바이러스억제물질 VSF는 EMC-DV에 감염된 마우스의 비장세포와 암세포와의 세포융합으로 제작된 하이브리도마에서 분비되는 물질로써, 체내 및 체외 실험에서 오소믹소비리데, 피코르나비리데, 레트로비리데. 그리고 헤르페스비리데 등 여러 종류의 바이러스 감염에 대해서 억제효과를 나타낸다. VSF를 정제하기 위해 여러 종류의 크로마토그래피법을 사용하였고, SDS-PAGE를 실시하여 VSF를 구성하는 단백질은 4가지로 되어 있으며, 각각H, Ll, L2, L3로 명명하였다. 그 발현 비율은 1:0.5-1:0.5-1:0.5-2로 분자량은 55, 31, 30, 그리고 25kDa이다. 분자량 cutoff 방법을 사용하여 자연상태에서 바이러스억제효과를 나타내는 VSF의 분자량을 조사한 결과, 최소 분자량은 대략 100 kDa 이상이며 500kDa < 이상에서 바이러스억제효과가 가장 좋은 것으로 보아, VSF는 4개의 구성성분이 ...
바이러스억제물질 VSF는 EMC-DV에 감염된 마우스의 비장세포와 암세포와의 세포융합으로 제작된 하이브리도마에서 분비되는 물질로써, 체내 및 체외 실험에서 오소믹소비리데, 피코르나비리데, 레트로비리데. 그리고 헤르페스비리데 등 여러 종류의 바이러스 감염에 대해서 억제효과를 나타낸다. VSF를 정제하기 위해 여러 종류의 크로마토그래피법을 사용하였고, SDS-PAGE를 실시하여 VSF를 구성하는 단백질은 4가지로 되어 있으며, 각각H, Ll, L2, L3로 명명하였다. 그 발현 비율은 1:0.5-1:0.5-1:0.5-2로 분자량은 55, 31, 30, 그리고 25kDa이다. 분자량 cutoff 방법을 사용하여 자연상태에서 바이러스억제효과를 나타내는 VSF의 분자량을 조사한 결과, 최소 분자량은 대략 100 kDa 이상이며 500kDa < 이상에서 바이러스억제효과가 가장 좋은 것으로 보아, VSF는 4개의 구성성분이 거대분자를 형성해서 바이러스억제효과를 나타내는 것으로 보여 진다. VSF 구성성분 중 H와 L은 항체와 비슷한 형태를 보여 여러 가지 단백분해효소를 이용하여 조사한 결과, VSF의 단백질 분해 양상이 일부는 항체와 유사한 것도 있으나 다른 점도 보여 항체와 일치하지는 않는 것으로 여겨진다. VSF를 재조합단백질로 발현할 경우를 생각하여 글리코실레이션이 되어 있는지 여부를 조사하였고 그 결과, VSF는 글리코실레이션이 되어있지 않았다. VSF의 보관과 사용에 있어 열에 대한 안정성을 조사한 결과, VSF는 37℃에서 3일 안정하였으나 65℃에서는 5분 안에 활성의 90%를 상실하였다. 또한 pH에 대한 안정성 조사에서 VSF는 pH 7.0에서 8.0.에 안정한 것으로 나타났다. VSF의 유전자를 밝히기 위하여 우선, VSF의 아미노산 서열을N-terminal, internal sequencing, 그리고 MALDI-TOF법을 이용하여 얻었고, 이 아미노산 서열을 근거로 gene cloning을 실시하였다. 그 결과로 VSF의 유전자를 확보하였다. 이렇게 확보된 VSF 유전자를 DB search를 하여 기존의 단백질과의 유사성을 검토하였고, 그 결과 VSF의 H는 mouse Igγ와 유사성이 높은 것으로 그리고 L은 Ig κ와 유사성이 높은 것으로 나타났다. 바이러스억제물질 VSF는 생화학적으로나 유전자서열로 면역글로불린과 유사한 부분이 발견되었다. 그러나 현재까지 알려진 면역글로불린은 바이러스 특이 억제효과를 나타내며, 바이러스가 세포내로 들어가면 작용을 못하는 것으로 알려져 있다. 따라서 여러 종류의 바이러스에 대해서 체내 및 체외에서 바이러스 억제효과가 있는 VSF는 바이러스를 억제하는 기능면에서 면역글로불린과는 전혀 다른 것으로 생각되어진다. 따라서 VSF는 선천면역에서 분비하는 바이러스억제효과가 있는 새로운 물질로 생각되어지고, 이 VSF가 개발되어진다면 바이러스감염 질환을 예방 및 치료하는데 있어서 바이러스질환 치료제로의 개발 가능성을 제시한다.
