다슬기(Semisulcospira Coreana)는 항산화 활성, ACE 억제 활성등 다양한 생리활성들이 보고되고 있지만 다슬기에 대한 항염증 효과는 연구되지 않았다. 본 연구에서는 열수추출 및 Alcalase, Protamex, Alcalase + Protamex로 다슬기를 가수분해하여 lipopolysaccharide (LPS)로 염증을 유도한 RAW 264.7 cell에서 항염증 효과 및 항염 억제를 나타내는 원인 기작을 규명하고자 하였다. 다슬기 시료의 항염증 효과는 ...
다슬기(Semisulcospira Coreana)는 항산화 활성, ACE 억제 활성등 다양한 생리활성들이 보고되고 있지만 다슬기에 대한 항염증 효과는 연구되지 않았다. 본 연구에서는 열수추출 및 Alcalase, Protamex, Alcalase + Protamex로 다슬기를 가수분해하여 lipopolysaccharide (LPS)로 염증을 유도한 RAW 264.7 cell에서 항염증 효과 및 항염 억제를 나타내는 원인 기작을 규명하고자 하였다. 다슬기 시료의 항염증 효과는 항산화, nitic oxide (NO)소거능, 염증관련 분자지표의 mRNA 및 단백질 발현 정도를 비교하여 확인하였다. 다슬기 시료에 대한 항산화 효과는 DPPH radical과 Superoxide anion 소거능에서 Protamex 가수분해물이 시료들 중 우수한 효과를 나타낸 것으로 확인되었으며 ABTS에서 98.78%, Hydroxyl radical에서 75%의 높은 소거능을 나타내었다. 각 효소가수분해물들 중 Protamex 가수분해물에서 NO 생성 저해능이 뛰어났으며 염증분자지표인 iNOS 및 COX-2의 유전자 및 단백질 발현이 농도의존적으로 감소하여 염증작용에 효과가 있음을 확인하였다. 가장 뛰어나게 iNOS, COX-2 mRNA 및 단백질 발현 억제능을 보인 Protamex 가수분해물 시료를 임상시험에 적용하기 위하여 Buffer system이 아닌 D.W system으로 가수분해하여 항염효과를 확인하였다. 그 결과, Buffer system에 비해 낮은 NO 생성 저해 및 iNOS 단백질 발현 억제를 확인할 수 있었다. iNOS 발현 억제능을 보인 D.W system Protamex 가수분해물을 ethanol과 혼합하여 supernatant와 precipitate로 분리하여 항염실험을 진행한 결과 ethanol precipitate에서 우수한 NO 생성 저해 및 iNOS의 mRNA 및 단백질 발현 억제능을 확인하였다. iNOS 억제활성을 보인 ethanol precipitate에 대한 염증관련 transciption fator 및 upstream signaling pathway를 분석한 결과, pro-inflammatory transcription factor인 nuclear factor-kappa B (NF-κB) p65 단백질 발현을 농도의존적으로 억제하였으며 iNOS의 상위신호전달 경로중 하나인 mitogen-activated protein kinases(MAPKs) 중 c-Jun과 JNK의 인산화를 감소시켰다. 그 결과, ethanol precipitate의 항염증 활성은 JNK 및 c-Jun의 pathway에 의해 조절됨을 확인할 수 있었다. 이상의 결과로부터 다슬기 Protamex 가수분해물이 NO생성억제 및 iNOS 단백질 발현 억제, JNK 및 c-Jun의 인산화 억제에 의해 항염증 활성을 가짐을 확인하여 항염활성을 보유한 생리활성 소재의 개발이 가능할 것으로 사료된다.
다슬기(Semisulcospira Coreana)는 항산화 활성, ACE 억제 활성등 다양한 생리활성들이 보고되고 있지만 다슬기에 대한 항염증 효과는 연구되지 않았다. 본 연구에서는 열수추출 및 Alcalase, Protamex, Alcalase + Protamex로 다슬기를 가수분해하여 lipopolysaccharide (LPS)로 염증을 유도한 RAW 264.7 cell에서 항염증 효과 및 항염 억제를 나타내는 원인 기작을 규명하고자 하였다. 다슬기 시료의 항염증 효과는 항산화, nitic oxide (NO)소거능, 염증관련 분자지표의 mRNA 및 단백질 발현 정도를 비교하여 확인하였다. 다슬기 시료에 대한 항산화 효과는 DPPH radical과 Superoxide anion 소거능에서 Protamex 가수분해물이 시료들 중 우수한 효과를 나타낸 것으로 확인되었으며 ABTS에서 98.78%, Hydroxyl radical에서 75%의 높은 소거능을 나타내었다. 각 효소가수분해물들 중 Protamex 가수분해물에서 NO 생성 저해능이 뛰어났으며 염증분자지표인 iNOS 및 COX-2의 유전자 및 단백질 발현이 농도의존적으로 감소하여 염증작용에 효과가 있음을 확인하였다. 가장 뛰어나게 iNOS, COX-2 mRNA 및 단백질 발현 억제능을 보인 Protamex 가수분해물 시료를 임상시험에 적용하기 위하여 Buffer system이 아닌 D.W system으로 가수분해하여 항염효과를 확인하였다. 그 결과, Buffer system에 비해 낮은 NO 생성 저해 및 iNOS 단백질 발현 억제를 확인할 수 있었다. iNOS 발현 억제능을 보인 D.W system Protamex 가수분해물을 ethanol과 혼합하여 supernatant와 precipitate로 분리하여 항염실험을 진행한 결과 ethanol precipitate에서 우수한 NO 생성 저해 및 iNOS의 mRNA 및 단백질 발현 억제능을 확인하였다. iNOS 억제활성을 보인 ethanol precipitate에 대한 염증관련 transciption fator 및 upstream signaling pathway를 분석한 결과, pro-inflammatory transcription factor인 nuclear factor-kappa B (NF-κB) p65 단백질 발현을 농도의존적으로 억제하였으며 iNOS의 상위신호전달 경로중 하나인 mitogen-activated protein kinases(MAPKs) 중 c-Jun과 JNK의 인산화를 감소시켰다. 그 결과, ethanol precipitate의 항염증 활성은 JNK 및 c-Jun의 pathway에 의해 조절됨을 확인할 수 있었다. 이상의 결과로부터 다슬기 Protamex 가수분해물이 NO생성억제 및 iNOS 단백질 발현 억제, JNK 및 c-Jun의 인산화 억제에 의해 항염증 활성을 가짐을 확인하여 항염활성을 보유한 생리활성 소재의 개발이 가능할 것으로 사료된다.
