[학위논문]miR-10bA>C, miR-124C>G, miR-150G>A, miR-300T>C, miR-600T>C and miR-1179A>T 유전자 다형의 반복 자연유산 발병위험 연관성 연구 Association study of the miR-10bA>C, miR-124C>G, miR-150G>A, miR-300T>C, miR-600T>C and miR-1179A>T polymorphisms with risk of idiopathic recurrent pregnancy loss (RPL) in Korean women원문보기
차세대 염기서열분석 (NGS)은 대규모 병렬 또는 심층 시퀀싱은 게놈 연구에 혁명을 일으킨 DNA 시퀀싱 기술을 설명하는 관련 용어입니다. 그리고 microRNA발현 프로파일 뿐만 아니라 이전에 확인되지 않은 microRNA의 발견에 대한 검사를 허용한다. MicroRNAs (miRNAs)는 ...
차세대 염기서열분석 (NGS)은 대규모 병렬 또는 심층 시퀀싱은 게놈 연구에 혁명을 일으킨 DNA 시퀀싱 기술을 설명하는 관련 용어입니다. 그리고 microRNA발현 프로파일 뿐만 아니라 이전에 확인되지 않은 microRNA의 발견에 대한 검사를 허용한다. MicroRNAs (miRNAs)는 RNA 침묵과 유전자 발현의 전사 후 조절 인자를 통해 표적 유전자를 조절하는 약 19-25 nucleotide의 single-strand non-coding RNA이다. 최근 연구를 통해서 miRNA가 자궁 내막증, 임신중독증과 불임에 연관 되어 있음을 밝혔다. 그래서 miRNA이 생식 시스템의 정상적인 기능에 필수적인 것을 알 수 있다. 하지만 miRNA 비정상적 발현은 수많은 질병 상태에 연관되어있다. 또한 불임 여성의 질병의 관련성에 대한 연구는 그리 많이 밝혀지지 않았다. 앞으로의 유전학 연구에 재발 임신 손실과 관계된 연구, 특히나 유전자 연구에 큰 선도연구가 될 것이다. 반복 자연유산(RPL)은 통상 20주 임신 기간 이전에 세 번 이상의 연속적인 임신 손실로 정의된다. 그러나 미국 생식 의학 협회 (ASRM)는 두 번 이상의 연속적인 임신 손실로 재 정의한다. 임신 손실은 대부분 임신 2-3개월 이내 1~8의 임신 한 여성에서 발생한다. 반복 자연유산 (RPL)의 원인은 유전적, 해부학적, 내분비 장애, 태반 이상, 감염, 알코올(음주), 흡연, 환경적 요인, 심리적 스트레스 등 여러 가지 요인을 포함한다. 그래서 우리는 내분비계 관련 유전자 또는 세포주기 기전에 대한 target 유전자 내의 miRNA 서열의 nucleotide 다형성을 조사하고, 한국인 여성 반복자연유산의 유전적 원인을 연구하고자 한다. 본 연구에서는 환자군 375명과 대조군 276명을 대상으로 miR-10bA>C, miR-124C>G, miR-150G>A, miR-300T>C, miR-600T>C and miR-1179A>T가 반복 자연유산 발병에 미치는 영향 연구를 중합효소 연쇄반응 및 제한효소 절편길이 다형(PCR-RFLP)과 real-time PCR 분석방법을 이용하여 실시하였다. RPL 환자 군은 1999년 3월부터 2012년 2월까지 분당차병원 산부인과에서 모집하였으며, 일반 생리주기, 46XX의 정상핵형, 적어도 한번 임신, 임신 손실 경험이 없는 조건을 충족하였다. 분당차병원의 임상시험 심의위원회는 연구를 승인하였고, 모든 환자의 동의를 받았다. 그 결과 miR-150G>A와 miR-1179A>T의 유전적 다형이 반복자연유산의 발병에 연관성을 보였다. 그리고 miR-10b/miR-150/miR-600/miR-1179과 miR-150/miR-600/miR-1179에서의 대립유전자 조합 분석에서 반복 자연유산 환자 군과 대조군 사이에 유의한 차이가 있었으며, 또한 miR-150G>A는 혈전 요인과 밀접한 관련이 있었다. 우리의 연구에서 miR-150G>A (rs73056059)와 miR-1179A>T (rs2350271)의 유전적 다형이 반복자연유산과 관련이 있으며, 또한 miRNA 유전자형 조합과 대립유전자 조합은 반복자연유산의 진단 및 예방, 예후관리에 사용이 가능한 잠재적 생물학적 지표일 수 있다고 제안한다.
