[학위논문]인체간암세포 증식억제 및 apoptosis 유발에 미치는 Corydalis yanhusuo의 영향 Antiproliferative effect and apoptotic mechanism of extract of Corydalis yanhusuo on human hepatocarcinoma cells원문보기
현호색(Corydalis yanhusuo)은 양귀비과에 속하며 理氣止痛, 活血去瘀하여 鎭痛作用을 중심으로 연구되었다. 癌性痛症에 사용되는 현호색의 작용이 순수한 진통효과인지 암세포에 대한 실질적인 억제효능이 있는지 여부를 연구하였다. 이를 위해 우선 인체 간암세포인 Hep3B 및 HepG2 세포에 현호색 물추출물을 농도별로 투여하여 MTT assay에 의한 세포 성장억제효능을 조사하였고, Flow cytometry를 이용하여 ...
현호색(Corydalis yanhusuo)은 양귀비과에 속하며 理氣止痛, 活血去瘀하여 鎭痛作用을 중심으로 연구되었다. 癌性痛症에 사용되는 현호색의 작용이 순수한 진통효과인지 암세포에 대한 실질적인 억제효능이 있는지 여부를 연구하였다. 이를 위해 우선 인체 간암세포인 Hep3B 및 HepG2 세포에 현호색 물추출물을 농도별로 투여하여 MTT assay에 의한 세포 성장억제효능을 조사하였고, Flow cytometry를 이용하여 세포주기를 분석하였으며, DAPI staining을 통한 암세포 핵의 형태 관찰, 암화과정과 억제에 관련된 여러 단백질의 발현을 확인하기 위하여 RT-PCR 분석 및 전기영동과 Western blotting 등을 수행하여 억제기전을 분석하였다. 실험결과 Hep3B 세포보다 HepG2 세포에서 생존율 감소, 증식억제, 핵의 형태변화 및 sub-G1의 발현 정도가 높게 나타났다. Hep3B 세포보다 큰 효과를 보인 HepG2 인체 간암세포에서 apoptosis의 유발에 관여하는 death receptor인자들의 발현에는 아무런 변화가 없었지만 apoptosis 억제에 관여하는 인자인 Bcl-2의 단백질 발현이 현호색 추출물 처리에 따라 감소되었고 mitochondrial membrane potential의 교란이 일어나는 것을 확인하였다. 그리고 caspase-9 및 caspase-3의 활성화와 IAPfamily 인자들의 발현 저하가 유도되었으며, 활성화된 caspase 효소에 의하여 분해되는 것으로 알려진 PARP 및 PLCγ1 단백질의 분해가 유발되었다. 또한 염증반응 및 telomere의 길이조절에 관여하는 유전자들의 발현에도 영향을 미치는 것으로 나타났다. 따라서 한방임상에서 진통작용에 근거하여 암성 통증에도 사용되어온 현호색은 종양세포 사멸작용과도 일정한 관계가 있는 것으로 판단된다.
현호색(Corydalis yanhusuo)은 양귀비과에 속하며 理氣止痛, 活血去瘀하여 鎭痛作用을 중심으로 연구되었다. 癌性痛症에 사용되는 현호색의 작용이 순수한 진통효과인지 암세포에 대한 실질적인 억제효능이 있는지 여부를 연구하였다. 이를 위해 우선 인체 간암세포인 Hep3B 및 HepG2 세포에 현호색 물추출물을 농도별로 투여하여 MTT assay에 의한 세포 성장억제효능을 조사하였고, Flow cytometry를 이용하여 세포주기를 분석하였으며, DAPI staining을 통한 암세포 핵의 형태 관찰, 암화과정과 억제에 관련된 여러 단백질의 발현을 확인하기 위하여 RT-PCR 분석 및 전기영동과 Western blotting 등을 수행하여 억제기전을 분석하였다. 실험결과 Hep3B 세포보다 HepG2 세포에서 생존율 감소, 증식억제, 핵의 형태변화 및 sub-G1의 발현 정도가 높게 나타났다. Hep3B 세포보다 큰 효과를 보인 HepG2 인체 간암세포에서 apoptosis의 유발에 관여하는 death receptor인자들의 발현에는 아무런 변화가 없었지만 apoptosis 억제에 관여하는 인자인 Bcl-2의 단백질 발현이 현호색 추출물 처리에 따라 감소되었고 mitochondrial membrane potential의 교란이 일어나는 것을 확인하였다. 그리고 caspase-9 및 caspase-3의 활성화와 IAP family 인자들의 발현 저하가 유도되었으며, 활성화된 caspase 효소에 의하여 분해되는 것으로 알려진 PARP 및 PLCγ1 단백질의 분해가 유발되었다. 또한 염증반응 및 telomere의 길이조절에 관여하는 유전자들의 발현에도 영향을 미치는 것으로 나타났다. 따라서 한방임상에서 진통작용에 근거하여 암성 통증에도 사용되어온 현호색은 종양세포 사멸작용과도 일정한 관계가 있는 것으로 판단된다.
