유전자 치료용 재조합 아데노바이러스의 생산에 미치는 293 부착 세포와 293 부유 세포의 passage에 따른 영향 Monolayer and Suspension Cultures of HEK 293 Cells for Recombinant Adenovirus Production for Gene Therapy : Effect of “Cell Passage Number”원문보기
최근에 들어 유전자 치료를 위한 재조합 아데노바이러스의 생산에 대한 수요가 지속적으로 증가하고 있다. 아데노바이러스를 높은 역가(力價)로 생산하기 위해서는, E1 유전자가 결핍된 아데노바이러스의 전파(傳播)를 지원하는 HEK (Human Embryo Kidney) 293 세포가 필요하다. ATCC로부터 passage 31의 293 세포를 얻었고, 아데노바이러...
최근에 들어 유전자 치료를 위한 재조합 아데노바이러스의 생산에 대한 수요가 지속적으로 증가하고 있다. 아데노바이러스를 높은 역가(力價)로 생산하기 위해서는, E1 유전자가 결핍된 아데노바이러스의 전파(傳播)를 지원하는 HEK (Human Embryo Kidney) 293 세포가 필요하다. ATCC로부터 passage 31의 293 세포를 얻었고, 아데노바이러스의 대량생산을 위해서는 계속된 passage의 세포들이 필요하다. 따라서 본 연구에서는 HEK 293 세포의 passage가 지남에 따라 세포의 성장과 바이러스의 생산에 어떠한 영향이 있는가를 조사하였다. 부착 배양을 했을 때, passage가 지남에 따라 293 세포의 크기는 작아졌고 비성장속도 $(\mu)$는 빨라졌다. Passage 73에서의 $(\mu)$ 값은 passage 43에 비해 약 2.5배 증가하였다. 부착 배양의 경우, 아데노바이러스의 생산 역시 세포의 passage에 의해 영향을 받았다. Passage 66의 293 세포에서 얻은 바이러스의 역가는 passage 44에 비해 약 10배 정도 증가하였다. 게다가, 최적의 바이러스 회수 시간 역시 passage가 지난 세포에서 빨라짐을 확인하였다. 한편 293 부유 세포들의 passage에 따른 성장 형태도 조사했으나, 성장 형태나 세포 크기, 그리고 비성장속도에 있어 passage가 35에 이르기까지 주목할만한 차이를 발견하지 못하였다. 모든 것을 고려했을 때, 부착 배양시 293 세포의 passage가 세포 성장과 바이러스의 생산에 영향을 주었다. 계속된 세포의 passage 동안 RCA는 발견되지 않았다.
최근에 들어 유전자 치료를 위한 재조합 아데노바이러스의 생산에 대한 수요가 지속적으로 증가하고 있다. 아데노바이러스를 높은 역가(力價)로 생산하기 위해서는, E1 유전자가 결핍된 아데노바이러스의 전파(傳播)를 지원하는 HEK (Human Embryo Kidney) 293 세포가 필요하다. ATCC로부터 passage 31의 293 세포를 얻었고, 아데노바이러스의 대량생산을 위해서는 계속된 passage의 세포들이 필요하다. 따라서 본 연구에서는 HEK 293 세포의 passage가 지남에 따라 세포의 성장과 바이러스의 생산에 어떠한 영향이 있는가를 조사하였다. 부착 배양을 했을 때, passage가 지남에 따라 293 세포의 크기는 작아졌고 비성장속도 $(\mu)$는 빨라졌다. Passage 73에서의 $(\mu)$ 값은 passage 43에 비해 약 2.5배 증가하였다. 부착 배양의 경우, 아데노바이러스의 생산 역시 세포의 passage에 의해 영향을 받았다. Passage 66의 293 세포에서 얻은 바이러스의 역가는 passage 44에 비해 약 10배 정도 증가하였다. 게다가, 최적의 바이러스 회수 시간 역시 passage가 지난 세포에서 빨라짐을 확인하였다. 한편 293 부유 세포들의 passage에 따른 성장 형태도 조사했으나, 성장 형태나 세포 크기, 그리고 비성장속도에 있어 passage가 35에 이르기까지 주목할만한 차이를 발견하지 못하였다. 모든 것을 고려했을 때, 부착 배양시 293 세포의 passage가 세포 성장과 바이러스의 생산에 영향을 주었다. 계속된 세포의 passage 동안 RCA는 발견되지 않았다.
In recent years, the need for the production of recombinant adenovirus for gene therapy is constantly increasing. To produce E1-deficient recombinant adenovirus in high titer, HEK (Human Embryo Kidney) 293 cells which support the propagation of E1-deficient adenovirus are required. Because the 293 c...
In recent years, the need for the production of recombinant adenovirus for gene therapy is constantly increasing. To produce E1-deficient recombinant adenovirus in high titer, HEK (Human Embryo Kidney) 293 cells which support the propagation of E1-deficient adenovirus are required. Because the 293 cells transfected with the left 11% of the adenoviral genome express E1A and E1B viral gene products, they are permissive for growth of E1-deficient adenovirus. The 293 cells are obtained at the passage number of 31 from ATCC, and the cell of successive passages are required to produce adenovirus in large scale. Thus, we investigated the effect of passage number of 293 cells on cell growth and adenovirus production. In monolayer culture, the cell size of 293 cells became smaller and the specific growth rate $(\mu)$ became faster as the passage number increased. The $(\mu)$ at the passage number of 73 was increased approximately 2.5-fold, compared with that at the passage number of 43. In monolayer culture, the adenovirus production was also influenced by cell passage number. The virus titer obtained from 293 cells at the passage number of 66 was increased approximately 10-fold, compared with that at the passage number of 44. Furthermore, the optimal time for virus harvest post-infection became shorter for the cells at the later passage. In suspension culture, the cell size and m of 293 cells did not change significantly as passage number increased up to 35. Taken together, the passage number of 293 cells influenced cell growth and adenovirus production in the monolayer culture. Furthermore, replication-competent adenovirus was not detected during cell passages tested in monolayer culture.
In recent years, the need for the production of recombinant adenovirus for gene therapy is constantly increasing. To produce E1-deficient recombinant adenovirus in high titer, HEK (Human Embryo Kidney) 293 cells which support the propagation of E1-deficient adenovirus are required. Because the 293 cells transfected with the left 11% of the adenoviral genome express E1A and E1B viral gene products, they are permissive for growth of E1-deficient adenovirus. The 293 cells are obtained at the passage number of 31 from ATCC, and the cell of successive passages are required to produce adenovirus in large scale. Thus, we investigated the effect of passage number of 293 cells on cell growth and adenovirus production. In monolayer culture, the cell size of 293 cells became smaller and the specific growth rate $(\mu)$ became faster as the passage number increased. The $(\mu)$ at the passage number of 73 was increased approximately 2.5-fold, compared with that at the passage number of 43. In monolayer culture, the adenovirus production was also influenced by cell passage number. The virus titer obtained from 293 cells at the passage number of 66 was increased approximately 10-fold, compared with that at the passage number of 44. Furthermore, the optimal time for virus harvest post-infection became shorter for the cells at the later passage. In suspension culture, the cell size and m of 293 cells did not change significantly as passage number increased up to 35. Taken together, the passage number of 293 cells influenced cell growth and adenovirus production in the monolayer culture. Furthermore, replication-competent adenovirus was not detected during cell passages tested in monolayer culture.
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