[학위논문]혈관평활근세포의 증식 및 유주 기능 조절을 통한 가자 물 추출물의 항 동맥경화 작용 Anti-atheroscleortic action of water extract of Terminaliae fructus through modulation of smooth muscle cell proliferation and migration원문보기
동맥경화는 동맥에 죽종이 형성되어 혈관이 점점 좁아지고 막히는 진행성의 질병이다. 죽종의 형성과정은 혈청 내 산화된 지질과 내막으로 유주한 평활근 세포, 내막에서 증식한 평활근세포에 의하여 이루어지며 따라서 이는 동맥경화 발병에 있어 주요한 원인으로 밝혀져 있다. 더욱이 최근의 연구 결과에 따르면 염증의 발생은 동맥경화의 모든 과정에 깊이 관여함으로 알려져 있다. 가자는 Combretaceae 과 Terminalia 속에 속하는 식물로써 열대지방 특히, 동남아시아로부터 아프리카에 걸쳐 자라는 식물이다. 가자의 주된 화합물은 ...
동맥경화는 동맥에 죽종이 형성되어 혈관이 점점 좁아지고 막히는 진행성의 질병이다. 죽종의 형성과정은 혈청 내 산화된 지질과 내막으로 유주한 평활근 세포, 내막에서 증식한 평활근세포에 의하여 이루어지며 따라서 이는 동맥경화 발병에 있어 주요한 원인으로 밝혀져 있다. 더욱이 최근의 연구 결과에 따르면 염증의 발생은 동맥경화의 모든 과정에 깊이 관여함으로 알려져 있다. 가자는 Combretaceae 과 Terminalia 속에 속하는 식물로써 열대지방 특히, 동남아시아로부터 아프리카에 걸쳐 자라는 식물이다. 가자의 주된 화합물은 triterpene 중 argunglucoside I, arjungenin, chebuloside I 그리고 II 가 있으며 coumarin 과 결합된 chebulin, 또 polyphenol 화합물중 ellagic acid, 2, 4-chebuly-β-D-glucopyranose, chebulinic acid, gallic acid, ethyl gallate, punicalagin, terflavin A, terchebin, luteolin, tannic acid 등을 함유하고 있다. 따라서 이연구의 목적은 가자 물 추출물을 이용하여 성장인자로 유도한 HASMC 에서의 세포증식 조절 작용, 세포유주 조절 작용 그리고 Raw 264.7 세포에서의 염증매개 물질 발현조절 효과이며 DPPH scavenging assay를 통한 라디칼 소거능, TBARS assay를 이용한 혈청 지질 과산화 억제효과이며 MTT assay와 gelatin zyography assay, wound healing assay, boyden's chamber assay, western blotting assay 를 통한 가자 물 추출물에서 HASMC 의 유주 및 증식 억제능, Raw 264.7 세포에서 염증 발현 매개 물질의 억제 작용을 평가 하였다. 특히 western blotting assay 에서는 세포증식 신호전달 단백질 중 ERK1/2, JNK , 세포 유주 신호전달 단백질 중 Cdc42, RhoA, FAK의 발현을 양상을 검증 하였으며, Raw 264.7 세포가 분비하는 염증 반응 유발 단백질인 COX-2, iNOS의 발현을 확인 하였다. 결과적으로 DPPH 에서 IC50 값은 1.42 µg/ml 로 나타났다 또한 혈청 지질과산화도 농도 의존적으로 억제하는 효과를 확인 할 수 있었다. LPS 를 처리하여 염증발현을 유도한 Raw 264.7세포에서 COX-2와 iNOS의 발현, western Blot 에서의 ERK1/2와 JNK 신호전달 단백질의 발현억제, Cdc42, RhoA, FAK 와 MMPs 의 발현 억제 또한 농도 의존적으로 줄어들었음을 확인 하였다. wound healing assay, boyden's chamber assay를 통해 유주능을 확인한 결과 가자 물 추출물의 농도에 의존적으로 억제 되었다. 이러한 결과로 미루어 보아 T. chebula Retz 는 동맥경화의 치료에 있어 유용한 생약 자원이 될 수 있음을 확인 할 수 있다.
