목단피 추출물의 Oxypaeoniflorin 및 Paeoniflorin의 분석법 개선 및 검증 Modification and Validation of Analytical Method for Oxypaeoniflorin and Paeoniflorin in Moutan Cortex Radicis Extract원문보기
목단피의 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 함량 분석 및 원료의 표준화를 위하여 분석법의 개발 및 검증을 실시하였다. 기존의 보고된 분석법을 개선하여 분석법을 개발하고 확립된 분석법에 대한 분석법 검증을 실시하였다. 분석법 검증은 특이성, 직선성, 정확성, 정밀성, 검출한계 및 정량한계를 통하여 분석법의 신뢰성을 검증하였다. HPLC를 이용한 분석방법에서 표준용액의 머무름 시간과 목단피 추출물의 머무름 시간이 일치하였으며, 동일한 spectrum을 나타내는 것을 확인하여 분석법의 특이성을 검증하였다. Oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 검량선은 상관계수 값이 각각 1.0000, 0.9998로 나타나 우수한 직선성을 보여주어 분석에 적합함을 확인하였다. 농도를 아는 시료에 인위적으로 저농도, 중간농도, 고농도의 표준물질을 첨가하여 정밀성 및 정확성을 계산하였다. Oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 정밀성은 일간 정밀성, 일내 정밀성으로 확인하였으며, oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 일간 정밀성은 각각 0.70~3.19%, 1.74~2.43% 수준으로 확인되었으며, 일내 정밀성은 0.32~0.92%, 0.62~2.28% 수준으로 5% 이하의 우수한 정밀성을 보였다. 정확성 측정 결과 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 일간 정확성은 98.33~102.11%, 97.72~118.12%를 나타내었으며, 일내 정확성은 98.44~101.56%, 97.10~112.00% 수준으로 우수한 정확성을 나타내었다. Oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 검출한계는 각각 $0.23{\mu}g/mL$, $0.25{\mu}g/mL$였고 정량한계는 $0.71{\mu}g/mL$, $0.77{\mu}g/mL$로 나타내어, 저농도에서도 검출이 가능함을 확인하였다. 분석법 검증 결과, 확립된 분석법은 특이성, 직선성, 정밀성, 정확성, 검출한계 및 정량한계가 모두 우수한 분석법임을 검증하였다. 또한, 검증된 분석법을 이용하여 목단피 추출물 시료 중 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 함량을 분석한 결과 oxypaeoniflorin $6.43{\pm}0.20mg/dry\;weight\;g$, paeoniflorin $20.25{\pm}0.37mg/dry\;weigh\; g$의 함량을 가지고 있는 것으로 확인되었다. 본 연구 결과 목단피의 지표성분인 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 HPLC를 이용한 동시분석방법이 적합한 분석방법임이 검증되었다.
목단피의 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 함량 분석 및 원료의 표준화를 위하여 분석법의 개발 및 검증을 실시하였다. 기존의 보고된 분석법을 개선하여 분석법을 개발하고 확립된 분석법에 대한 분석법 검증을 실시하였다. 분석법 검증은 특이성, 직선성, 정확성, 정밀성, 검출한계 및 정량한계를 통하여 분석법의 신뢰성을 검증하였다. HPLC를 이용한 분석방법에서 표준용액의 머무름 시간과 목단피 추출물의 머무름 시간이 일치하였으며, 동일한 spectrum을 나타내는 것을 확인하여 분석법의 특이성을 검증하였다. Oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 검량선은 상관계수 값이 각각 1.0000, 0.9998로 나타나 우수한 직선성을 보여주어 분석에 적합함을 확인하였다. 농도를 아는 시료에 인위적으로 저농도, 중간농도, 고농도의 표준물질을 첨가하여 정밀성 및 정확성을 계산하였다. Oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 정밀성은 일간 정밀성, 일내 정밀성으로 확인하였으며, oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 일간 정밀성은 각각 0.70~3.19%, 1.74~2.43% 수준으로 확인되었으며, 일내 정밀성은 0.32~0.92%, 0.62~2.28% 수준으로 5% 이하의 우수한 정밀성을 보였다. 정확성 측정 결과 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 일간 정확성은 98.33~102.11%, 97.72~118.12%를 나타내었으며, 일내 정확성은 98.44~101.56%, 97.10~112.00% 수준으로 우수한 정확성을 나타내었다. Oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 검출한계는 각각 $0.23{\mu}g/mL$, $0.25{\mu}g/mL$였고 정량한계는 $0.71{\mu}g/mL$, $0.77{\mu}g/mL$로 나타내어, 저농도에서도 검출이 가능함을 확인하였다. 분석법 검증 결과, 확립된 분석법은 특이성, 직선성, 정밀성, 정확성, 검출한계 및 정량한계가 모두 우수한 분석법임을 검증하였다. 또한, 검증된 분석법을 이용하여 목단피 추출물 시료 중 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 함량을 분석한 결과 oxypaeoniflorin $6.43{\pm}0.20mg/dry\;weight\;g$, paeoniflorin $20.25{\pm}0.37mg/dry\;weigh\; g$의 함량을 가지고 있는 것으로 확인되었다. 본 연구 결과 목단피의 지표성분인 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 HPLC를 이용한 동시분석방법이 적합한 분석방법임이 검증되었다.
