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문제 정의
- 또한 체내 수분 감소현상이 전해질의 불균형을 초래해 피로축적과 밀접한 관련이 있다는 점을 고려해 볼 때 매실이 땀을 많이 흘리는 운동 선수들의 수분대사 조절 능력에 미치는 영향을 모색할 필요성이 있다(9). 따라서 본 연구에서는 예로부터 민간요법에서 널리 이용되어 왔고 특히 풍부한 유기산과 섬유소를 함유하고 있는 매실을 새로운 기능성 음료로 개발하여 각종 암세포주에 미치는 영향을 살펴보았고 이를 실제 운동선수들에게 섭취시킴으로 운동 시 혈액 내 전해질의 농도 및 삼투압의 변화에 미치는 효과를 조사해 보았다.
제안 방법
- 1. Inhibitory effect of various beverages containing Prunus mume extract on the growth of SNU-16 for 2, 4 and 6 days in cytotoxicity test. DI: Placebo, D2: Ionic drink, D3: 0.
- ) 50gL를 첨가하고 4 시간 동안 더 배양시켰다. 각 well에 형성된 formazan을 용해하기 위해 solubilization solution(10% SDS in 0.01 M HC1)을 lOOgL씩 첨가하고 30 초간 잘 흔들어 준 후 ELISA microplate reader(DENLEY Japan) 492nm에서 흡광도를 측정하였다(12).
- 각각의 cell을 2X104 ceUs/mL 농도로 맞추어 60 mm dish culture plate에 3 ml씩 분주하고 4시간 배양시킨 후 준비된 매실음료를 1 mL씩 첨가하여 24시간 단위로 6일 동안 세포의 형태 변화를 관찰하였다. 매실 음료가 각종 암세포의 형태 변화에 미치는 영향을 Inverted microscope(Olympus, Model CK2, Japan)로 관찰하면서 사진을 촬영하였다가.
- 양(120mL)의 1 캔으로 제조하였다. 기존 이온 음료에 함유된 성분에 해당하는 전해질과 비타민 C, 과당 등을 첨가하되 매실함유량을 0.5%, 5%, 10%, 15% 및 20%가 되게 만들었고, 섭취음료의 제조는 식용 상의 문제점이 없도록 하기 위하여 음료 제조능력을 가진 제조회사에 의뢰하였다.
- 세포독성을 판독하는 방법은 단시간에 대량 검색 할 수 있는 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yll-2,5-diphenyltetrazolium bromide) colorimetric assay를 96 well tissue culture plate에서 실시하였다. 농도별 (SNU- 16; 2X106 cells/mL, SNU-C2A; 5xl04cens/mL, SNU- 449; lxltfcells/mL, HeLa; SllTcells/mL)로 조절된 각종 암세포주와 10% 우태혈청이 들어있는 각종 배지 100μl를 각 well에 넣고 37℃, 5% CO2 배양기에서 하룻밤 배양시킨 뒤, 준비된 매실음료를 농도별로(250μg/mL, 500 μg/mL, 1 mg/mL) 각 well에 20μL씩 첨가하였다. 이 plate를 5% CO2 incubator에서 48시간 배양시킨 후, MTT(Sigma Chemical Co.
- 매실 음료가 각종 암세포의 형태 변화에 미치는 영향을 Inverted microscope(Olympus, Model CK2, Japan)로 관찰하면서 사진을 촬영하였다가.
- 매실음료의 항암작용은 암 세포주를 이용한 in vitm 감수성 검사를 사용하여 매실음료들이 각종 암세포 주에 대해 나타내는 세포독성을 항암작용의 지표로 삼았다. 세포독성을 판독하는 방법은 단시간에 대량 검색 할 수 있는 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yll-2,5-diphenyltetrazolium bromide) colorimetric assay를 96 well tissue culture plate에서 실시하였다.
- 세포독성을 판독하는 방법은 단시간에 대량 검색 할 수 있는 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yll-2,5-diphenyltetrazolium bromide) colorimetric assay를 96 well tissue culture plate에서 실시하였다. 농도별 (SNU- 16; 2X106 cells/mL, SNU-C2A; 5xl04cens/mL, SNU- 449; lxltfcells/mL, HeLa; SllTcells/mL)로 조절된 각종 암세포주와 10% 우태혈청이 들어있는 각종 배지 100μl를 각 well에 넣고 37℃, 5% CO2 배양기에서 하룻밤 배양시킨 뒤, 준비된 매실음료를 농도별로(250μg/mL, 500 μg/mL, 1 mg/mL) 각 well에 20μL씩 첨가하였다.
- 각각 구분하였다. 이들을 대상으로 수분대사 조절 능력을 조사하기 위하여 안정시, 운동중, 운동 직후, 회복기 30분 및 1시간에 각각 정맥혈 15mL를 채혈하여 전해질(Na, K, Cl)의 변화 및 삼투압의 변화를 전해질 측정기 (EIT, USA)및 심투압측정기 (Fiske, USA)를 이용하여 각각 측정하였다.