바이러스억제물질 VSF는 EMC-DV에 감염된 마우스의 비장세포와 암세포와의 세포융합으로 제작된 하이브리도마에서 분비되는 물질로써, 체내 및 체외 실험에서 오소믹소비리데, 피코르나비리데, 레트로비리데. 그리고 헤르페스비리데 등 여러 종류의 바이러스 감염에 대해서 억제효과를 나타낸다. VSF를 정제하기 위해 여러 종류의 크로마토그래피법을 사용하였고, SDS-PAGE를 실시하여 VSF를 구성하는 단백질은 4가지로 되어 있으며, 각각H, Ll, L2, L3로 명명하였다. 그 발현 비율은 1:0.5-1:0.5-1:0.5-2로 분자량은 55, 31, 30, 그리고 25kDa이다. 분자량 cutoff 방법을 사용하여 자연상태에서 바이러스억제효과를 나타내는 VSF의 분자량을 조사한 결과, 최소 분자량은 대략 100 kDa 이상이며 500kDa < 이상에서 바이러스억제효과가 가장 좋은 것으로 보아, VSF는 4개의 구성성분이 거대분자를 형성해서 바이러스억제효과를 나타내는 것으로 보여 진다. VSF 구성성분 중 H와 L은 항체와 비슷한 형태를 보여 여러 가지 단백분해효소를 이용하여 조사한 결과, VSF의 단백질 분해 양상이 일부는 항체와 유사한 것도 있으나 다른 점도 보여 항체와 일치하지는 않는 것으로 여겨진다. VSF를 재조합단백질로 발현할 경우를 생각하여 글리코실레이션이 되어 있는지 여부를 조사하였고 그 결과, VSF는 글리코실레이션이 되어있지 않았다. VSF의 보관과 사용에 있어 열에 대한 안정성을 조사한 결과, VSF는 37℃에서 3일 안정하였으나 65℃에서는 5분 안에 활성의 90%를 상실하였다. 또한 pH에 대한 안정성 조사에서 VSF는 pH 7.0에서 8.0.에 안정한 것으로 나타났다. VSF의 유전자를 밝히기 위하여 우선, VSF의 아미노산 서열을N-terminal, internal sequencing, 그리고 MALDI-TOF법을 이용하여 얻었고, 이 아미노산 서열을 근거로 gene cloning을 실시하였다. 그 결과로 VSF의 유전자를 확보하였다. 이렇게 확보된 VSF 유전자를 DB search를 하여 기존의 단백질과의 유사성을 검토하였고, 그 결과 VSF의 H는 mouse Igγ와 유사성이 높은 것으로 그리고 L은 Ig κ와 유사성이 높은 것으로 나타났다. 바이러스억제물질 VSF는 생화학적으로나 유전자서열로 면역글로불린과 유사한 부분이 발견되었다. 그러나 현재까지 알려진 면역글로불린은 바이러스 특이 억제효과를 나타내며, 바이러스가 세포내로 들어가면 작용을 못하는 것으로 알려져 있다. 따라서 여러 종류의 바이러스에 대해서 체내 및 체외에서 바이러스 억제효과가 있는 VSF는 바이러스를 억제하는 기능면에서 면역글로불린과는 전혀 다른 것으로 생각되어진다. 따라서 VSF는 선천면역에서 분비하는 바이러스억제효과가 있는 새로운 물질로 생각되어지고, 이 VSF가 개발되어진다면 바이러스감염 질환을 예방 및 치료하는데 있어서 바이러스질환 치료제로의 개발 가능성을 제시한다.
