본 연구는 Trichoderma reesei 유래 β-mannanase 정제법을 구축하고 Trigonella foenum-graecum galactomannan을 조제 및 분리한 가수분해산물을 이용하여 장내세균의 생육활성을 비교하였다. 장내세균 Bifidobacterium bifidum과 Lactobacillus casei의 대사산물을 통해 병원성 미생물의 항균 활성 효과를 확인하였다. 또한, Trichoderma reesei 유래 β-mannanase를 10% (NH4)2SO4에 침전 및 투석하여 DEAE Sephadex A-50 ion exchange chromatography와 Sephadex G-100 gel chromatography로 정제한 후, tricine ...
본 연구는 Trichoderma reesei 유래 β-mannanase 정제법을 구축하고 Trigonella foenum-graecum galactomannan을 조제 및 분리한 가수분해산물을 이용하여 장내세균의 생육활성을 비교하였다. 장내세균 Bifidobacterium bifidum과 Lactobacillus casei의 대사산물을 통해 병원성 미생물의 항균 활성 효과를 확인하였다. 또한, Trichoderma reesei 유래 β-mannanase를 10% (NH4)2SO4에 침전 및 투석하여 DEAE Sephadex A-50 ion exchange chromatography와 Sephadex G-100 gel chromatography로 정제한 후, tricine SDS-PAGE 상에서 단일 band를 확인하였으며 분자량은 54 kDa으로 나타났다. Trigonella foenum-graecum로부터 galactomanno-oligosaccharides을 조제하였고 TLC 분석 및 Timell의 방법에 의해 가수분해 된 galactomanno-oligosaccharides의 중합도를 2, 3, 4, 6 으로 규명하였다. 4가지의 중합도로 가수분해 된 galactomanno-oligosaccharides를 LMOS(Low-molecular weight galactomanno-oligosaccharides)와 HMOS(High-molecular weight galacto-mannooligosaccharide) 두 그룹으로 나누어 연구를 진행하였다. Bifidobacterium, Lactobacillus 균주에 대한 생육활성을 비교하기 위해 standard MRS medium에서 glucose 대신 분리된 galactomanno-oligosaccharides를 첨가한 modified MRS medium을 조제하였다. Bifidobacterium, Lactobacillus 균주에 대한 생육활성은 standard MRS medium보다 modified MRS medium에서 증가한 생육 활성을 보였다. 특히, HMOS(High-molecular weight galactomanno-oligosaccharide)를 첨가한 modified MRS medium에서 우수한 생육활성에 가졌으며 그에 따른 대사산물의 lactic acid, acetoin의 생성량 또한 증가됨을 확인 할 수 있었다. Gel filtration을 통해서 항균물질을 분리하였고 4가지 균주인 Staphylococcus aureus KCCM 11335, Propionibacterium acnes KCCM 41747, Trichophyton rubrum KCCM 60443, Malassezia furfur KCCM 11894에 대하여 항균제 감수성 실험 결과를 확인하였다. L. plantarum 유래의 bacteriocin은 122 kDa의 분자량을 가졌고 병원미생물 S. aureus, P. acnes, M. furfur에 대하여 항균 활성을 보였다. MIC 값은 각각 1200 AU/㎖, 2000 AU/㎖, 2000 AU/㎖을 나타내었고 MBC 값은 S. aureus와 P. acnes에 대해서만 2800 AU/㎖, 3200 AU/㎖ 값을 나타내었다. pH와 온도에 비교적 민감하였으며, 단백질 가수분해 효소 처리 시 활성이 저해되어 단백질 물질임 확인하였다. B. longum 유래의 bacteriocin-like는 120 Da의 분자량은 가졌고 병원미생물 S. aureus만 대하여 항균 활성을 보였다. MIC 값은 1400 AU/㎖을 나타내었지만 MBC 값은 나타내지 못했다. pH와 온도에 비교적 민감하였으며, 단백질 가수분해 효소 처리 시 활성이 저해되어 단백질 물질임을 확인하였다. L. casei 유래의 bacteriocin-like는 88.11 Da의 분자량을 가졌고 병원미생물 S. aureus, P. acnes, M. furfur에 대하여 항균 활성을 보였다. MIC 값은 각각 300 µg/㎖, 400 µg/㎖, 400 µg/㎖를 나타냈지만 MBC 값은 나타내지 못했다. pH와 온도에 비교적 민감하지 않았으며, 단백질 가수분해 효소 처리 시 활성이 저해되지 않아 비단백질 물질임을 확인하였다.
