Pyrrolizidine alkaloids(PAs)는 인간과 동물에게 심각한 간 독성을 유발시키는 자연독소이다. 인간은 PAs를 함유하고 있는 식물의 직접적인 섭취 또는 동ㆍ식물의 가공식품을 간접적으로 섭취하면서 PAs에 노출 될 수 있다. 따라서 본 연구에서는 Freezing lipid precipitation과 strong cation exchange sorbent로 이루어진 SCX-SPE 정제법으로 시료를 정제하였고, LC-ESI-MS/MS-MRM 방법으로 콩, ...
Pyrrolizidine alkaloids(PAs)는 인간과 동물에게 심각한 간 독성을 유발시키는 자연독소이다. 인간은 PAs를 함유하고 있는 식물의 직접적인 섭취 또는 동ㆍ식물의 가공식품을 간접적으로 섭취하면서 PAs에 노출 될 수 있다. 따라서 본 연구에서는 Freezing lipid precipitation과 strong cation exchange sorbent로 이루어진 SCX-SPE 정제법으로 시료를 정제하였고, LC-ESI-MS/MS-MRM 방법으로 콩, 종자유, 우유, 마가린과 같은 고지방식품에서 PAs를 빠르고 선택성 있게 검출하였다. 식품 매트릭스에 따라 methanol 또는chloroform:methanol (50:50) 혼합용액을 사용하여 초음파 추출법으로 PAs를 추출하였다. 추출물 중 많은 양의 지질이 Freezing lipid precipitation 정제법으로 효과적으로 제거되었다. Freezing lipid precipitation 과정 중, 77% 이상의 지질이 PAs의 큰 손실 없이 제거 되었는데, PAs의 회수율은 81% 이상이었다. 또한 남아있는 간섭물질을 정제하기 위하여 strong cation exchange sorbent 가 흡착된 SCX 카트리지를 사용하였다. 용출용매의 pH를 다르게 하여 선택적으로 PAs의 회수율이 높은 용출용매를 선정하였다. 추출물 중 PAs를 고감도로 검출하기 위해, MS/MS fragmentation pathway를 기초로 하여 LC-ESI-MS/MS-MRM 방법의 전이이온을 적절하게 선택하였다. 적절한 전이 이온의 선택은 복잡한 시료 매트릭스에서 PAs의 정확한 정량 및 확인을 향상시킨다. 개발된 분석법의 타당성을 검증하기 위해 직선성, 검출한계, 정량한계, 일내와 일간의 정확도 및 정밀도의 항목으로 분석법 검증을 수행하였다. RSD 값이 11.06% 범위 안으로 높은 정확성과 정밀성을 보여주었다. 신호 대 잡음 비 (S/N) 3으로 측정한 정량한계는 0.06 에서 0.60 ng/mL, 신호 대 잡음 비 (S/N) 10으로 측정한 검출한계는 0.20 에서 1.99 ng/mL으로 낮은 값을 나타내었다. 확립된 분석법은 고지방 식품에서의 독성 PAs를 모니터링 하는데 성공적으로 적용될 수 있을 것으로 판단된다. 핵심어 : Pyrrolizidine alkaloids, 고지방식품, Freezing lipid precipitation, SCX SPE, LC-ESI-MS/MS-MRM
Pyrrolizidine alkaloids(PAs)는 인간과 동물에게 심각한 간 독성을 유발시키는 자연독소이다. 인간은 PAs를 함유하고 있는 식물의 직접적인 섭취 또는 동ㆍ식물의 가공식품을 간접적으로 섭취하면서 PAs에 노출 될 수 있다. 따라서 본 연구에서는 Freezing lipid precipitation과 strong cation exchange sorbent로 이루어진 SCX-SPE 정제법으로 시료를 정제하였고, LC-ESI-MS/MS-MRM 방법으로 콩, 종자유, 우유, 마가린과 같은 고지방식품에서 PAs를 빠르고 선택성 있게 검출하였다. 식품 매트릭스에 따라 methanol 또는chloroform:methanol (50:50) 혼합용액을 사용하여 초음파 추출법으로 PAs를 추출하였다. 추출물 중 많은 양의 지질이 Freezing lipid precipitation 정제법으로 효과적으로 제거되었다. Freezing lipid precipitation 과정 중, 77% 이상의 지질이 PAs의 큰 손실 없이 제거 되었는데, PAs의 회수율은 81% 이상이었다. 또한 남아있는 간섭물질을 정제하기 위하여 strong cation exchange sorbent 가 흡착된 SCX 카트리지를 사용하였다. 용출용매의 pH를 다르게 하여 선택적으로 PAs의 회수율이 높은 용출용매를 선정하였다. 추출물 중 PAs를 고감도로 검출하기 위해, MS/MS fragmentation pathway를 기초로 하여 LC-ESI-MS/MS-MRM 방법의 전이이온을 적절하게 선택하였다. 적절한 전이 이온의 선택은 복잡한 시료 매트릭스에서 PAs의 정확한 정량 및 확인을 향상시킨다. 개발된 분석법의 타당성을 검증하기 위해 직선성, 검출한계, 정량한계, 일내와 일간의 정확도 및 정밀도의 항목으로 분석법 검증을 수행하였다. RSD 값이 11.06% 범위 안으로 높은 정확성과 정밀성을 보여주었다. 신호 대 잡음 비 (S/N) 3으로 측정한 정량한계는 0.06 에서 0.60 ng/mL, 신호 대 잡음 비 (S/N) 10으로 측정한 검출한계는 0.20 에서 1.99 ng/mL으로 낮은 값을 나타내었다. 확립된 분석법은 고지방 식품에서의 독성 PAs를 모니터링 하는데 성공적으로 적용될 수 있을 것으로 판단된다. 핵심어 : Pyrrolizidine alkaloids, 고지방식품, Freezing lipid precipitation, SCX SPE, LC-ESI-MS/MS-MRM
Pyrrolizidine alkaloids (PAs) are naturally occurring plant toxins associated with serious liver disease in humans and domestic animals. Human exposure can be caused by the direct consumption of PA-containing plants or indirectly by the consumption of foodstuffs processed from animal origin. In this...
