1969년, 남극의 물고기 (Nototheniidae)에서 극한의 기후에서도 생존이 가능하게 하는 결빙방지 단백질이 발견되었다. 결빙방지단백질은 얼음에 흡착하여 어는점을 떨어뜨림으로써 얼음의 성장을 저해한다. 결빙방지단백질은 얼렸을 때 입게 되는 세포의 손상에 대해서 생물체를 보호할 수 있다. Connexin 43은 간극연접 (gap junction) 을 구성하는 단백질이며 Gap Junction은 Cell-Cell ...
1969년, 남극의 물고기 (Nototheniidae)에서 극한의 기후에서도 생존이 가능하게 하는 결빙방지 단백질이 발견되었다. 결빙방지단백질은 얼음에 흡착하여 어는점을 떨어뜨림으로써 얼음의 성장을 저해한다. 결빙방지단백질은 얼렸을 때 입게 되는 세포의 손상에 대해서 생물체를 보호할 수 있다. Connexin 43은 간극연접 (gap junction) 을 구성하는 단백질이며 Gap Junction은 Cell-Cell Interactionchannel 중에 하나이다. Connexin 43은 여러 cell type 중에서 가장 풍부하게 발현되는 단백질로써, 세포의 분화와 생존을 조절하는 역할을 한다. 이제까지 연구에서 세포의 동결보존 시, 결빙방지단백질을 동결보존제로 사용했을 때 Cell-Cell Interaction과 Connexin 43 의 변화에 관한 보고가 없었다. 본 연구에서는 동결보존을 했을 때, 세포의 생존율이 Connexin 43 발현의 변화로 인하여 영향을 받게 될 것이라 생각하여 극지로부터 채집한 효모에서 결빙방지단백질을 정제하였다. 293T와 Hep3B 세포에 0.1, 1 ug/mL로 첨가하여 1, 3, 7, 15일 동결하고 해동한 후에 CCK-8으로 세포의 생존율을 측정하였으며, 결빙방지단백질과 기존의 동결보존제인 DMSO를 첨가하기 전과 후의 세포의 형태변화를 현미경을 통해서 관찰하였다. 그리고 동결‧해동하여 살아있는 세포의 미토콘드리아를 형광 염색하여 세포의 형태와 살아있는 세포의 분포를 관찰하였다. 마지막으로 동결보존제에 따른 Connexin 43의 발현의 차이를 western blot을 통해 확인하였다. 293T (인간신장 상피세포)는 0.1 or 1.0 ㎍/mL 결빙방지단백질의 첨가로 동결과 해동을 함에 따라서 생존율이 증가하였으므로 293T 세포의 효과적인 동결보존제로 사용될 수 있을 것이다. 또한, 효모의 결빙방지단백질의 첨가농도에 따른 세포형태의 변화는 관찰할 수 없었다. 293T세포의 동결보존에 있어서, 결빙방지단백질에 대한 Connexin 43 발현 변화는 없었으며 따라서, 293T 세포의 동결보존 시에 효모의 결빙방지단백질과 Connexin 43은 관련성이 없는 것으로 나타났다.
