Erythropoietin (EPO)은 적혈구 생성을 촉진하는 인자로 저산소환경에서 적혈구의 수를 증가시켜 빈혈 등의 치료제로 널리 쓰이고 있다. 일반적으로 CHO 세포주를 통해 생산되고 있는데 고발현 세포주를 확립하기 위해서는 효율적인 vector를 사용하는 것이 중요하다. 본 연구에서는 DHFR-/-인 CHO-DG44 세포주에 새로운 pIDZ-EPO vector를 transfection하여 세포주를 확립하였고, 또한 고발현 세포주를 개발하기까지 들어가는 많은 시간과 노력을 단축시키기 위해 부착세포가 아닌 부유세포주로부터 직접 transfection 하는 방법으로 세포주를 개발 하였다. 이를 위해 DHFR gene이 포함되어있는 pIDZ vector를 사용해 pIDZ-EPO를 제조하였으며, 제조된 ...
Erythropoietin (EPO)은 적혈구 생성을 촉진하는 인자로 저산소환경에서 적혈구의 수를 증가시켜 빈혈 등의 치료제로 널리 쓰이고 있다. 일반적으로 CHO 세포주를 통해 생산되고 있는데 고발현 세포주를 확립하기 위해서는 효율적인 vector를 사용하는 것이 중요하다. 본 연구에서는 DHFR-/-인 CHO-DG44 세포주에 새로운 pIDZ-EPO vector를 transfection하여 세포주를 확립하였고, 또한 고발현 세포주를 개발하기까지 들어가는 많은 시간과 노력을 단축시키기 위해 부착세포가 아닌 부유세포주로부터 직접 transfection 하는 방법으로 세포주를 개발 하였다. 이를 위해 DHFR gene이 포함되어있는 pIDZ vector를 사용해 pIDZ-EPO를 제조하였으며, 제조된 벡터를 CHO-DG44 세포주에 transfection한 후 G418과 MTX를 사용해 clone selection 및 생산량을 증폭시켰다. selection된 clone들은 dot-blot 및 enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)를 통해 생산량이 높은 세포주를 최종적으로 확립하였다. 한편, 고발현 세포주의 개발 기간을 단축하기 위해 CHO-DG44 세포주를 부유세포로 적응시켰으며, 적응된 부유세포에 pIDZ-EPO를 transfection하였다. 그 결과, transfection 효율은 부착세포에 비해 낮았지만 성공적으로 transfection된 세포를 selection할 수 있었고, 이들 세포주로부터 성장률과 생존율이 높은 세포주를 확립하였다. 본 연구결과로부터 새로운 EPO의 생산 세포주를 확립하였을 뿐 아니라, 새로운 vector 시스템을 이용하여 부유세포주에서 EPO 생산 세포주를 직접 제작함으로써 기존의 부착세포주로부터 확립한 세포주에 비해 훨씬 짧은 기간 안에 세포주를 개발할 수 있었다는 것을 확인하였다.
Erythropoietin (EPO)은 적혈구 생성을 촉진하는 인자로 저산소환경에서 적혈구의 수를 증가시켜 빈혈 등의 치료제로 널리 쓰이고 있다. 일반적으로 CHO 세포주를 통해 생산되고 있는데 고발현 세포주를 확립하기 위해서는 효율적인 vector를 사용하는 것이 중요하다. 본 연구에서는 DHFR-/-인 CHO-DG44 세포주에 새로운 pIDZ-EPO vector를 transfection하여 세포주를 확립하였고, 또한 고발현 세포주를 개발하기까지 들어가는 많은 시간과 노력을 단축시키기 위해 부착세포가 아닌 부유세포주로부터 직접 transfection 하는 방법으로 세포주를 개발 하였다. 이를 위해 DHFR gene이 포함되어있는 pIDZ vector를 사용해 pIDZ-EPO를 제조하였으며, 제조된 벡터를 CHO-DG44 세포주에 transfection한 후 G418과 MTX를 사용해 clone selection 및 생산량을 증폭시켰다. selection된 clone들은 dot-blot 및 enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)를 통해 생산량이 높은 세포주를 최종적으로 확립하였다. 한편, 고발현 세포주의 개발 기간을 단축하기 위해 CHO-DG44 세포주를 부유세포로 적응시켰으며, 적응된 부유세포에 pIDZ-EPO를 transfection하였다. 그 결과, transfection 효율은 부착세포에 비해 낮았지만 성공적으로 transfection된 세포를 selection할 수 있었고, 이들 세포주로부터 성장률과 생존율이 높은 세포주를 확립하였다. 본 연구결과로부터 새로운 EPO의 생산 세포주를 확립하였을 뿐 아니라, 새로운 vector 시스템을 이용하여 부유세포주에서 EPO 생산 세포주를 직접 제작함으로써 기존의 부착세포주로부터 확립한 세포주에 비해 훨씬 짧은 기간 안에 세포주를 개발할 수 있었다는 것을 확인하였다.
Erythropoietin (EPO) is well known as hypoxia-regulated protein can stimulate bone marrow to produce more red blood cells. Chinese hamster ovary (CHO) cells are a cell line derived from the ovary of the Chinese hamster, often used for generation of high expression cell line with efficient vector in ...
Erythropoietin (EPO) is well known as hypoxia-regulated protein can stimulate bone marrow to produce more red blood cells. Chinese hamster ovary (CHO) cells are a cell line derived from the ovary of the Chinese hamster, often used for generation of high expression cell line with efficient vector in biological and medical research. In our present study, we established CHO-DG44 (DHFR-/-) cell line which was transfected with a novel pIDZ-EPO vector. To optimize and reduce the cell line development process, CHO cell lines were adapted for suspension culture. Inaddition, the pIDZ-EPO was also transfection into adapted suspension CHO-DG44 cell lines. The positive clones were selected by G418 and methotrexate (MTX) and the selected clones were detected by a dot blot assay and an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to develop the high production cell lines. Our results showed that the new developed cell line could increase cell growth rates and viability, even though the transfection efficiency was lower than adhesion cell. In conclusion we developed CHO-DG44 suspension cell host to obtain high-level EPO using novel vector system in this study.
Erythropoietin (EPO) is well known as hypoxia-regulated protein can stimulate bone marrow to produce more red blood cells. Chinese hamster ovary (CHO) cells are a cell line derived from the ovary of the Chinese hamster, often used for generation of high expression cell line with efficient vector in biological and medical research. In our present study, we established CHO-DG44 (DHFR-/-) cell line which was transfected with a novel pIDZ-EPO vector. To optimize and reduce the cell line development process, CHO cell lines were adapted for suspension culture. Inaddition, the pIDZ-EPO was also transfection into adapted suspension CHO-DG44 cell lines. The positive clones were selected by G418 and methotrexate (MTX) and the selected clones were detected by a dot blot assay and an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to develop the high production cell lines. Our results showed that the new developed cell line could increase cell growth rates and viability, even though the transfection efficiency was lower than adhesion cell. In conclusion we developed CHO-DG44 suspension cell host to obtain high-level EPO using novel vector system in this study.
주제어
#erythropoietin cell line suspension transfection chinese hamster ovary cell development
학위논문 정보
저자
임현섭
학위수여기관
차의과학대학교 대학원
학위구분
국내석사
학과
의생명과학과
지도교수
박윤제
발행연도
2013
키워드
erythropoietin cell line suspension transfection chinese hamster ovary cell development
AI-Helper
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.