- , West Germany)S. 측정하여 암세포 중식 억제효과를 관찰하였다(11).
대상 데이터
- 위암세포(SNU-16)와 대장암세포(SNU-C1) 및 간암 세포 (SNU*449)는 RPMI 1640 배지 (fetal bovine serum free)f- 사용하였고, 자궁암세포(HeLa) 및 정상 human fibroblast는 DMEM배지를 사용하여 배양하였다. 각각의 배지에는 1% penicillin-streptomycin(100units/mL, Gibco, BRL, U.
- 합숙훈련을 하는 남자 대학 운동선수 중 1개월 이내에 약물이나 보약 등의 섭취경험이 없는 16명의 태권도 선수를 위약음료섭취군 8명과 매실음료섭취군 8 명으로 각각 구분하였다. 이들을 대상으로 수분대사 조절 능력을 조사하기 위하여 안정시, 운동중, 운동 직후, 회복기 30분 및 1시간에 각각 정맥혈 15mL를 채혈하여 전해질(Na, K, Cl)의 변화 및 삼투압의 변화를 전해질 측정기 (EIT, USA)및 심투압측정기 (Fiske, USA)를 이용하여 각각 측정하였다.
데이터처리
- 각각의 측정항목에 대한 평균 및 표준편차를 산출하고, 매실음료의 장기간 섭취효과분석을 위해서 음료 유형 및 측정시기간의 변화에 대한 2-way repeated AN0VA 및 사후검증을 실시하였으며 이때 유의수준은 5%로 하였다.
성능/효과
- 각종 매실 음료의 암세포 증식 억제 효과는 SNU-16 세포주을 제외한 다른 암세포주에서는 관찰할 수 없었다. 20% 매실 추출물을 함유한 매실음료(D7)를 농축하여 농도별로 각종 암세포 주에 투여하고 MTT assay를 실시한 결과 Fig. 2에서와 같이 lOOOeig/mL 농도의 매실음료 D7이 SNU-16 세포주에 대해 유의적인 세포독성을 나타내었다. 대장암 세포주인 SNU-C2A에 대한 세포독성 효과는 Fig.
- 7과 같은 결과를 얻을 수 있었다. SNU-16 세포주의 경우 매실음료 D7 을 투여하여 6일간 배양시켰을 때 세포의 파괴가 일어남을 관찰할 수 있었고 대조군의 경우 정상적인 세포중식이 일어났다. Fibroblast의 경우 매실음료를 투여하고 6일간 배양한 후에도 아무런 형태학적 변화를 보이지 않아 매실음료가 정상세포에는 아무런 영향을 미치지 않음을 알 수 있었다.
- 1과 같은 결과를 얻을 수 있었다. SNU-16의 경우 20%의 매실 추출물을 함유한 매실음료의 경우 세포의 성장이 억제되었고 15% 매실 추출물을 함유한 음료의 경우는 약간의 억제 효과를 보였으나 다른 매실 음료와 비교했을 때 큰 차이는 없었다. 각종 매실 음료의 암세포 증식 억제 효과는 SNU-16 세포주을 제외한 다른 암세포주에서는 관찰할 수 없었다.
- 2에서와 같이 lOOOeig/mL 농도의 매실음료 D7이 SNU-16 세포주에 대해 유의적인 세포독성을 나타내었다. 대장암 세포주인 SNU-C2A에 대한 세포독성 효과는 Fig. 3과 같이 매실음료 D7의 농도를 중가시킬수록 세포수가 감소하였으나 대조군과 비교했을 때 유의적인 차이는 없었다. 간암세포주나 자궁암 세포주의 경우도 Fig.
- 그러나 보다 격렬한 장시간의 운동시 체내 전해질의 손실이 중가함으로 이의 추가공급이 요구되는데(15,16) Costillae 운동시 흘리는 땀의 성분분석에서 Na 및 C1의 함량이 가장 높기 때문에 이러한 성분에 대한 추가공급의 필요성을 강조한 바 있다. 본 연구에서도 1시간의 장시간 운동 시 수분손실이 현저해지면서 Na, K 및 Cl의 전해질농도가 안정시에 비해서 증가하는 것으로 나타났다.
- 수분을 비롯한 음료함유성분의 체내 섭취속도는 혈중 삼투압농도가 중요한 영향을 미치게 되는데 본 연구에서는 삼투압농도가 전반적으로 통계적 유의성은 없었으나 매실음료 섭취군이 높은 경향을 나타내었으므로 이에 대한 고려가 강조된다. 혈청 Na 및 K농도는 Table 3 및 Table 4에 나타난 바와 같이, 안정 시에 비해서 운동중에 유의하게 (P<0.05) 증가하였으며 음료유형간에는 유의한 차이가 없었다. 또한 혈청 C1 농도는 Table 5에서 나타난 바와 같이 안정시에 비해서 운동중에 유의하게 (P<0.
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