차세대 염기서열분석 (NGS)은 대규모 병렬 또는 심층 시퀀싱은 게놈 연구에 혁명을 일으킨 DNA 시퀀싱 기술을 설명하는 관련 용어입니다. 그리고 microRNA발현 프로파일 뿐만 아니라 이전에 확인되지 않은 microRNA의 발견에 대한 검사를 허용한다. MicroRNAs (miRNAs)는 RNA 침묵과 유전자 발현의 전사 후 조절 인자를 통해 표적 유전자를 조절하는 약 19-25 nucleotide의 single-strand non-coding RNA이다. 최근 연구를 통해서 miRNA가 자궁 내막증, 임신중독증과 불임에 연관 되어 있음을 밝혔다. 그래서 miRNA이 생식 시스템의 정상적인 기능에 필수적인 것을 알 수 있다. 하지만 miRNA 비정상적 발현은 수많은 질병 상태에 연관되어있다. 또한 불임 여성의 질병의 관련성에 대한 연구는 그리 많이 밝혀지지 않았다. 앞으로의 유전학 연구에 재발 임신 손실과 관계된 연구, 특히나 유전자 연구에 큰 선도연구가 될 것이다. 반복 자연유산(RPL)은 통상 20주 임신 기간 이전에 세 번 이상의 연속적인 임신 손실로 정의된다. 그러나 미국 생식 의학 협회 (ASRM)는 두 번 이상의 연속적인 임신 손실로 재 정의한다. 임신 손실은 대부분 임신 2-3개월 이내 1~8의 임신 한 여성에서 발생한다. 반복 자연유산 (RPL)의 원인은 유전적, 해부학적, 내분비 장애, 태반 이상, 감염, 알코올(음주), 흡연, 환경적 요인, 심리적 스트레스 등 여러 가지 요인을 포함한다. 그래서 우리는 내분비계 관련 유전자 또는 세포주기 기전에 대한 target 유전자 내의 miRNA 서열의 nucleotide 다형성을 조사하고, 한국인 여성 반복자연유산의 유전적 원인을 연구하고자 한다. 본 연구에서는 환자군 375명과 대조군 276명을 대상으로 miR-10bA>C, miR-124C>G, miR-150G>A, miR-300T>C, miR-600T>C and miR-1179A>T가 반복 자연유산 발병에 미치는 영향 연구를 중합효소 연쇄반응 및 제한효소 절편길이 다형(PCR-RFLP)과 real-time PCR 분석방법을 이용하여 실시하였다. RPL 환자 군은 1999년 3월부터 2012년 2월까지 분당차병원 산부인과에서 모집하였으며, 일반 생리주기, 46XX의 정상핵형, 적어도 한번 임신, 임신 손실 경험이 없는 조건을 충족하였다. 분당차병원의 임상시험 심의위원회는 연구를 승인하였고, 모든 환자의 동의를 받았다. 그 결과 miR-150G>A와 miR-1179A>T의 유전적 다형이 반복자연유산의 발병에 연관성을 보였다. 그리고 miR-10b/miR-150/miR-600/miR-1179과 miR-150/miR-600/miR-1179에서의 대립유전자 조합 분석에서 반복 자연유산 환자 군과 대조군 사이에 유의한 차이가 있었으며, 또한 miR-150G>A는 혈전 요인과 밀접한 관련이 있었다. 우리의 연구에서 miR-150G>A (rs73056059)와 miR-1179A>T (rs2350271)의 유전적 다형이 반복자연유산과 관련이 있으며, 또한 miRNA 유전자형 조합과 대립유전자 조합은 반복자연유산의 진단 및 예방, 예후관리에 사용이 가능한 잠재적 생물학적 지표일 수 있다고 제안한다.
Objective: Next-generation sequencing (NGS) allows for rigorous examination of discovery of previously uncharacterized miRNAs as well as miRNA expression profiles. MicroRNAs (miRNAs) are single-strand non-coding RNAs of approximately 19-25 nucleotides that regulate target genes through RNA silencing...
Objective: Next-generation sequencing (NGS) allows for rigorous examination of discovery of previously uncharacterized miRNAs as well as miRNA expression profiles. MicroRNAs (miRNAs) are single-strand non-coding RNAs of approximately 19-25 nucleotides that regulate target genes through RNA silencing and post-transcriptional regulation of gene expression. Through a recent study, found that miRNA is associated with endometriosis, pre-eclampsia and infertility. Recurrent pregnancy loss (RPL) is usually defined as three or more consecutive pregnancy losses before a gestational age of 20weeks; however, the American Society for Reproductive Medicine (ASRM) has recently redefined this condition as two or more consecutive pregnancy losses. So we investigate the nucleotide polymorphisms of miRNA sequence within that target the endocrine-related gene or cell cycle mechanism, and to study the genetic cause of recurrent pregnancy loss in Korean women. Materials and Methods: Blood samples were collected from 375 patients with idiopathic RPL and 276 control participants. The patients were enrolled between March 1999 and February 2010 at the Department of Obstetrics and Gynecology of CHA Bundang Medical Center (Seongnam, South Korea). DNA was extracted from leukocytes using a G-DEX™ II Genomic DNA Extraction kit (Intron Biotechnology, Seongnam, Korea) according to the manufacturer's instructions. The polymorphisms miR-124C>G, miR-300T>C, miR-600T>C and miR-1179A>T were detected by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis. Also, polymorphisms miR-10bA>C and miR-150G>A were detected by real-time PCR analysis.
