[학위논문]Gene Cloning of Myblike Transcriptional factors and DnaJlike Protein Gene in Glycine max L. : 콩에서 전사인자로 작용하는 Myblike 유전자와 DnaJlike 계통 단백질 유전자의 클로닝원문보기
일반적으로 myb-like protein은 고등식물에서 transcriptional factor로 알려져 있으며, 이러한 식물의 myb-like protein들은 2차 대사작용의 조절과 세포의 형태와 소멸 그리고 호르몬, 한해, 바이러스의 감염에 대한 반응, 특히 방어기작과 관련되어 있는 것으로 알려져 있다. 또한 안토시아닌 생합성의 조절에서도 중요한 역할을 한다. 본 연구에서는 한국 콩 장려품종 신팔달 2호를 사용하여 ...
일반적으로 myb-like protein은 고등식물에서 transcriptional factor로 알려져 있으며, 이러한 식물의 myb-like protein들은 2차 대사작용의 조절과 세포의 형태와 소멸 그리고 호르몬, 한해, 바이러스의 감염에 대한 반응, 특히 방어기작과 관련되어 있는 것으로 알려져 있다. 또한 안토시아닌 생합성의 조절에서도 중요한 역할을 한다. 본 연구에서는 한국 콩 장려품종 신팔달 2호를 사용하여 PCR 방법을 기초로 유전자 cloning이 수행되었다. Myb-like protein 유전자를 클로닝하기 위하여 식물에서 잘 보존되어 있는 R2R3 지역에서 specific primer를 제작하여 RACE가 실시되었다. RACE 산물은 subcloning과 염기서열 분석을 통해 확인되었으며, Gmmyb5 라고 명명된 full-length cDNA는 총길이가 1,036 bp로서 5'쪽에 148 bp의 UTR을 3'쪽에 149 bp를 포함하고 있으며, 237개의 아미노산 잔기로 이루어진 27 kDa의 폴리펩타이드를 암호화하고 있다. Gmmyb5의 R2R3 지역은 다른 myb-like protein 계열과 상당히 높은 유사성을 보였으며, 이를 통해 유추되는 그 기능이 안토시아닌 생합성의 조절작용인 것으로 보여진다. 신팔달 2호 콩에서 상처에 의해 유도되는 유전자들을 클로닝하기 위하여, 매우 드물게 발현되는 유전자들을 분리하는데 유용한 방법인 suppression subtractive hybridization을 통해서 선택적으로 분리되었다. 분리된 유전자들의 특성은 northern blotting을 통해 분석되었다. gmwi23 이라 명명된 유전자가 RACE-PCR을 통해 분리되었으며, 유전자의 염기서열 분석을 통해서 N말단에 DnaJ 영역을 지니고 있는 것이 밝혀졌다. Gmwi23은 Water stress에 의해 야기되는 변성으로부터 세포내 핵의 단백질들을 보호하는 역할을 하는 것으로 추정된다.
일반적으로 myb-like protein은 고등식물에서 transcriptional factor로 알려져 있으며, 이러한 식물의 myb-like protein들은 2차 대사작용의 조절과 세포의 형태와 소멸 그리고 호르몬, 한해, 바이러스의 감염에 대한 반응, 특히 방어기작과 관련되어 있는 것으로 알려져 있다. 또한 안토시아닌 생합성의 조절에서도 중요한 역할을 한다. 본 연구에서는 한국 콩 장려품종 신팔달 2호를 사용하여 PCR 방법을 기초로 유전자 cloning이 수행되었다. Myb-like protein 유전자를 클로닝하기 위하여 식물에서 잘 보존되어 있는 R2R3 지역에서 specific primer를 제작하여 RACE가 실시되었다. RACE 산물은 subcloning과 염기서열 분석을 통해 확인되었으며, Gmmyb5 라고 명명된 full-length cDNA는 총길이가 1,036 bp로서 5'쪽에 148 bp의 UTR을 3'쪽에 149 bp를 포함하고 있으며, 237개의 아미노산 잔기로 이루어진 27 kDa의 폴리펩타이드를 암호화하고 있다. Gmmyb5의 R2R3 지역은 다른 myb-like protein 계열과 상당히 높은 유사성을 보였으며, 이를 통해 유추되는 그 기능이 안토시아닌 생합성의 조절작용인 것으로 보여진다. 신팔달 2호 콩에서 상처에 의해 유도되는 유전자들을 클로닝하기 위하여, 매우 드물게 발현되는 유전자들을 분리하는데 유용한 방법인 suppression subtractive hybridization을 통해서 선택적으로 분리되었다. 분리된 유전자들의 특성은 northern blotting을 통해 분석되었다. gmwi23 이라 명명된 유전자가 RACE-PCR을 통해 분리되었으며, 유전자의 염기서열 분석을 통해서 N말단에 DnaJ 영역을 지니고 있는 것이 밝혀졌다. Gmwi23은 Water stress에 의해 야기되는 변성으로부터 세포내 핵의 단백질들을 보호하는 역할을 하는 것으로 추정된다.