The aim of this study was the validation of a modified analytical method for determination of oxypaeoniflorin and paeoniflorin in Moutan Cortex Radicis extract. For validation of the analytical method, we modified established analytical methods and validated improvement. For validation, the specific...
The aim of this study was the validation of a modified analytical method for determination of oxypaeoniflorin and paeoniflorin in Moutan Cortex Radicis extract. For validation of the analytical method, we modified established analytical methods and validated improvement. For validation, the specificity, linearity, precision, accuracy, limit of detection (LOD), and limit of quantification of oxypaeoniflorin and paeoniflorin were measured by high performance liquid chromatography. The results show that the correlation coefficients of the calibration curve for oxypaeoniflorin and paeoniflorin were 1.0000 and 0.9998, respectively. The LOD for oxypaeoniflorin and paeoniflorin were $0.23{\mu}g/mL$ and $0.25{\mu}g/mL$, respectively. The inter-day and intra-day precision values of oxypaeoniflorin and paeoniflorin were 0.70~3.19% and 1.74~2.43%, and 0.32~0.92% and 0.62~2.28%, respectively. The inter-day and intra-day accuracies of oxypaeoniflorin and paeoniflorin were 98.33~102.11% and 97.72~118.12%, and 98.44~101.56% and 97.10~112.00%, respectively. Therefore, the analytical method was validated for the detection of oxypaeoniflorin and paeoniflorin in Moutan Cortex Radicis.
The aim of this study was the validation of a modified analytical method for determination of oxypaeoniflorin and paeoniflorin in Moutan Cortex Radicis extract. For validation of the analytical method, we modified established analytical methods and validated improvement. For validation, the specificity, linearity, precision, accuracy, limit of detection (LOD), and limit of quantification of oxypaeoniflorin and paeoniflorin were measured by high performance liquid chromatography. The results show that the correlation coefficients of the calibration curve for oxypaeoniflorin and paeoniflorin were 1.0000 and 0.9998, respectively. The LOD for oxypaeoniflorin and paeoniflorin were $0.23{\mu}g/mL$ and $0.25{\mu}g/mL$, respectively. The inter-day and intra-day precision values of oxypaeoniflorin and paeoniflorin were 0.70~3.19% and 1.74~2.43%, and 0.32~0.92% and 0.62~2.28%, respectively. The inter-day and intra-day accuracies of oxypaeoniflorin and paeoniflorin were 98.33~102.11% and 97.72~118.12%, and 98.44~101.56% and 97.10~112.00%, respectively. Therefore, the analytical method was validated for the detection of oxypaeoniflorin and paeoniflorin in Moutan Cortex Radicis.
따라서 본 연구에서는 목단피 추출물의 건강기능식품 원료로 개발 시 원료의 표준화를 위하여 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin의 분석법 개발 및 검증에 대한 연구를 실시하였다.
제안 방법
, Gyeonggi, Korea)를 이용하여 동결건조물로 제조하여 실험에 사용하였다. Oxypaeoniflorin과 paeoniflorin의 HPLC 분석은 Xu 등(22)의 분석방법을 변형하여 최적 분석 방법을 확립한 후 실시하였으며, 두 개의 표준물질을 동시분석 하였다. 분석에 사용한 기기는 Waters 2695 Separation Module HPLC system과 Waters 996 Photodiode Array Detector(Waters Co.
