간흡충증은 동아시아에서 유행하는 기생충성 질환으로 우리나라에서도 그 감염율이 저하되지 않는 장내 기생충성 질환중 하나이다. 간흡충증은 감염기간이 오래도록 지속되는 만성적 경과를 취해서 유행지 주민들의 건강을 위협하는 풍토병으로서 우리나라 대소 하천유역에 유행지가 넓게 형성되어있다. 간흡충은 유충기에 miracidium, sporocyst, redia, cercaria, metacercaria를 거쳐서 성충이 되는 복잡한 생활사를 영위한다. 따라서 간흡충의 각 발육단계별 생리-대사 작용, 숙주에 대한 병인작용, 진단 및 약물 개발을 위한 유용한 유전자 탐색 등 다양한 조건에서 간흡충의 유전자 발현 양상을 연구하기 위하여 많은 양의 간흡충 유전자 정보가 필요하다. 본 논문에서는 간흡충 유전자의 발현 양상을 효율적으로 연구할 수 있는 기본 바탕을 마련하기 위하여 간흡충 성충 cDNA의 expressed sequence tag (...
간흡충증은 동아시아에서 유행하는 기생충성 질환으로 우리나라에서도 그 감염율이 저하되지 않는 장내 기생충성 질환중 하나이다. 간흡충증은 감염기간이 오래도록 지속되는 만성적 경과를 취해서 유행지 주민들의 건강을 위협하는 풍토병으로서 우리나라 대소 하천유역에 유행지가 넓게 형성되어있다. 간흡충은 유충기에 miracidium, sporocyst, redia, cercaria, metacercaria를 거쳐서 성충이 되는 복잡한 생활사를 영위한다. 따라서 간흡충의 각 발육단계별 생리-대사 작용, 숙주에 대한 병인작용, 진단 및 약물 개발을 위한 유용한 유전자 탐색 등 다양한 조건에서 간흡충의 유전자 발현 양상을 연구하기 위하여 많은 양의 간흡충 유전자 정보가 필요하다. 본 논문에서는 간흡충 유전자의 발현 양상을 효율적으로 연구할 수 있는 기본 바탕을 마련하기 위하여 간흡충 성충 cDNA의 expressed sequence tag (EST)를 다량 획득하고자 하였다. 간흡충 성충에서 total RNA를 추출하고 poly (A)+ mRNA를 정제하여 cDNA library를 제작하였다. Bacteriophage cDNA library를 plasmid로 전환시켰다. 자동화장비를 사용하여 plasmid DNA를 추출하고 자동화염기서열분석기기로 cDNA클론 3,000개의 염기서열을 결정하였다. 그 클론 중에서 2,387개가 유용한 EST로 선별되었다. EST의 길이는 평균 560 bp이었으며 cluster 1,573개로 assembly되었다. 전체 EST중 singleton은 51%이었으며, 나머지 EST 1,162개는 cluster 348개로 assembly되었다. BLAST X와 BLAST N 검색을 통해서 cluster 848개가 표지되었으며, 나머지 46%는 unidentifiable gene 이었다. 간흡충 성충 EST는 모두 11개의 functional class로 분류되었으며, 대량 발현되는 유전자는 단백분해효소, 대사 관련 house keeping 유전자이었다. 이미 밝혀진 간흡충 유전자와 일치하는 cluster는 75개이었다. 간흡충 EST 분석을 통해서 발현 유전자의 염기서열을 대량으로 획득하였으며 간흡충 유전자에 대한 기능적 연구 수행에 필요한 기초 자료를 확보하였다. 이 EST정보는 간흡충의 발육단계별, 조직별, 각종 자극 및 특정 환경에 대한 유전자의 발현 조절과 그 결과로 나타나는 생체 반응을 유전자 수준에서 규명하는 연구에 활용될 것이다.
간흡충증은 동아시아에서 유행하는 기생충성 질환으로 우리나라에서도 그 감염율이 저하되지 않는 장내 기생충성 질환중 하나이다. 간흡충증은 감염기간이 오래도록 지속되는 만성적 경과를 취해서 유행지 주민들의 건강을 위협하는 풍토병으로서 우리나라 대소 하천유역에 유행지가 넓게 형성되어있다. 간흡충은 유충기에 miracidium, sporocyst, redia, cercaria, metacercaria를 거쳐서 성충이 되는 복잡한 생활사를 영위한다. 따라서 간흡충의 각 발육단계별 생리-대사 작용, 숙주에 대한 병인작용, 진단 및 약물 개발을 위한 유용한 유전자 탐색 등 다양한 조건에서 간흡충의 유전자 발현 양상을 연구하기 위하여 많은 양의 간흡충 유전자 정보가 필요하다. 본 논문에서는 간흡충 유전자의 발현 양상을 효율적으로 연구할 수 있는 기본 바탕을 마련하기 위하여 간흡충 성충 cDNA의 expressed sequence tag (EST)를 다량 획득하고자 하였다. 간흡충 성충에서 total RNA를 추출하고 poly (A)+ mRNA를 정제하여 cDNA library를 제작하였다. Bacteriophage cDNA library를 plasmid로 전환시켰다. 자동화장비를 사용하여 plasmid DNA를 추출하고 자동화염기서열분석기기로 cDNA클론 3,000개의 염기서열을 결정하였다. 그 클론 중에서 2,387개가 유용한 EST로 선별되었다. EST의 길이는 평균 560 bp이었으며 cluster 1,573개로 assembly되었다. 전체 EST중 singleton은 51%이었으며, 나머지 EST 1,162개는 cluster 348개로 assembly되었다. BLAST X와 BLAST N 검색을 통해서 cluster 848개가 표지되었으며, 나머지 46%는 unidentifiable gene 이었다. 간흡충 성충 EST는 모두 11개의 functional class로 분류되었으며, 대량 발현되는 유전자는 단백분해효소, 대사 관련 house keeping 유전자이었다. 이미 밝혀진 간흡충 유전자와 일치하는 cluster는 75개이었다. 간흡충 EST 분석을 통해서 발현 유전자의 염기서열을 대량으로 획득하였으며 간흡충 유전자에 대한 기능적 연구 수행에 필요한 기초 자료를 확보하였다. 이 EST정보는 간흡충의 발육단계별, 조직별, 각종 자극 및 특정 환경에 대한 유전자의 발현 조절과 그 결과로 나타나는 생체 반응을 유전자 수준에서 규명하는 연구에 활용될 것이다.
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