[학위논문]체세포 핵 이식에 의해 생산된 소 복제 수정란의 배 발달 및 세포소기관의 변화 In vitro development and dynamics of cytoplasmic organelles in reconstructed bovine embryos following somatic cell nuclear transfer원문보기
본 연구는 소에서 난구세포를 이용한 핵치환 이후 reprogramming 초기 과정에서 일어나는 세포 내 변화를 살펴보기 위해 실시되었다. 이를 위하여 난구세포를 이용한 미세주입법에 의한 핵치환 방법 및 조건을 확립하고, 정상적인 체외 배발달을 유도하였다. 그리고 핵치환 이후 재형성된 난자에서 일어나는 현상을 살펴보기 위해 핵의 remodeling 과 핵의 변화에 따른 미세섬유와 ...
본 연구는 소에서 난구세포를 이용한 핵치환 이후 reprogramming 초기 과정에서 일어나는 세포 내 변화를 살펴보기 위해 실시되었다. 이를 위하여 난구세포를 이용한 미세주입법에 의한 핵치환 방법 및 조건을 확립하고, 정상적인 체외 배발달을 유도하였다. 그리고 핵치환 이후 재형성된 난자에서 일어나는 현상을 살펴보기 위해 핵의 remodeling 과 핵의 변화에 따른 미세섬유와 미세소관의 변화를 관찰하였다. 마지막으로 공여세포에서 유래되는 미토콘드리아와 미토콘드리아 DNA의 운명에 관해 연구를 실시하였다. 본 연구의 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 소 난구세포를 이용한 재형성된 소 난자의 난활성 및 배양된 난구세포를 이용한 핵치환 이후의 배 발달 본 연구에서는 핵치환과 핵치환 이후 배양을 실시하기 위한 기본 조건을 확립하기 위해 수행되었다. 핵치환에 의해 재형성된 난자의 활성화에 ionomycin과 6-dimethylaminopurine (6-DMAP)가 어떠한 영향을 미치는지를 연구하였으며, cytochalacin B의 극체 형성과 배발달에 미치는 영향을 살펴보았다. 또한 신선한 난구세포와 배양한 난구세포를 이용한 핵치환 이후의 발달능을 비교하였다. 대조군(2.2%)과 ionomycin만 처리한 군(24.4%)은 낮은 분할율을 보였으나, ionomycin과 6-DMAP를 같이 처리했을 경우 분할율의 유의한 상승효과를 보았다. 그리고 6-DMAP는 2 mM 의 농도, 처리 시간은 3시간에서 4시간 사이가 가장 효과 있는 것으로 사료된다. 소 난자를 이용한 핵치환의 경우 난활성 이후 극체의 방출이 일어나지 않으며, cytochalasin B(CB)를 처리한 경우에도 배발달율에 좋은 효과가 나타나지 않았다. 따라서 소의 핵치환의 경우 CB의 효과는 거의 없는 것으로 사료된다. 난구세포와 공배양을 실시한 경우와 1 mM의 glutathione을 첨가한 배지에서 배양하였을 때 배반포까지의 발달율이 높아지는 효과를 보았다. 난구세포를 배양하면 크기가 커지는데, 신선한 난구세포는 9.46 ± 1.66 ㎛ 이고 체외배양한 난구세포의 크기는 13.59 ± 1.42 ㎛ 였다. 그리고 냉동 해동시킨 난구세포를 이용한 핵치환은 가능하였지만, 배반포까지의 발달율은 떨어지는 것으로 관찰되었다. 2. 핵치환 이후 핵의 remodeling 및 microfilament, microtubule 의 변화 본 연구는 체외 성숙시킨 소의 난자에 핵을 제거하고, 미세주입방법을 이용하여 난구세포 핵치환을 실시한 후 핵과 미세섬유 및 미세소관의 형성 및 변화에 관한 연구이다. 