동맥경화는 동맥에 죽종이 형성되어 혈관이 점점 좁아지고 막히는 진행성의 질병이다. 죽종의 형성과정은 혈청 내 산화된 지질과 내막으로 유주한 평활근 세포, 내막에서 증식한 평활근세포에 의하여 이루어지며 따라서 이는 동맥경화 발병에 있어 주요한 원인으로 밝혀져 있다. 더욱이 최근의 연구 결과에 따르면 염증의 발생은 동맥경화의 모든 과정에 깊이 관여함으로 알려져 있다. 가자는 Combretaceae 과 Terminalia 속에 속하는 식물로써 열대지방 특히, 동남아시아로부터 아프리카에 걸쳐 자라는 식물이다. 가자의 주된 화합물은 triterpene 중 argunglucoside I, arjungenin, chebuloside I 그리고 II 가 있으며 coumarin 과 결합된 chebulin, 또 polyphenol 화합물중 ellagic acid, 2, 4-chebuly-β-D-glucopyranose, chebulinic acid, gallic acid, ethyl gallate, punicalagin, terflavin A, terchebin, luteolin, tannic acid 등을 함유하고 있다. 따라서 이연구의 목적은 가자 물 추출물을 이용하여 성장인자로 유도한 HASMC 에서의 세포증식 조절 작용, 세포유주 조절 작용 그리고 Raw 264.7 세포에서의 염증매개 물질 발현조절 효과이며 DPPH scavenging assay를 통한 라디칼 소거능, TBARS assay를 이용한 혈청 지질 과산화 억제효과이며 MTT assay와 gelatin zyography assay, wound healing assay, boyden's chamber assay, western blotting assay 를 통한 가자 물 추출물에서 HASMC 의 유주 및 증식 억제능, Raw 264.7 세포에서 염증 발현 매개 물질의 억제 작용을 평가 하였다. 특히 western blotting assay 에서는 세포증식 신호전달 단백질 중 ERK1/2, JNK , 세포 유주 신호전달 단백질 중 Cdc42, RhoA, FAK의 발현을 양상을 검증 하였으며, Raw 264.7 세포가 분비하는 염증 반응 유발 단백질인 COX-2, iNOS의 발현을 확인 하였다. 결과적으로 DPPH 에서 IC50 값은 1.42 µg/ml 로 나타났다 또한 혈청 지질과산화도 농도 의존적으로 억제하는 효과를 확인 할 수 있었다. LPS 를 처리하여 염증발현을 유도한 Raw 264.7세포에서 COX-2와 iNOS의 발현, western Blot 에서의 ERK1/2와 JNK 신호전달 단백질의 발현억제, Cdc42, RhoA, FAK 와 MMPs 의 발현 억제 또한 농도 의존적으로 줄어들었음을 확인 하였다. wound healing assay, boyden's chamber assay를 통해 유주능을 확인한 결과 가자 물 추출물의 농도에 의존적으로 억제 되었다. 이러한 결과로 미루어 보아 T. chebula Retz 는 동맥경화의 치료에 있어 유용한 생약 자원이 될 수 있음을 확인 할 수 있다.
Atherosclerosis is a progressive disease characterized by the accumulation of lipids and fibrous elements in arteries. In detail, oxidation of serum lipid, inflammation of macrophage, proliferation and migration of vascular smooth muscle cells (VSMC) from tunica media to the tunica intima are the ke...