1969년, 남극의 물고기 (Nototheniidae)에서 극한의 기후에서도 생존이 가능하게 하는 결빙방지 단백질이 발견되었다. 결빙방지단백질은 얼음에 흡착하여 어는점을 떨어뜨림으로써 얼음의 성장을 저해한다. 결빙방지단백질은 얼렸을 때 입게 되는 세포의 손상에 대해서 생물체를 보호할 수 있다. Connexin 43은 간극연접 (gap junction) 을 구성하는 단백질이며 Gap Junction은 Cell-Cell Interaction channel 중에 하나이다. Connexin 43은 여러 cell type 중에서 가장 풍부하게 발현되는 단백질로써, 세포의 분화와 생존을 조절하는 역할을 한다. 이제까지 연구에서 세포의 동결보존 시, 결빙방지단백질을 동결보존제로 사용했을 때 Cell-Cell Interaction과 Connexin 43 의 변화에 관한 보고가 없었다. 본 연구에서는 동결보존을 했을 때, 세포의 생존율이 Connexin 43 발현의 변화로 인하여 영향을 받게 될 것이라 생각하여 극지로부터 채집한 효모에서 결빙방지단백질을 정제하였다. 293T와 Hep3B 세포에 0.1, 1 ug/mL로 첨가하여 1, 3, 7, 15일 동결하고 해동한 후에 CCK-8으로 세포의 생존율을 측정하였으며, 결빙방지단백질과 기존의 동결보존제인 DMSO를 첨가하기 전과 후의 세포의 형태변화를 현미경을 통해서 관찰하였다. 그리고 동결‧해동하여 살아있는 세포의 미토콘드리아를 형광 염색하여 세포의 형태와 살아있는 세포의 분포를 관찰하였다. 마지막으로 동결보존제에 따른 Connexin 43의 발현의 차이를 western blot을 통해 확인하였다. 293T (인간신장 상피세포)는 0.1 or 1.0 ㎍/mL 결빙방지단백질의 첨가로 동결과 해동을 함에 따라서 생존율이 증가하였으므로 293T 세포의 효과적인 동결보존제로 사용될 수 있을 것이다. 또한, 효모의 결빙방지단백질의 첨가농도에 따른 세포형태의 변화는 관찰할 수 없었다. 293T세포의 동결보존에 있어서, 결빙방지단백질에 대한 Connexin 43 발현 변화는 없었으며 따라서, 293T 세포의 동결보존 시에 효모의 결빙방지단백질과 Connexin 43은 관련성이 없는 것으로 나타났다.
In 1969, The first antifreeze protein (AFP) was discovered from Antarctic fish (Nototheniidae) could withstand freezing. Antifreeze protein adsorb to the ice and inhibit its growth by depress freezing point. AFP can protect polar organisms from freezing injury. Connexin 43 (Cx43) is gap junction's c...
In 1969, The first antifreeze protein (AFP) was discovered from Antarctic fish (Nototheniidae) could withstand freezing. Antifreeze protein adsorb to the ice and inhibit its growth by depress freezing point. AFP can protect polar organisms from freezing injury. Connexin 43 (Cx43) is gap junction's constituent and Cell-Cell Interaction channel. Cx43 is most abundantly expressed in different cell types. We think that viability of cell is related with metabolism transfer through change of Cx43 expression rate on cryopreservation. There are no reports alteration of Cx43 expression for the use AFP. Cell viability was measured by CCK-8 test after freezing and thawing. In a second part of the experiment, the morphology was observed by fluorescent microscope following the addition of AFP. In the final part of study, alteration of Cx43 expression was identified by western blotting. Following freeze - thaw, 293T viability was increased each cell at (0.1, 1 ug/mL). Also, different morphology was observed between the control and samples added antifreeze protein. Alteration of Cx43 wasn't related with cell viability in this study.
In 1969, The first antifreeze protein (AFP) was discovered from Antarctic fish (Nototheniidae) could withstand freezing. Antifreeze protein adsorb to the ice and inhibit its growth by depress freezing point. AFP can protect polar organisms from freezing injury. Connexin 43 (Cx43) is gap junction's constituent and Cell-Cell Interaction channel. Cx43 is most abundantly expressed in different cell types. We think that viability of cell is related with metabolism transfer through change of Cx43 expression rate on cryopreservation. There are no reports alteration of Cx43 expression for the use AFP. Cell viability was measured by CCK-8 test after freezing and thawing. In a second part of the experiment, the morphology was observed by fluorescent microscope following the addition of AFP. In the final part of study, alteration of Cx43 expression was identified by western blotting. Following freeze - thaw, 293T viability was increased each cell at (0.1, 1 ug/mL). Also, different morphology was observed between the control and samples added antifreeze protein. Alteration of Cx43 wasn't related with cell viability in this study.
주제어
#결빙방지단백질 동결보존 Antifreeze protein Cryopreservation Cell-Cell Interaction Gap junction Connexin 43
학위논문 정보
저자
홍성곤
학위수여기관
가천의과학대학교 대학원
학위구분
국내석사
학과
분자생물학전공
발행연도
2010
총페이지
32 p.
키워드
결빙방지단백질 동결보존 Antifreeze protein Cryopreservation Cell-Cell Interaction Gap junction Connexin 43
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