핵의 remodeling은 Hoechst 33342를 이용한 형광염색을 실시한 후 관찰하였고, 핵의 변화에 따른 미세소관의 움직임은 면역형광염색을 실시한 후, 공초점주사현미경을 이용하여 관찰하였다. 미세주입법으로 치환된 난구세포핵은 핵막파괴와 함께 난자 내 여러 요소에 노출됨으로써 premature chromosome condensation (PCC)을 겪게되는 것으로 보인다. 이후 다시 팽윤되며 잠시동안의 재웅축을 거친 후 전핵을 형성하고, 정상적으로 유사분열을 겪게 된다. 또한 이러한 핵의 변화에 따른 미세소관과 미세섬유의 변화도 관찰하였다. 난구세포핵의 도입 직후 핵 주위에 미세소관층이 형성되며 전핵이 형성되는 과정에서 역시 핵 주위에 미세소관이 밀집되어 있음이 관찰되었다. 전핵이 형성된 이후에는 두 극의 방추사를 형성하여 정상적인 유사분열을 유도하는데, 이는 정상적인 체외수정, 난자 내 정자직접주입, 난자 내 정자두부 주입 이후에서도 동일한 형태를 보였다. 그리고 전핵 주위로 형성이 되지 않는 비정상적인 형태의 미세섬유가 많이 관찰이 되었다. 결론적으로 이 연구 결과들은 소 난자의 미세주입법을 이용한 핵치환 이후에 핵과 미세소관이 정상적으로 remodeling 될 수 있음을 보여주고 있다. 3. 핵치환 이후 mitochondria 및 mitochondrial DNA의 운명 본 연구에서는 핵치환 이후 착상 전 단계까지의 배 발달과정에서 공여세포에서 유래된 mitochondria 및 mitochondrial DNA(mtDNA)의 운명에 관한 연구를 실시하였다. 난구세포를 공여세포로 사용했다. 공여세포의 mitochondria의 운명을 평가하기 위해 MitoTracker Green FM fluorochrome으로 염색된 난구세포를 핵이 제거된 성숙난자에 미세주입에 의해 핵치환을 실시하였다. 공여세포에 MitoTracker의 염색은 핵치환 이후 배 발달의 저해 효과는 나타나지 않았다. 분할율은 69%(56/81), 배반포까지의 발달율은 6.2%(5/81)로 관찰되었다. 공여세포의 mitochondria의 형광은 핵치환 이후 세포질 내로 퍼져나가 분할 이후 각 할구에 무작위 적으로 분포되었다. 이 형광은 8에서 15-세포기 까지 관찰이 됐으며 이 사이의 형광을 관찰할 수 있는 난자의 수는 25%(5/20)였다. 그러나 16-세포기 이후에는 공여세포의 mitochondria를 감지할 수 없었다. 대조군으로 1-세포기에 발달 정지된 난자가 배반포가 형성되는 7일 째에도 형광을 나타내는 것으로 유추하면 형광의 퇴색에 의해 공여세포 mitochondria가 감지되지 못한 것이 아님을 알 수 있다. 핵치환 이후의 공여세포의 mtDNA의 운명을 알아보기 위해 Allele-specific PCR(AS-PCR) 방법과 직접 염기서열 분석, chromatography를 이용하여 분석하였다. AS-PCR에 의해 공여세포의 mtDNA는 1-, 2-, 4-, 8-, 16-세포기와 상실기와 배반포까지도 유지됨을 알 수 있었다. 직접염기서열에 의해서는 배반포에서 heteroplasmy가 관찰되지 않았지만, AS-PCR product를 이용한 직접 염기서열 분석을 한 결과 핵치환 유래의 배반포에서 얻어진 AS-PCR product의 염기서열이 공여세포의 mtDNA의 것과 일치하였다. 따라서 소에서의 핵치환 이후 공여세포 유래의 mtDNA는 적어도 배반포까지 유지되는 것으로 사료된다.