본 연구는 Trichoderma reesei 유래 β-mannanase 정제법을 구축하고 Trigonella foenum-graecum galactomannan을 조제 및 분리한 가수분해산물을 이용하여 장내세균의 생육활성을 비교하였다. 장내세균 Bifidobacterium bifidum과 Lactobacillus casei의 대사산물을 통해 병원성 미생물의 항균 활성 효과를 확인하였다. 또한, Trichoderma reesei 유래 β-mannanase를 10% (NH4)2SO4에 침전 및 투석하여 DEAE Sephadex A-50 ion exchange chromatography와 Sephadex G-100 gel chromatography로 정제한 후, tricine SDS-PAGE 상에서 단일 band를 확인하였으며 분자량은 54 kDa으로 나타났다. Trigonella foenum-graecum로부터 galactomanno-oligosaccharides을 조제하였고 TLC 분석 및 Timell의 방법에 의해 가수분해 된 galactomanno-oligosaccharides의 중합도를 2, 3, 4, 6 으로 규명하였다. 4가지의 중합도로 가수분해 된 galactomanno-oligosaccharides를 LMOS(Low-molecular weight galactomanno-oligosaccharides)와 HMOS(High-molecular weight galacto-mannooligosaccharide) 두 그룹으로 나누어 연구를 진행하였다. Bifidobacterium, Lactobacillus 균주에 대한 생육활성을 비교하기 위해 standard MRS medium에서 glucose 대신 분리된 galactomanno-oligosaccharides를 첨가한 modified MRS medium을 조제하였다. Bifidobacterium, Lactobacillus 균주에 대한 생육활성은 standard MRS medium보다 modified MRS medium에서 증가한 생육 활성을 보였다. 특히, HMOS(High-molecular weight galactomanno-oligosaccharide)를 첨가한 modified MRS medium에서 우수한 생육활성에 가졌으며 그에 따른 대사산물의 lactic acid, acetoin의 생성량 또한 증가됨을 확인 할 수 있었다. Gel filtration을 통해서 항균물질을 분리하였고 4가지 균주인 Staphylococcus aureus KCCM 11335, Propionibacterium acnes KCCM 41747, Trichophyton rubrum KCCM 60443, Malassezia furfur KCCM 11894에 대하여 항균제 감수성 실험 결과를 확인하였다. L. plantarum 유래의 bacteriocin은 122 kDa의 분자량을 가졌고 병원미생물 S. aureus, P. acnes, M. furfur에 대하여 항균 활성을 보였다. MIC 값은 각각 1200 AU/㎖, 2000 AU/㎖, 2000 AU/㎖을 나타내었고 MBC 값은 S. aureus와 P. acnes에 대해서만 2800 AU/㎖, 3200 AU/㎖ 값을 나타내었다. pH와 온도에 비교적 민감하였으며, 단백질 가수분해 효소 처리 시 활성이 저해되어 단백질 물질임 확인하였다. B. longum 유래의 bacteriocin-like는 120 Da의 분자량은 가졌고 병원미생물 S. aureus만 대하여 항균 활성을 보였다. MIC 값은 1400 AU/㎖을 나타내었지만 MBC 값은 나타내지 못했다. pH와 온도에 비교적 민감하였으며, 단백질 가수분해 효소 처리 시 활성이 저해되어 단백질 물질임을 확인하였다. L. casei 유래의 bacteriocin-like는 88.11 Da의 분자량을 가졌고 병원미생물 S. aureus, P. acnes, M. furfur에 대하여 항균 활성을 보였다. MIC 값은 각각 300 µg/㎖, 400 µg/㎖, 400 µg/㎖를 나타냈지만 MBC 값은 나타내지 못했다. pH와 온도에 비교적 민감하지 않았으며, 단백질 가수분해 효소 처리 시 활성이 저해되지 않아 비단백질 물질임을 확인하였다.
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