Outcome: Genotyping was performed with the PCR-RFLP method. The miR-150G>A dominant type had significant association for increasing RPL risk (AOR=2.567, 95% CI=1.598-4.124, P=0.0001). The miR-1179A>T dominant type had significant association for decreasing RPL risk (AOR=0.626, 95% CI=0.457-0.857, P=0.004). The G-G-T-T (miR-124/miR-150/miR-600/miR-1179: OR=0.388, 95% CI=0.231-0.653, P=0.0004) and the G-T-T (miR-150/miR-600/miR-1179: OR=0.650, 95% CI=0.491-0.860, P=0.003) were decreased in RPL risk. The associations with RPL were observed, including miR-10bCC/miR-600TC, miR-10bAA/miR-1179AT, miR-10bAA/miR-150GA, miR-10bAC/miR-150GA, miR-600TT/miR-1179AT, miR-600TC/miR-1179AT, miR-150GA/miR-600TC, miR-124CG/miR-1179AT, miR-300TC/miR-1179AT, miR-150GG/miR-1179AT, miR-150GG/miR-1179TT, miR-150GA/miR-1179AA, miR-124CC/miR-150GA, miR-150GA/miR-300TT and miR-150GA/miR-300TC.
Conclusion: Our study found miRNA polymorphisms that miR-10bA>C (rs1867863), miR-150G>A (rs73056059) and miR1179A>T (rs2350271), associated with idiopathic RPL in Korean women. Furthermore, we suggest the microRNA genotype combinations and allele combination may be clinically useful biomarkers for recurrent pregnancy loss development, prevention and prognosis management.
Objective: Next-generation sequencing (NGS) allows for rigorous examination of discovery of previously uncharacterized miRNAs as well as miRNA expression profiles. MicroRNAs (miRNAs) are single-strand non-coding RNAs of approximately 19-25 nucleotides that regulate target genes through RNA silencing and post-transcriptional regulation of gene expression. Through a recent study, found that miRNA is associated with endometriosis, pre-eclampsia and infertility. Recurrent pregnancy loss (RPL) is usually defined as three or more consecutive pregnancy losses before a gestational age of 20weeks; however, the American Society for Reproductive Medicine (ASRM) has recently redefined this condition as two or more consecutive pregnancy losses. So we investigate the nucleotide polymorphisms of miRNA sequence within that target the endocrine-related gene or cell cycle mechanism, and to study the genetic cause of recurrent pregnancy loss in Korean women. Materials and Methods: Blood samples were collected from 375 patients with idiopathic RPL and 276 control participants. The patients were enrolled between March 1999 and February 2010 at the Department of Obstetrics and Gynecology of CHA Bundang Medical Center (Seongnam, South Korea). DNA was extracted from leukocytes using a G-DEX™ II Genomic DNA Extraction kit (Intron Biotechnology, Seongnam, Korea) according to the manufacturer's instructions. The polymorphisms miR-124C>G, miR-300T>C, miR-600T>C and miR-1179A>T were detected by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis. Also, polymorphisms miR-10bA>C and miR-150G>A were detected by real-time PCR analysis.
Outcome: Genotyping was performed with the PCR-RFLP method. The miR-150G>A dominant type had significant association for increasing RPL risk (AOR=2.567, 95% CI=1.598-4.124, P=0.0001). The miR-1179A>T dominant type had significant association for decreasing RPL risk (AOR=0.626, 95% CI=0.457-0.857, P=0.004). The G-G-T-T (miR-124/miR-150/miR-600/miR-1179: OR=0.388, 95% CI=0.231-0.653, P=0.0004) and the G-T-T (miR-150/miR-600/miR-1179: OR=0.650, 95% CI=0.491-0.860, P=0.003) were decreased in RPL risk. The associations with RPL were observed, including miR-10bCC/miR-600TC, miR-10bAA/miR-1179AT, miR-10bAA/miR-150GA, miR-10bAC/miR-150GA, miR-600TT/miR-1179AT, miR-600TC/miR-1179AT, miR-150GA/miR-600TC, miR-124CG/miR-1179AT, miR-300TC/miR-1179AT, miR-150GG/miR-1179AT, miR-150GG/miR-1179TT, miR-150GA/miR-1179AA, miR-124CC/miR-150GA, miR-150GA/miR-300TT and miR-150GA/miR-300TC.
Conclusion: Our study found miRNA polymorphisms that miR-10bA>C (rs1867863), miR-150G>A (rs73056059) and miR1179A>T (rs2350271), associated with idiopathic RPL in Korean women. Furthermore, we suggest the microRNA genotype combinations and allele combination may be clinically useful biomarkers for recurrent pregnancy loss development, prevention and prognosis management.
주제어
#next-generation sequencing (NGS) microRNA recurrent pregnancy loss (RPL) polymorphism Korean women
학위논문 정보
저자
김은선
학위수여기관
차의과학대학교 대학원
학위구분
국내석사
학과
의생명과학과
지도교수
김남근
발행연도
2017
총페이지
ix, 61 p.
키워드
next-generation sequencing (NGS) microRNA recurrent pregnancy loss (RPL) polymorphism Korean women
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