본 연구는 소에서 난구세포를 이용한 핵치환 이후 reprogramming 초기 과정에서 일어나는 세포 내 변화를 살펴보기 위해 실시되었다. 이를 위하여 난구세포를 이용한 미세주입법에 의한 핵치환 방법 및 조건을 확립하고, 정상적인 체외 배발달을 유도하였다. 그리고 핵치환 이후 재형성된 난자에서 일어나는 현상을 살펴보기 위해 핵의 remodeling 과 핵의 변화에 따른 미세섬유와 미세소관의 변화를 관찰하였다. 마지막으로 공여세포에서 유래되는 미토콘드리아와 미토콘드리아 DNA의 운명에 관해 연구를 실시하였다. 본 연구의 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 소 난구세포를 이용한 재형성된 소 난자의 난활성 및 배양된 난구세포를 이용한 핵치환 이후의 배 발달 본 연구에서는 핵치환과 핵치환 이후 배양을 실시하기 위한 기본 조건을 확립하기 위해 수행되었다. 핵치환에 의해 재형성된 난자의 활성화에 ionomycin과 6-dimethylaminopurine (6-DMAP)가 어떠한 영향을 미치는지를 연구하였으며, cytochalacin B의 극체 형성과 배발달에 미치는 영향을 살펴보았다. 또한 신선한 난구세포와 배양한 난구세포를 이용한 핵치환 이후의 발달능을 비교하였다. 대조군(2.2%)과 ionomycin만 처리한 군(24.4%)은 낮은 분할율을 보였으나, ionomycin과 6-DMAP를 같이 처리했을 경우 분할율의 유의한 상승효과를 보았다. 그리고 6-DMAP는 2 mM 의 농도, 처리 시간은 3시간에서 4시간 사이가 가장 효과 있는 것으로 사료된다. 소 난자를 이용한 핵치환의 경우 난활성 이후 극체의 방출이 일어나지 않으며, cytochalasin B(CB)를 처리한 경우에도 배발달율에 좋은 효과가 나타나지 않았다. 따라서 소의 핵치환의 경우 CB의 효과는 거의 없는 것으로 사료된다. 난구세포와 공배양을 실시한 경우와 1 mM의 glutathione을 첨가한 배지에서 배양하였을 때 배반포까지의 발달율이 높아지는 효과를 보았다. 난구세포를 배양하면 크기가 커지는데, 신선한 난구세포는 9.46 ± 1.66 ㎛ 이고 체외배양한 난구세포의 크기는 13.59 ± 1.42 ㎛ 였다. 그리고 냉동 해동시킨 난구세포를 이용한 핵치환은 가능하였지만, 배반포까지의 발달율은 떨어지는 것으로 관찰되었다. 2. 핵치환 이후 핵의 remodeling 및 microfilament, microtubule 의 변화 본 연구는 체외 성숙시킨 소의 난자에 핵을 제거하고, 미세주입방법을 이용하여 난구세포 핵치환을 실시한 후 핵과 미세섬유 및 미세소관의 형성 및 변화에 관한 연구이다. 핵의 remodeling은 Hoechst 33342를 이용한 형광염색을 실시한 후 관찰하였고, 핵의 변화에 따른 미세소관의 움직임은 면역형광염색을 실시한 후, 공초점주사현미경을 이용하여 관찰하였다. 미세주입법으로 치환된 난구세포핵은 핵막파괴와 함께 난자 내 여러 요소에 노출됨으로써 premature chromosome condensation (PCC)을 겪게되는 것으로 보인다. 이후 다시 팽윤되며 잠시동안의 재웅축을 거친 후 전핵을 형성하고, 정상적으로 유사분열을 겪게 된다. 또한 이러한 핵의 변화에 따른 미세소관과 미세섬유의 변화도 관찰하였다. 난구세포핵의 도입 직후 핵 주위에 미세소관층이 형성되며 전핵이 형성되는 과정에서 역시 핵 주위에 미세소관이 밀집되어 있음이 관찰되었다. 전핵이 형성된 이후에는 두 극의 방추사를 형성하여 정상적인 유사분열을 유도하는데, 이는 정상적인 체외수정, 난자 내 정자직접주입, 난자 내 정자두부 주입 이후에서도 동일한 형태를 보였다. 그리고 전핵 주위로 형성이 되지 않는 비정상적인 형태의 미세섬유가 많이 관찰이 되었다. 결론적으로 이 연구 결과들은 소 난자의 미세주입법을 이용한 핵치환 이후에 핵과 미세소관이 정상적으로 remodeling 될 수 있음을 보여주고 있다. 3. 핵치환 이후 mitochondria 및 mitochondrial DNA의 운명 본 연구에서는 핵치환 이후 착상 전 단계까지의 배 발달과정에서 공여세포에서 유래된 mitochondria 및 mitochondrial DNA(mtDNA)의 운명에 관한 연구를 실시하였다. 난구세포를 공여세포로 사용했다. 공여세포의 mitochondria의 운명을 평가하기 위해 MitoTracker Green FM fluorochrome으로 염색된 난구세포를 핵이 제거된 성숙난자에 미세주입에 의해 핵치환을 실시하였다. 공여세포에 MitoTracker의 염색은 핵치환 이후 배 발달의 저해 효과는 나타나지 않았다. 분할율은 69%(56/81), 배반포까지의 발달율은 6.2%(5/81)로 관찰되었다. 공여세포의 mitochondria의 형광은 핵치환 이후 세포질 내로 퍼져나가 분할 이후 각 할구에 무작위 적으로 분포되었다. 이 형광은 8에서 15-세포기 까지 관찰이 됐으며 이 사이의 형광을 관찰할 수 있는 난자의 수는 25%(5/20)였다. 그러나 16-세포기 이후에는 공여세포의 mitochondria를 감지할 수 없었다. 대조군으로 1-세포기에 발달 정지된 난자가 배반포가 형성되는 7일 째에도 형광을 나타내는 것으로 유추하면 형광의 퇴색에 의해 공여세포 mitochondria가 감지되지 못한 것이 아님을 알 수 있다. 핵치환 이후의 공여세포의 mtDNA의 운명을 알아보기 위해 Allele-specific PCR(AS-PCR) 방법과 직접 염기서열 분석, chromatography를 이용하여 분석하였다. AS-PCR에 의해 공여세포의 mtDNA는 1-, 2-, 4-, 8-, 16-세포기와 상실기와 배반포까지도 유지됨을 알 수 있었다. 직접염기서열에 의해서는 배반포에서 heteroplasmy가 관찰되지 않았지만, AS-PCR product를 이용한 직접 염기서열 분석을 한 결과 핵치환 유래의 배반포에서 얻어진 AS-PCR product의 염기서열이 공여세포의 mtDNA의 것과 일치하였다. 따라서 소에서의 핵치환 이후 공여세포 유래의 mtDNA는 적어도 배반포까지 유지되는 것으로 사료된다.
These studies were performed to investigate the general changes in reconstructed bovine embryos following nuclear transfer with cumulus cells. For this purpose, after which microfilament and microtubule organizations in conjunction with nuclear remodeling were examined, the basic conditions for nucl...
These studies were performed to investigate the general changes in reconstructed bovine embryos following nuclear transfer with cumulus cells. For this purpose, after which microfilament and microtubule organizations in conjunction with nuclear remodeling were examined, the basic conditions for nuclear transfer and in vitro culture were established. In addition, the fate of mitochondria and mitochondrial DNA were identified. The results obtained in these studies were summarized as follows; 1. Activation and in vitro development of reconstructed bovine embryos with cryopreserved cumulus cells This study was performed to establish the basic condition for nuclear transfer and