Myb-like proteins have commonly known to be related transcriptional factors involved in the regulation of secondary metabolism such as the control of cell shape and fate, the reponses to hormones, drought and viral infection in higher plants. Myb-like proteins also are known to play an important rol...
Myb-like proteins have commonly known to be related transcriptional factors involved in the regulation of secondary metabolism such as the control of cell shape and fate, the reponses to hormones, drought and viral infection in higher plants. Myb-like proteins also are known to play an important role in the control of anthocyanin biosynthesis. In this study, myb-like transcriptional factors were analyzed for their sequence homology and functional differences. PCR based cloning was performed with degenerate primers designed by R2R3 region conserved in several plants. The full-length cDNA of Gmmyb5, which is comprised of 1036 bp including 148 bp of 5'-untranslated region and 149 bp of' 3'-untranslated region, was isolated using 3' and 5'-RACE PCR. The Gmmyb5 gene encodes 27 kDa polypeptide consisting of 237 amino acid residues. The R2R3 region of Gmmyb5 showed highly significant homology to other myb-like family. The functions of Gmmyb5 cDNA were deduced from the regulation of anthocyanin biosynthesis Wounding-inducible genes from soybean were selectively isolated using suppression subtractive hybridization (SSH) that is a useful method to isolate rarely expressed genes. The characteristics of isoated genes were analyzed by northern blot. The full-length cDNA of gmwi23 was isolated using RACE-PCR. The derived amino acid sequence contains DnaJ domain at the N- terminal and bipartite nuclear localization signal at the C-terminal. Gmwi23 may have a role in protecting some nuclear proteins from denaturation caused by water stress.
Myb-like proteins have commonly known to be related transcriptional factors involved in the regulation of secondary metabolism such as the control of cell shape and fate, the reponses to hormones, drought and viral infection in higher plants. Myb-like proteins also are known to play an important role in the control of anthocyanin biosynthesis. In this study, myb-like transcriptional factors were analyzed for their sequence homology and functional differences. PCR based cloning was performed with degenerate primers designed by R2R3 region conserved in several plants. The full-length cDNA of Gmmyb5, which is comprised of 1036 bp including 148 bp of 5'-untranslated region and 149 bp of' 3'-untranslated region, was isolated using 3' and 5'-RACE PCR. The Gmmyb5 gene encodes 27 kDa polypeptide consisting of 237 amino acid residues. The R2R3 region of Gmmyb5 showed highly significant homology to other myb-like family. The functions of Gmmyb5 cDNA were deduced from the regulation of anthocyanin biosynthesis Wounding-inducible genes from soybean were selectively isolated using suppression subtractive hybridization (SSH) that is a useful method to isolate rarely expressed genes. The characteristics of isoated genes were analyzed by northern blot. The full-length cDNA of gmwi23 was isolated using RACE-PCR. The derived amino acid sequence contains DnaJ domain at the N- terminal and bipartite nuclear localization signal at the C-terminal. Gmwi23 may have a role in protecting some nuclear proteins from denaturation caused by water stress.
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