목단피(Moutan Cortex Radicis)는 모란(Paeonia suffruticosa Andrews)의 뿌리껍질로서, 한의학에서는 오래 전부터 다양한 증상에 폭넓게 사용되어 왔다. 특히, 목단피는 각종 염증성 증상에 사용이 되어 왔는데, 목단피의 어떤 유효성분이 생체 내에서 작용하여 항염증 기전을 나타내는지에 대해서는 아직 명확하게 밝혀진 바가 없기에 본 연구를 실시하게 되었다. 목단피의 주요 유효 성분 중 oxypaeoniflorin 과 paeoniflorin을 검출하기 위한 기존의 분석 방법을 수정하고 검증하기 위해 HPLC를 이용하여 oxypaeoniflorin과 paeoniflorin의 ...
목단피(Moutan Cortex Radicis)는 모란(Paeonia suffruticosa Andrews)의 뿌리껍질로서, 한의학에서는 오래 전부터 다양한 증상에 폭넓게 사용되어 왔다. 특히, 목단피는 각종 염증성 증상에 사용이 되어 왔는데, 목단피의 어떤 유효성분이 생체 내에서 작용하여 항염증 기전을 나타내는지에 대해서는 아직 명확하게 밝혀진 바가 없기에 본 연구를 실시하게 되었다. 목단피의 주요 유효 성분 중 oxypaeoniflorin 과 paeoniflorin을 검출하기 위한 기존의 분석 방법을 수정하고 검증하기 위해 HPLC를 이용하여 oxypaeoniflorin과 paeoniflorin의 특이성(specificity), 직선성(linearity), 정밀성(precision), 정확성(accuracy), 검출 한계 (LOD; Limit of detection), 정량 한계 (LOQ; Limit of quantitation)를 측정하였다. 목단피 추출물과 유효성분인 paeoniflorin, oxypaeoniflorin의 항염증 기전을 규명하기 위해, LPS에 의해 유도되는 염증 반응을 억제하고 TLR신호 전달 과정을 조절하는지를 확인하고자 하였다. RAW264.7 세포에 LPS가 처리되거나 처리되지 않은 상태에서 목단피 추출물과 유효 성분 paeoniflorin, oxypaeoniflorin을 처리하여 항염증 효과가 있다는 것을 확인하고자 하였다. 목단피 추출물 및 유효 성분(paeoniflorin, oxypaeoniflorin)의 분석법 검증 결과, 확립된 분석법은 특이성, 직선성, 정밀성, 정확성, 검출한계 및 정량한계가 모두 우수한 분석법임을 검증되었다. 결론적으로, 목단피의 지표성분인 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 HPLC를 이용한 동시분석방법이 적합한 분석방법임이 검증되었다. 또한, 목단피 추출물과 유효성분인 paeoniflorin, oxypaeoniflorin의 항염증 기전을 밝히기 위한 연구를 시행한 결과, 다음과 같은 결과를 나타내었다. LPS에 의해 유도되는 nitric oxide (NO) 분비를 저해하였고, NO 분비에 관련 있는 유전자인 inducible nitric oxide synthase (iNOS)의 유전자 발현도 조절하였다. LPS가 처리된 세포에서 염증 사이토카인의 분비와 유전자 발현을 억제시켰다. TLR 신호 과정을 조절해서 NF-κB의 활성을 약화시켰다. ERK와 p38 MAPK의 인산화를 감소 시켰다. 결론적으로, 목단피 추출물과 paeoniflorin, oxypaeoniflorin은 RAW264.7 세포에서 TLR 신호 과정을 조절을 통해 항염증 효과가 있는 것으로 나타났다.