in vitro culture. The effect of ionomycin and 6-dimethylaminopurine (6-DMAP) was investigated on the activation of the reconstructed embryos after nuclear transfer. The effect of cytochalacin B was also examined on activation and development of reconstructed embryos. In addition, the developmental potential of reconstructed embryos following nuclear transfer was compared between two different donor cell, fresh and cultured cumulus cells. Few reconstructed embryos were activated in control (2.2%) and ionomycin only (24.4%) treated groups. A significant improvement of activation efficiency was observed after ionomycin followed by 2 mM 6-DMAP treatment for 3 hours which was enough time for the activation of reconstructed bovine embryos. Blastocyst formation rate was improved after culture in CR1 medium layered with cumulus cells (10.5%) and CR1 medium supplemented with 1 mM glutathione (13.2%). There was no formation of polar body in reconstructed oocytes after nuclear transfer both in control and CB treated groups.Therefore, the data suggested that effect of CB on development of bovine reconstructed embryo is negligible. Diameter of fresh and cultured cumulus cell was 9.46 ± 1.66 and 13.59 ± 1.42 ㎛, respectively, which chowing the diameter of cumulus cell was enlarged by culture. Although frozen-thawed cumulus cells could be used as donor cell for nuclear transfer, the developmental potential of frozen-thawed cultured cell significantly depressed to the blastocyst stage (3.1%) compared to that of fresh cell (12.9%). 2. Nucleus Remodeling and Microtubule and Microfilament Organizations in Reconstructed Bovine Embryos Following Nuclear Transfer In this study, the nuclear remodeling patterns, microfilament and microtubule configurations in nuclear transfer embryos were examined after nuclear transplantation by the microinjection of cumulus cell. The effect of artificial activation was also investigated on the nuclear remodeling after the nuclear transfer. Activation was induced by calcium ionomycin followed by 6-dimethylaminopurine for 3 hr. The remodeling of nuclei was imaged with Hoechst 33342 under a fluorescence microscope and microtubule and microfilament configurations were imaged with fluorescent labeled monoclonal α-tubulin antibody and FITC-labeled phalloidin under a laser scanning confocal microscope. Within 1 h after the cumulus cell injection, enlarged nucleus in nuclear transfer embryos was observed and chromosomes were prematurely condensed at 2 h after injection. At 4 h after injection, pseudo-pronucleus firstly appeared. Dense microtubule network formed around the nucleus shortly after microinjection. At the pronucleus stage, the formation of microtubule network around pseudo-pronuclei was also observed. At mitosis, microtubule dynamics were similar to those obtained from normal fertilization. Once forming a pronucleus, the embryos reconstructed by nuclear transfer could induce changes in microtubules similar to those observed in IVF, ICSI and ICSHI. However, abnormal microfilament assembly was frequently observed in nuclear transfer bovine embryo. The present study examined the formation of pseudo-pronucleus, microfilament and microtubule formation around nuclei following nuclear transfer. These results indicate that the reconstructed embryos are effectively activated and have developmental potential, and that the microtubule can be remodeled in association with donor nuclei within nuclear-transferred bovine oocytes. 