Melania snail (Semisulcospira Coreana) has been reported to show various biological effects, including anti-oxidant activity, ACE-inhibition activity, and etc. However, the study on the anti-inflammatory activity of Melania snail has not been reported, yet. In this study, the anti-inflammatory effec...
Melania snail (Semisulcospira Coreana) has been reported to show various biological effects, including anti-oxidant activity, ACE-inhibition activity, and etc. However, the study on the anti-inflammatory activity of Melania snail has not been reported, yet. In this study, the anti-inflammatory effects and its mechanism of Melania snail hydrolysates (MSH) produced by protease Alcalase, Protamex and Alcalase + Protamex, were investigated on the lipopolysaccharide (LPS)-stimulated raw 264.7 cells. Anti-inflammatory effects of MSH was investigated by anti-oxidant activity, nitric oxide(NO) scavenging activity, mRNA and protein expression of inflammation-related molecular marker. Antioxidant effects of MSH produced by protease protamex showed a superior effects in DPPH, ABTS, Hydroxyl radical and superoxide anion scavenging activity. In addtion, protamex MSH showed the superior anti-inflammation effect through the inhibition of NO production and decreased expression levels of iNOS and COX-2 for mRNA and protein in a dose-dependent manner. At next step, the protamex MSH were prepared in D.W for clinical test. The protamex MSH in D.W also showed the inhibition of NO production and decreased expression of iNOS and COX-2, although they showed lower activity than MSH in buffer. To concentrate the anti-inflammatory activity, protamex MSH were further precipitated with ethanol. The ethanol precipitate of MSH suppressed the mRNA expression, protein levels of iNOS, and final NO production at concentration of 100μg/ml in LPS- stimulated RAW 264.7 murine macrophage cells. Finally, Protein expressions of NF-κB p65, I-κBα, and phosphorylations of c-Jun, JNK and p38MAPK in immune-response pathway were tested with ethanol precipitate of MSH. NF-κB p65 were suppressed and the phosphorylations of c-Jun and JNK were inhibited by the ethanol precipitate of MSH. In conclusion, protamex MSH might have an anti-inflammatory effect through the down-regulation of NO production and iNOS protein expression related to NF-κB p65, c-Jun and JNK in the inflammatory signaling pathways.
Melania snail (Semisulcospira Coreana) has been reported to show various biological effects, including anti-oxidant activity, ACE-inhibition activity, and etc. However, the study on the anti-inflammatory activity of Melania snail has not been reported, yet. In this study, the anti-inflammatory effects and its mechanism of Melania snail hydrolysates (MSH) produced by protease Alcalase, Protamex and Alcalase + Protamex, were investigated on the lipopolysaccharide (LPS)-stimulated raw 264.7 cells. Anti-inflammatory effects of MSH was investigated by anti-oxidant activity, nitric oxide(NO) scavenging activity, mRNA and protein expression of inflammation-related molecular marker. Antioxidant effects of MSH produced by protease protamex showed a superior effects in DPPH, ABTS, Hydroxyl radical and superoxide anion scavenging activity. In addtion, protamex MSH showed the superior anti-inflammation effect through the inhibition of NO production and decreased expression levels of iNOS and COX-2 for mRNA and protein in a dose-dependent manner. At next step, the protamex MSH were prepared in D.W for clinical test. The protamex MSH in D.W also showed the inhibition of NO production and decreased expression of iNOS and COX-2, although they showed lower activity than MSH in buffer. To concentrate the anti-inflammatory activity, protamex MSH were further precipitated with ethanol. The ethanol precipitate of MSH suppressed the mRNA expression, protein levels of iNOS, and final NO production at concentration of 100μg/ml in LPS- stimulated RAW 264.7 murine macrophage cells. Finally, Protein expressions of NF-κB p65, I-κBα, and phosphorylations of c-Jun, JNK and p38MAPK in immune-response pathway were tested with ethanol precipitate of MSH. NF-κB p65 were suppressed and the phosphorylations of c-Jun and JNK were inhibited by the ethanol precipitate of MSH. In conclusion, protamex MSH might have an anti-inflammatory effect through the down-regulation of NO production and iNOS protein expression related to NF-κB p65, c-Jun and JNK in the inflammatory signaling pathways.
주제어
#바이오과학 다슬기 항염증 효과 Melania snail Anti-inflammatory effect
학위논문 정보
저자
김태욱
학위수여기관
신라대학교 일반대학원
학위구분
국내석사
학과
바이오과학과
지도교수
김미령
발행연도
2016
총페이지
vi, 54장
키워드
바이오과학 다슬기 항염증 효과 Melania snail Anti-inflammatory effect
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