목단피(Moutan Cortex Radicis)는 모란(Paeonia suffruticosa Andrews)의 뿌리껍질로서, 한의학에서는 오래 전부터 다양한 증상에 폭넓게 사용되어 왔다. 특히, 목단피는 각종 염증성 증상에 사용이 되어 왔는데, 목단피의 어떤 유효성분이 생체 내에서 작용하여 항염증 기전을 나타내는지에 대해서는 아직 명확하게 밝혀진 바가 없기에 본 연구를 실시하게 되었다. 목단피의 주요 유효 성분 중 oxypaeoniflorin 과 paeoniflorin을 검출하기 위한 기존의 분석 방법을 수정하고 검증하기 위해 HPLC를 이용하여 oxypaeoniflorin과 paeoniflorin의 특이성(specificity), 직선성(linearity), 정밀성(precision), 정확성(accuracy), 검출 한계 (LOD; Limit of detection), 정량 한계 (LOQ; Limit of quantitation)를 측정하였다. 목단피 추출물과 유효성분인 paeoniflorin, oxypaeoniflorin의 항염증 기전을 규명하기 위해, LPS에 의해 유도되는 염증 반응을 억제하고 TLR 신호 전달 과정을 조절하는지를 확인하고자 하였다. RAW264.7 세포에 LPS가 처리되거나 처리되지 않은 상태에서 목단피 추출물과 유효 성분 paeoniflorin, oxypaeoniflorin을 처리하여 항염증 효과가 있다는 것을 확인하고자 하였다. 목단피 추출물 및 유효 성분(paeoniflorin, oxypaeoniflorin)의 분석법 검증 결과, 확립된 분석법은 특이성, 직선성, 정밀성, 정확성, 검출한계 및 정량한계가 모두 우수한 분석법임을 검증되었다. 결론적으로, 목단피의 지표성분인 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 HPLC를 이용한 동시분석방법이 적합한 분석방법임이 검증되었다. 또한, 목단피 추출물과 유효성분인 paeoniflorin, oxypaeoniflorin의 항염증 기전을 밝히기 위한 연구를 시행한 결과, 다음과 같은 결과를 나타내었다. LPS에 의해 유도되는 nitric oxide (NO) 분비를 저해하였고, NO 분비에 관련 있는 유전자인 inducible nitric oxide synthase (iNOS)의 유전자 발현도 조절하였다. LPS가 처리된 세포에서 염증 사이토카인의 분비와 유전자 발현을 억제시켰다. TLR 신호 과정을 조절해서 NF-κB의 활성을 약화시켰다. ERK와 p38 MAPK의 인산화를 감소 시켰다. 결론적으로, 목단피 추출물과 paeoniflorin, oxypaeoniflorin은 RAW264.7 세포에서 TLR 신호 과정을 조절을 통해 항염증 효과가 있는 것으로 나타났다.
The aim of this study was the validation of a modified analytical method for determination of oxypaeoniflorin and paeoniflorin in Moutan Cortex Radicis (MCR) extract and evaluation of anti-inflammatory activity of MCR extract, paeoniflorin, oxypaeoniflorin. For validation of the analytical meth...
The aim of this study was the validation of a modified analytical method for determination of oxypaeoniflorin and paeoniflorin in Moutan Cortex Radicis (MCR) extract and evaluation of anti-inflammatory activity of MCR extract, paeoniflorin, oxypaeoniflorin. For validation of the analytical method, we modified established analytical methods and validated improvement. For validation, the specificity, linearity, precision, accuracy, limit of detection (LOD), and limit of quantification of oxypaeoniflorin and paeoniflorin were measured by high performance liquid chromatography. The results show that the correlation coefficients of the calibration curve for oxypaeoniflorin and paeoniflorin were 1.0000 and 0.9998, respectively. The LOD for oxypaeoniflorin and paeoniflorin were 0.23 μg/mL and 0.25 μg/mL, respectively. The inter-day and intra-day precision values of oxypaeoniflorin and paeoniflorin were 0.70∼3.19% and 1.74∼2.43%, and 0.32∼0.92% and 0.62∼2.28%, respectively. The inter-day and intra-day accuracies of oxypaeoniflorin and paeoniflorin were 98.33∼102.11% and 97.72∼118.12%, and 98.44∼101.56% and 97.10∼112.00%, respectively. Therefore, the analytical method was validated for the detection of oxypaeoniflorin and paeoniflorin in Moutan Cortex Radicis extract. Moutan cortex radicis, the root bark of Paeonia suffruticosa, has been widely used as traditional herb. In this study, we evaluate whether MCR extract and two active compounds, paeoniflorin and oxypaeoniflorin, alleviate lipopolisaccharide (LPS)-induced inflammatory responses in RAW264.7 cells and controlled TLR signaling pathway. RAW264.7 cells were treated with MCR extract or two active compounds in the presence or absence of LPS. Extract and two active compounds inhibited the LPS-stimulated nitric oxide (NO) production and the inducible nitric oxide synthase (iNOS) gene expression. Also, extract and two active compounds suppressed the inflammatory cytokines secretion and gene expression in LPS-stimulated cells. Extract and two active compounds alleviate