3. Fate of donor mitochondria and mitochondrial DNA following nuclear transfer In this study, the developmental potential of reconstructed embryos and the fate of donor mitochondria and mitochondrial DNA were examined during preimplantation development after nuclear transfer in cattle. Isolated cumulus cells were used as donor cells in nuclear transfer. To evaluate the fate of donor mitochondria, donor cells labelled with MitoTracker Green FM fluorochrome were injected into enucleated bovine MII oocytes and cultured in vitro. MitoTracker labelling on donor cells did not have a detrimental effect on blastocyst formation following nuclear transfer. The cleavage rate was about 69% (56/81) and blastocyst formation rate was 6.2% (5/81) at 7 days after nuclear transfer. The labelled mitochondria dispersed to the cytoplasm and became distributed between blastomeres and could be identified up to the 8- to 15-cell stage. Small patches of mitochondria were detected in some 8- to 15-cell stage embryos (5/20). However, donor mitochondria were not detected in embryos at the 16-cell stage and subsequent developmental stages. In the control group, mitochondria could be identified in arrested 1-cell embryos up to 7 days after nuclear transfer. Mitochondrial DNA heteroplasmy in the nuclear transfer embryos were analysed by Allele-specific PCR (AS-PCR) and direct sequencing methods. AS-PCR analysis for detection of donor mitochondrial DNA was performed at the 1-, 2-, 4-, 8-, 16-cell, morula and blastocyst stages of embryo. The mitochondrial DNA from donor cells were detected in all of the developmental stages of nuclear transfer embryos. To confirm the mtDNA heteroplasmy in cloned embryos, AS-PCR product from nuclear transfer-derived blastocyst was analysed by DNA sequencing and DNA chromatography. These results indicates that foreign cytoplasmic genome from donor cells was not destroyed by cytoplasmic event during nuclear transfer.
These studies were performed to investigate the general changes in reconstructed bovine embryos following nuclear transfer with cumulus cells. For this purpose, after which microfilament and microtubule organizations in conjunction with nuclear remodeling were examined, the basic conditions for nuclear transfer and in vitro culture were established. In addition, the fate of mitochondria and mitochondrial DNA were identified. The results obtained in these studies were summarized as follows; 1. Activation and in vitro development of reconstructed bovine embryos with cryopreserved cumulus cells This study was performed to establish the basic condition for nuclear transfer and in vitro culture. The effect of ionomycin and 6-dimethylaminopurine (6-DMAP) was investigated on the activation of the reconstructed embryos after nuclear transfer. The effect of cytochalacin B was also examined on activation and development of reconstructed embryos. In addition, the developmental potential of reconstructed embryos following nuclear transfer was compared between two different donor cell, fresh and cultured cumulus cells. Few reconstructed embryos were activated in control (2.2%) and ionomycin only (24.4%) treated groups. A significant improvement of activation efficiency was observed after ionomycin followed by 2 mM 6-DMAP treatment for 3 hours which was enough time for the activation of reconstructed bovine embryos. Blastocyst formation rate was improved after culture in CR1 medium layered with cumulus cells (10.5%) and CR1 medium supplemented with 1 mM glutathione (13.2%). There was no formation of polar body in reconstructed oocytes after nuclear transfer both in control and CB treated groups.Therefore, the data suggested that effect of CB on development of bovine reconstructed embryo is negligible. Diameter of fresh and cultured cumulus cell was 9.46 ± 1.66 and 13.59 ± 1.42 ㎛, respectively, which chowing the diameter of cumulus cell was enlarged by culture. Although frozen-thawed cumulus cells could be used as donor cell for nuclear transfer, the developmental potential of frozen-thawed cultured cell significantly depressed to the blastocyst stage (3.1%) compared to that of fresh cell (12.9%). 