Atherosclerosis is a progressive disease characterized by the accumulation of lipids and fibrous elements in arteries. In detail, oxidation of serum lipid, inflammation of macrophage, proliferation and migration of vascular smooth muscle cells (VSMC) from tunica media to the tunica intima are the key steps in the pathogenesis of atherosclerosis. Moreover, recent accomplishment about atherosclerosis showed that inflammation in the tunica intima caused by macrophage mediated all stages of atherosclerosis. T. chebula is traditional medicine of asia, belonging to the genus Terminalia, family Combretaceae. T. chebula contains large amouts of tritepenes and phenolic acids, mainly, arjunglucoside I, arjungenin, chebulosides I, II, chebulinic acid, gallic acid, ethyl gallate, and tannic acid. The objective of this study was to determine the effects of T. chebula water extract on antioxdative activity, inflammation of macrophage, cytokine induced proliferation and migration of human aortic smooth muscle cells (HASMC). The antioxidative effects of T. chebula were evaluated by 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH) scavenging assay and thiobarbituric acid reactive substance (TBARS) assay. Similarly, the proliferation, migration and expression of matrix metalloproteinases (MMPs) in HASMC were assessed by MTT assay, Boyden's chamber assay and wound healing assay, respectively. Western blot was done to determine the protein expression of MMP-9, phospho extracellular regulated kinase (pERK1/2), phospho c-Jun N-terminal kinase (pJNK) phospho focal adhesion kinase (pFAK), cell division control protein 42 (cdc42), Ras homologue gene family member A (RhoA) and inducible nitric oxide synthase (iNOS). In results, the IC50 values for DPPH were 1.42 μg/ml. Furthermore, T. chebula water extract dose dependently inhibited thiobarbituric acid reactive substance (TBARS) formation and nitric oxide (NO) production in lipopolysacharide (LPS) treated RAW 264.7 cells. Similarly, the pretreatment of T. chebula inhibited the tumor necrosis factor-α (TNF-α) induced HASMC proliferation, MMPs expression and platelet derived growth factor (PDGF) induced HASMC migration dose dependently. It also inhibited the expression of phospho focal adhesion kinase (pFAK), cell division control protein 42 (cdc42), Ras homologue gene family member A (RhoA) in HASMC in a dose dependent manner. These results suggest that Terminalia chebula Retz could be a beneficial herbal resource in the treatment and prevention of atherosclerosis.
Atherosclerosis is a progressive disease characterized by the accumulation of lipids and fibrous elements in arteries. In detail, oxidation of serum lipid, inflammation of macrophage, proliferation and migration of vascular smooth muscle cells (VSMC) from tunica media to the tunica intima are the key steps in the pathogenesis of atherosclerosis. Moreover, recent accomplishment about atherosclerosis showed that inflammation in the tunica intima caused by macrophage mediated all stages of atherosclerosis. T. chebula is traditional medicine of asia, belonging to the genus Terminalia, family Combretaceae. T. chebula contains large amouts of tritepenes and phenolic acids, mainly, arjunglucoside I, arjungenin, chebulosides I, II, chebulinic acid, gallic acid, ethyl gallate, and tannic acid. The objective of this study was to determine the effects of T. chebula water extract on antioxdative activity, inflammation of macrophage, cytokine induced proliferation and migration of human aortic smooth muscle cells (HASMC). The antioxidative effects of T. chebula were evaluated by 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH) scavenging assay and thiobarbituric acid reactive substance (TBARS) assay. Similarly, the proliferation, migration and expression of matrix metalloproteinases (MMPs) in HASMC were assessed by MTT assay, Boyden's chamber assay and wound healing assay, respectively. Western blot was done to determine the protein expression of MMP-9, phospho extracellular regulated kinase (pERK1/2), phospho c-Jun N-terminal kinase (pJNK) phospho focal adhesion kinase (pFAK), cell division control protein 42 (cdc42), Ras homologue gene family member A (RhoA) and inducible nitric oxide synthase (iNOS). In results, the IC50 values for DPPH were 1.42 μg/ml. Furthermore, T. chebula water extract dose dependently inhibited thiobarbituric acid reactive substance (TBARS) formation and nitric oxide (NO) production in lipopolysacharide (LPS) treated RAW 264.7 cells. Similarly, the pretreatment of T. chebula inhibited the tumor necrosis factor-α (TNF-α) induced HASMC proliferation, MMPs expression and platelet derived growth factor (PDGF) induced HASMC migration dose dependently. It also inhibited the expression of phospho focal adhesion kinase (pFAK), cell division control protein 42 (cdc42), Ras homologue gene family member A (RhoA) in HASMC in a dose dependent manner. These results suggest that Terminalia chebula Retz could be a beneficial herbal resource in the treatment and prevention of atherosclerosis.
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