영동한 후 0.1% CBBR-250으로 염색한 경우 50 ng, 0.01-0.015% NN 으로 전기영동과 동시에 염색한 경우 25 ng, 전기영동한 후 0.05 % NN으로 염색한 경우 10 ng까지 band가 확인되었으며 이 결과로부터 NN에 의한 단백질 염색이 CBBR-250 에서 보다 2-5 배 정도 감도가 큼을 알 수 있었다. 0.25-12.5 때 범위에서 4가지 정제된 단백질에 대한 염색 정도와 단백질 농도와의 관계를 비교한 결과 4가지 단백질 모두 CBBR-250 염색에 비해 우수한 직선성을 보였다. 또 한 SDS-polyacrylamide gel 에 있어서 NN을 이용한 동시 염색방법은 실험에 사용된 모든 단백질에 대해 기존의 염색 방법과 동일한 염색 pattern을 나타냈다. 따라서 새로운 염색 시약 NN에 의한 단백질의 염색은 기존의 CBBR-250 염색법 보다 감도 및 정량성 면에서 우수하여 polyacrylamide gel 상에서의 단백질의 검지 방법으로서 유용할 것이라 사료된다.
Although numerous methods have been reported on the protein staining in sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), CBB staining is the most commonly used method at present. This study was set to develop a new staining method for visualizing the proteins more rapidly, sensi...
Although numerous methods have been reported on the protein staining in sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), CBB staining is the most commonly used method at present. This study was set to develop a new staining method for visualizing the proteins more rapidly, sensitively, and simply. As the result of screening of thirty different kinds of dyes, it was observed that 1-(2-hydroxy-4-sulfo-1-naphthylazo)-2-hydroxy-3-naphthoic acid (NN) was the most competent for our purposes. We describe here a simultaneous staining method during eletrophoresis with a new dye, NN. This method eliminates posteletrophoretic staining step, thus cuts the total experimentation time and gel staining is independent upon the gel thickness. BSA concentrations as low as 10 ng were visualized by postelectrophoretic staining with 0.05 % NN and 25 ng by simultaneous staining with 0.01-0.015 % NN while 50 ng by 0.1 % CBBR-250 poststaining. NN staining has the sensitivity about two to five times as much as that of CBB staining. As comparing the relationship of band intensity versus concentration for four purified proteins, NN staining made better linearity than CBB staining in covering 0.25 to 12.5 μg proteins, respectivly. In addition, this method produced protein staining patterns which identical to the ones obtained by the conventional postelectrophoretic staining. We consider that NN staining method can be a recommendable alternative for the detection of proteins on polyacrylamide gels.
Although numerous methods have been reported on the protein staining in sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), CBB staining is the most commonly used method at present. This study was set to develop a new staining method for visualizing the proteins more rapidly, sensitively, and simply. As the result of screening of thirty different kinds of dyes, it was observed that 1-(2-hydroxy-4-sulfo-1-naphthylazo)-2-hydroxy-3-naphthoic acid (NN) was the most competent for our purposes. We describe here a simultaneous staining method during eletrophoresis with a new dye, NN. This method eliminates posteletrophoretic staining step, thus cuts the total experimentation time and gel staining is independent upon the gel thickness. BSA concentrations as low as 10 ng were visualized by postelectrophoretic staining with 0.05 % NN and 25 ng by simultaneous staining with 0.01-0.015 % NN while 50 ng by 0.1 % CBBR-250 poststaining. NN staining has the sensitivity about two to five times as much as that of CBB staining. As comparing the relationship of band intensity versus concentration for four purified proteins, NN staining made better linearity than CBB staining in covering 0.25 to 12.5 μg proteins, respectivly. In addition, this method produced protein staining patterns which identical to the ones obtained by the conventional postelectrophoretic staining. We consider that NN staining method can be a recommendable alternative for the detection of proteins on polyacrylamide gels.
주제어
#STAINING DETECTION PROTEINS SODIUM DODECYL SULFATEPOLYACRYLAMIDE ELECTROPHORESIS SDSPAGE 단백질
학위논문 정보
저자
Hong, Hee-youn
학위수여기관
全南大學校
학위구분
국내석사
학과
제약학과
발행연도
1993
총페이지
vii,49 leaves
키워드
STAINING DETECTION PROTEINS SODIUM DODECYL SULFATEPOLYACRYLAMIDE ELECTROPHORESIS SDSPAGE 단백질
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