2. Nucleus Remodeling and Microtubule and Microfilament Organizations in Reconstructed Bovine Embryos Following Nuclear Transfer In this study, the nuclear remodeling patterns, microfilament and microtubule configurations in nuclear transfer embryos were examined after nuclear transplantation by the microinjection of cumulus cell. The effect of artificial activation was also investigated on the nuclear remodeling after the nuclear transfer. Activation was induced by calcium ionomycin followed by 6-dimethylaminopurine for 3 hr. The remodeling of nuclei was imaged with Hoechst 33342 under a fluorescence microscope and microtubule and microfilament configurations were imaged with fluorescent labeled monoclonal α-tubulin antibody and FITC-labeled phalloidin under a laser scanning confocal microscope. Within 1 h after the cumulus cell injection, enlarged nucleus in nuclear transfer embryos was observed and chromosomes were prematurely condensed at 2 h after injection. At 4 h after injection, pseudo-pronucleus firstly appeared. Dense microtubule network formed around the nucleus shortly after microinjection. At the pronucleus stage, the formation of microtubule network around pseudo-pronuclei was also observed. At mitosis, microtubule dynamics were similar to those obtained from normal fertilization. Once forming a pronucleus, the embryos reconstructed by nuclear transfer could induce changes in microtubules similar to those observed in IVF, ICSI and ICSHI. However, abnormal microfilament assembly was frequently observed in nuclear transfer bovine embryo. The present study examined the formation of pseudo-pronucleus, microfilament and microtubule formation around nuclei following nuclear transfer. These results indicate that the reconstructed embryos are effectively activated and have developmental potential, and that the microtubule can be remodeled in association with donor nuclei within nuclear-transferred bovine oocytes. 3. Fate of donor mitochondria and mitochondrial DNA following nuclear transfer In this study, the developmental potential of reconstructed embryos and the fate of donor mitochondria and mitochondrial DNA were examined during preimplantation development after nuclear transfer in cattle. Isolated cumulus cells were used as donor cells in nuclear transfer. To evaluate the fate of donor mitochondria, donor cells labelled with MitoTracker Green FM fluorochrome were injected into enucleated bovine MII oocytes and cultured in vitro. MitoTracker labelling on donor cells did not have a detrimental effect on blastocyst formation following nuclear transfer. The cleavage rate was about 69% (56/81) and blastocyst formation rate was 6.2% (5/81) at 7 days after nuclear transfer. The labelled mitochondria dispersed to the cytoplasm and became distributed between blastomeres and could be identified up to the 8- to 15-cell stage. Small patches of mitochondria were detected in some 8- to 15-cell stage embryos (5/20). However, donor mitochondria were not detected in embryos at the 16-cell stage and subsequent developmental stages. In the control group, mitochondria could be identified in arrested 1-cell embryos up to 7 days after nuclear transfer. Mitochondrial DNA heteroplasmy in the nuclear transfer embryos were analysed by Allele-specific PCR (AS-PCR) and direct sequencing methods. AS-PCR analysis for detection of donor mitochondrial DNA was performed at the 1-, 2-, 4-, 8-, 16-cell, morula and blastocyst stages of embryo. The mitochondrial DNA from donor cells were detected in all of the developmental stages of nuclear transfer embryos. To confirm the mtDNA heteroplasmy in cloned embryos, AS-PCR product from nuclear transfer-derived blastocyst was analysed by DNA sequencing and DNA chromatography. These results indicates that foreign cytoplasmic genome from donor cells was not destroyed by cytoplasmic event during nuclear transfer.
주제어
#VITRO DYNAMICS CYTOPLASMIC ORGANELLES RECONSTRUCTED BOVINE EMBRYOS SOMATIC CELL NUCLEAR 체세포 핵 이식 소 복제 수정란 배 세포기관
학위논문 정보
저자
도정태
학위수여기관
건국대학교
학위구분
국내박사
학과
축산학과
발행연도
2002
총페이지
ix, 153 p.
키워드
VITRO DYNAMICS CYTOPLASMIC ORGANELLES RECONSTRUCTED BOVINE EMBRYOS SOMATIC CELL NUCLEAR 체세포 핵 이식 소 복제 수정란 배 세포기관
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