대상 데이터
본 실험에서 사용한 목단피(Moutan Cortex Radicis)는 중국 안휘성에서 6년 이상 재배된 목단의 뿌리를 채취하였으며, 잔뿌리와 목심부를 제거하고 껍질 부분만 무황처리한 뒤 이를 건조시켜 사용하였다. 표준물질 oxypaeoniflorin과 paeoniflorin은 MedChem Express Co.
본 실험에서 사용한 목단피(Moutan Cortex Radicis)는 중국 안휘성에서 6년 이상 재배된 목단의 뿌리를 채취하였으며, 잔뿌리와 목심부를 제거하고 껍질 부분만 무황처리한 뒤 이를 건조시켜 사용하였다. 표준물질 oxypaeoniflorin과 paeoniflorin은 MedChem Express Co.(Monmouth Junction, NJ, USA)에서 구입하였다. 용매로 사용한 dimethyl sulfoxide(DMSO)와 formic acid는 Junsei Chemical(Tokyo, Japan)에서 구입하였으며 acetonitrile은 J.
이론/모형
분석법의 유효성 검증은 International Conference for Harmonization(ICH) 가이드라인(26)을 근거로 하여 개발된 분석법의 특이성(specificity), 직선성(linearity), 정밀성 (precision), 정확성(accuracy), 검출한계(limit of detection, LOD) 및 정량한계(limit of quantitation, LOQ)를 이용하여 분석법의 유효성을 검증하였다.
성능/효과
따라서 기기조건을 일부 변경하여 최적 분석조건을 확립하였다(Table 1). HPLC를 이용하여 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin 표준물질을 분석하였을 때 oxypaeoniflorin은 259 nm에서 최대흡수파장을 나타내었으며, paeoniflorin은 233 nm에서 최대흡수파장을 나타내었다(Fig. 1). 각 물질의 최대흡수파장인 259, 233 nm 및 기존 보고된 논문의 분석 파장인 254 nm에 따른 두 물질의 peak 면적을 비교하여 최적 면적값을 나타내는 파장 값을 확인한 결과, 254 nm에서 두 물질의 최적 peak 면적값을 나타내어 최적분석파장은 254 nm로 설정하였다.
77 μg/mL로 나타났다(Table 3). 이상의 결과를 볼 때 목단피의 oxypaeoniflorin 및 paeoniflorin은 HPLC를 이용하여 동시분석이 가능하며 정량분석이 가능한 것으로 나타났다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
목단피의 주요 성분 중 히알루로니다아제 억제 효과를 가지고 있는 성분은 무엇인가?
이런 목단피의 주요 성분으로는 paeonol, paeonoside 등의 페놀류, oxypaeoniflorin, paeoniflorin 등의 monoterpene 배당체, tetragalloyglucose 등의 탄닌류 등을 함유한 것으로 알려져 있다(14-16). 이 중 oxypaeoniflorin과 paeoniflorin은 hyaluronidase 억제효과(17) 등의 생리활성을 가지고 있는 것으로 보고되었다.
한방에서 목단피는 무엇인가?
목단피(Moutan Cortex Radicis)는 작약과 목단(모란, Paeonia suffruticosa Andrews)의 뿌리껍질로서 한방에서 예로부터 해열, 양혈, 구어, 진통 및 항균 등의 효능을 가지고 있어 널리 사용되고 있다(1-6).
목단피의 생리활성은 무엇이 있는가?
목단피의 생리활성으로는 동맥경화 억제, 관절염, 항염 증, 혈소판 응집억제, 패혈증 억제, 항산화 및 tyrosinase 억제효과, 히스타민 유리억제, TNF-α 생성저해, 항당뇨효 과 등의 생리활성이 보고되고 있다(7-13). 이런 목단피의 주요 성분으로는 paeonol, paeonoside 등의 페놀류, oxypaeoniflorin, paeoniflorin 등의 monoterpene 배당체, tetragalloyglucose 등의 탄닌류 등을 함유한 것으로 알려져 있다(14-16).
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