In this study, we investigated the effect of extract of Corydalis yanhusuo (ECY) generally used in Oriental medicine therapy on the cell growth and apoptosis of Hep3B and HepG2 human hepatoma cells. It was found that ECY could inhibit the cell growth of HepG2 cells more effectively in a dose-depende...
In this study, we investigated the effect of extract of Corydalis yanhusuo (ECY) generally used in Oriental medicine therapy on the cell growth and apoptosis of Hep3B and HepG2 human hepatoma cells. It was found that ECY could inhibit the cell growth of HepG2 cells more effectively in a dose-dependent manner, which was associated with morphological change and apoptotic cell death such as formation of apoptotic bodies, DNA fragmentation and increased populations of apoptotic-sub G1 phase. And we observed the effects of ECY on loss of mitochondrial membrane potential (MMP), using the JC-1 probe by DNA flow cytometric analysis. Apoptosis of HepG2 cells by ECY was associated with a down-regulation of anti apoptotic Bcl-2 expression, inhibitor of apoptosis proteins (IAPs) expression and proteolytic activation of caspase-3 and caspase-9. However, ECY did not affect the pro-apoptotic Bax expression and activity of caspase-8. ECY treatment also concomitant degradation and /or inhibition of poly (ADP-ribose) polymerase (PARP), phospholipase C-1 (PLCγ1). Furthermore, ECY treatment caused a dose-dependent inhibition of iNOS and cyclooxygenase-2 (Cox-2). Additionally ECY have been implicated in the regulation of telomerase expression. ECY treatment induced the down-regulation of telomerase reverse transcriptase mRNA (hTERT) expression of HepG2 cells. Taken together, these findings suggest that ECY may be a potential chemotherapeutic agent for the control of HepG2 human hepatoma cells and further studies will be needed to identify the active compounds that confer the anti-cancer activity of C. yanhusuo.
In this study, we investigated the effect of extract of Corydalis yanhusuo (ECY) generally used in Oriental medicine therapy on the cell growth and apoptosis of Hep3B and HepG2 human hepatoma cells. It was found that ECY could inhibit the cell growth of HepG2 cells more effectively in a dose-dependent manner, which was associated with morphological change and apoptotic cell death such as formation of apoptotic bodies, DNA fragmentation and increased populations of apoptotic-sub G1 phase. And we observed the effects of ECY on loss of mitochondrial membrane potential (MMP), using the JC-1 probe by DNA flow cytometric analysis. Apoptosis of HepG2 cells by ECY was associated with a down-regulation of anti apoptotic Bcl-2 expression, inhibitor of apoptosis proteins (IAPs) expression and proteolytic activation of caspase-3 and caspase-9. However, ECY did not affect the pro-apoptotic Bax expression and activity of caspase-8. ECY treatment also concomitant degradation and /or inhibition of poly (ADP-ribose) polymerase (PARP), phospholipase C-1 (PLCγ1). Furthermore, ECY treatment caused a dose-dependent inhibition of iNOS and cyclooxygenase-2 (Cox-2). Additionally ECY have been implicated in the regulation of telomerase expression. ECY treatment induced the down-regulation of telomerase reverse transcriptase mRNA (hTERT) expression of HepG2 cells. Taken together, these findings suggest that ECY may be a potential chemotherapeutic agent for the control of HepG2 human hepatoma cells and further studies will be needed to identify the active compounds that confer the anti-cancer activity of C. yanhusuo.
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