Virus-Suppressing Factor (VSF) is secreted from fused splenocytes of mice infected with a variant of encephalomyocarditis D virus (EMC-DV) and has been found to inhibit the infection of several other viruses in vitro and in vivo. Preferably, the VSF has antiviral activity belonging to the genus Orth...
Virus-Suppressing Factor (VSF) is secreted from fused splenocytes of mice infected with a variant of encephalomyocarditis D virus (EMC-DV) and has been found to inhibit the infection of several other viruses in vitro and in vivo. Preferably, the VSF has antiviral activity belonging to the genus Orthomyxoviridae, Picornavindae, Retroviridae or Herpes in vitro and in vivo. We have attempted to characterize the Virus-Suppressing Factor (VSF) having antiviral activity. We have purified VSF using by various open column chromatography method. Molecular masses of the peptides of VSF were about 55, 31, 30, and 25kDa with constant molar ratio(1:0.5~1:0.5-1:0.5-2) by SDS-PAGE. Thus, VSF appears to be comprised of four peptide subunits. The VSF was present as a macromolecule of over 100 kDa in a natural state, which is a minimum unit capable of displaying antiviral activity, and the highest antiviral activity of the VSF was found in a fraction of over 500 kDa. The purified VSF was treated with several proteases to find the proteolytic resistance. The sensitivity pattern of VSF to various proteases indicatethat it partially differ from the typical mouse IgG. The VSF maintained the activity for 3 days at 25 ℃ and 37 ℃. However, incubation of the purified VSF at 65 ℃ resulted in a time-dependent loss of antiviral activity, In addition, the purified VSF was found to be stable in a range of pH 7.0 to 8.0. Amino acid sequence was analyzed by N-terminal and internal sequencing, and MALDI-TOF. 5' capfishing and RACE PCR methods were performed to verify the nucleotide sequence of VSF. The results of amino acid and nucleic acid sequences for VSF reveal that VSF is a novel protein with some homology to mouse Ig (γ3, κ), Though structually VSF protein showes some resemblance with IgG in biochemical & sequencial characters, but functionally it differs drastically from the convensional IgG. Our results suggest that hybridoma cells produce an antiviral factor that protects several other viruses in vitro and in vivo and may have therapeutic potential.
Virus-Suppressing Factor (VSF) is secreted from fused splenocytes of mice infected with a variant of encephalomyocarditis D virus (EMC-DV) and has been found to inhibit the infection of several other viruses in vitro and in vivo. Preferably, the VSF has antiviral activity belonging to the genus Orthomyxoviridae, Picornavindae, Retroviridae or Herpes in vitro and in vivo. We have attempted to characterize the Virus-Suppressing Factor (VSF) having antiviral activity. We have purified VSF using by various open column chromatography method. Molecular masses of the peptides of VSF were about 55, 31, 30, and 25kDa with constant molar ratio(1:0.5~1:0.5-1:0.5-2) by SDS-PAGE. Thus, VSF appears to be comprised of four peptide subunits. The VSF was present as a macromolecule of over 100 kDa in a natural state, which is a minimum unit capable of displaying antiviral activity, and the highest antiviral activity of the VSF was found in a fraction of over 500 kDa. The purified VSF was treated with several proteases to find the proteolytic resistance. The sensitivity pattern of VSF to various proteases indicatethat it partially differ from the typical mouse IgG. The VSF maintained the activity for 3 days at 25 ℃ and 37 ℃. However, incubation of the purified VSF at 65 ℃ resulted in a time-dependent loss of antiviral activity, In addition, the purified VSF was found to be stable in a range of pH 7.0 to 8.0. Amino acid sequence was analyzed by N-terminal and internal sequencing, and MALDI-TOF. 5' capfishing and RACE PCR methods were performed to verify the nucleotide sequence of VSF. The results of amino acid and nucleic acid sequences for VSF reveal that VSF is a novel protein with some homology to mouse Ig (γ3, κ), Though structually VSF protein showes some resemblance with IgG in biochemical & sequencial characters, but functionally it differs drastically from the convensional IgG. Our results suggest that hybridoma cells produce an antiviral factor that protects several other viruses in vitro and in vivo and may have therapeutic potential.
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