NF-κB activation by regulating upstream gene in TLR signaling pathway. Besides, extract and two active compounds decreased the phosphorylation of ERK and p38 MAPK. These results indicate that MCR extract, paeoniflorin and oxypaeoniflorin have anti-inflammatory effects through regulating TLR signaling pathway in RAW264.7 cells. Taken together, we here proved that MCR extract, paeoniflorin, and oxypaeoniflorin alleviate LPS-induced inflammatory responses through the regulation of TLR signaling pathway in RAW264.7 cells. Beside, MCR extract, paeoniflorin, and oxypaeoniflorin partially suppressed the phosphorylation of MAPKs, ERK and p38 MAPK. These finding suggested that MCR extract, paeoniflorin, and oxypaeoniflorin play as a potential natural bioactive materials with anti-inflammatory effects.
The aim of this study was the validation of a modified analytical method for determination of oxypaeoniflorin and paeoniflorin in Moutan Cortex Radicis (MCR) extract and evaluation of anti-inflammatory activity of MCR extract, paeoniflorin, oxypaeoniflorin. For validation of the analytical method, we modified established analytical methods and validated improvement. For validation, the specificity, linearity, precision, accuracy, limit of detection (LOD), and limit of quantification of oxypaeoniflorin and paeoniflorin were measured by high performance liquid chromatography. The results show that the correlation coefficients of the calibration curve for oxypaeoniflorin and paeoniflorin were 1.0000 and 0.9998, respectively. The LOD for oxypaeoniflorin and paeoniflorin were 0.23 μg/mL and 0.25 μg/mL, respectively. The inter-day and intra-day precision values of oxypaeoniflorin and paeoniflorin were 0.70∼3.19% and 1.74∼2.43%, and 0.32∼0.92% and 0.62∼2.28%, respectively. The inter-day and intra-day accuracies of oxypaeoniflorin and paeoniflorin were 98.33∼102.11% and 97.72∼118.12%, and 98.44∼101.56% and 97.10∼112.00%, respectively. Therefore, the analytical method was validated for the detection of oxypaeoniflorin and paeoniflorin in Moutan Cortex Radicis extract. Moutan cortex radicis, the root bark of Paeonia suffruticosa, has been widely used as traditional herb. In this study, we evaluate whether MCR extract and two active compounds, paeoniflorin and oxypaeoniflorin, alleviate lipopolisaccharide (LPS)-induced inflammatory responses in RAW264.7 cells and controlled TLR signaling pathway. RAW264.7 cells were treated with MCR extract or two active compounds in the presence or absence of LPS. Extract and two active compounds inhibited the LPS-stimulated nitric oxide (NO) production and the inducible nitric oxide synthase (iNOS) gene expression. Also, extract and two active compounds suppressed the inflammatory cytokines secretion and gene expression in LPS-stimulated cells. Extract and two active compounds alleviate NF-κB activation by regulating upstream gene in TLR signaling pathway. Besides, extract and two active compounds decreased the phosphorylation of ERK and p38 MAPK. These results indicate that MCR extract, paeoniflorin and oxypaeoniflorin have anti-inflammatory effects through regulating TLR signaling pathway in RAW264.7 cells. Taken together, we here proved that MCR extract, paeoniflorin, and oxypaeoniflorin alleviate LPS-induced inflammatory responses through the regulation of TLR signaling pathway in RAW264.7 cells. Beside, MCR extract, paeoniflorin, and oxypaeoniflorin partially suppressed the phosphorylation of MAPKs, ERK and p38 MAPK. These finding suggested that MCR extract, paeoniflorin, and oxypaeoniflorin play as a potential natural bioactive materials with anti-inflammatory effects.
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