Pyrrolizidine alkaloids (PAs) are naturally occurring plant toxins associated with serious liver disease in humans and domestic animals. Human exposure can be caused by the direct consumption of PA-containing plants or indirectly by the consumption of foodstuffs processed from animal origin. In this work, simple and sensitive analytical method was developed for the determination of 9 toxic PAs in high lipid foodstuffs such as soybeans, seed oil, milk, and margarine by liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS) combined with freezing lipid precipitation and strong cation exchange (SCX) - solid-phase extraction (SPE) cleanup. PAs were rapidly extracted from high lipid foodstuffs by sonication with methanol or a chloroform-methanol (1:1, v/v) mixture according to sample matrix. Freezing lipid precipitation could effectively remove the large amounts of lipids in the extract. During freezing lipid precipitation, over 77% of the lipids in all of the foodstuffs were rapidly eliminated without any significant loss of the PAs with over 81% recovery. For further purification, SCX-SPE cartridge could successfully purify PAs from the remaining interfering substances by the variation pH with 5% NH4OH in methanol. To sensitively detect PAs in the extract, appropriate transition ions in LC-MS/MS-MRM mode were selected on the basis of plausible MS/MS fragmentation pathways of PAs. The selection of transition ions could lead to the significant improvement of precise quantification and identification of PAs in complicate sample matrices. The established analytical method was validated in terms of the linearity, limits of detection (LOD), and quantification (LOQ), precision, and accuracy. The method was deemed satisfactory by inter- and intra-day validation and exhibited both high accuracy and precision with a relative standard deviation of 0.53 to 11.06%. Overall LOQ and LOD were approximately 0.06-0.60 ng/mL at a signal-to-noise ratio (S/N) of 3 and were about 0.20-1.99 ng/mL at a S/N of 10 for all foodstuffs. In The established method was successfully applied for the high-throughput monitoring of toxic PAs in several types of high lipid foodstuffs with.
Pyrrolizidine alkaloids (PAs) are naturally occurring plant toxins associated with serious liver disease in humans and domestic animals. Human exposure can be caused by the direct consumption of PA-containing plants or indirectly by the consumption of foodstuffs processed from animal origin. In this work, simple and sensitive analytical method was developed for the determination of 9 toxic PAs in high lipid foodstuffs such as soybeans, seed oil, milk, and margarine by liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS) combined with freezing lipid precipitation and strong cation exchange (SCX) - solid-phase extraction (SPE) cleanup. PAs were rapidly extracted from high lipid foodstuffs by sonication with methanol or a chloroform-methanol (1:1, v/v) mixture according to sample matrix. Freezing lipid precipitation could effectively remove the large amounts of lipids in the extract. During freezing lipid precipitation, over 77% of the lipids in all of the foodstuffs were rapidly eliminated without any significant loss of the PAs with over 81% recovery. For further purification, SCX-SPE cartridge could successfully purify PAs from the remaining interfering substances by the variation pH with 5% NH4OH in methanol. To sensitively detect PAs in the extract, appropriate transition ions in LC-MS/MS-MRM mode were selected on the basis of plausible MS/MS fragmentation pathways of PAs. The selection of transition ions could lead to the significant improvement of precise quantification and identification of PAs in complicate sample matrices. The established analytical method was validated in terms of the linearity, limits of detection (LOD), and quantification (LOQ), precision, and accuracy. The method was deemed satisfactory by inter- and intra-day validation and exhibited both high accuracy and precision with a relative standard deviation of 0.53 to 11.06%. Overall LOQ and LOD were approximately 0.06-0.60 ng/mL at a signal-to-noise ratio (S/N) of 3 and were about 0.20-1.99 ng/mL at a S/N of 10 for all foodstuffs. In The established method was successfully applied for the high-throughput monitoring of toxic PAs in several types of high lipid foodstuffs with.
주제어
#Pyrrolizidine alkaloids High lipid foodstuffs Freezing lipid precipitation SCX-SPE LC-ESI-MS/MS-MRM
학위논문 정보
저자
윤수환
학위수여기관
경희대학교 일반대학원
학위구분
국내석사
학과
나노의약생명과학과 약학전공
지도교수
홍종기
발행연도
2015
총페이지
50 p.
키워드
Pyrrolizidine alkaloids High lipid foodstuffs Freezing lipid precipitation SCX-SPE LC-ESI-MS/MS-MRM
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