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제안 방법
- 즉, 균 배양액 10mL에 증류수. 40mL를 가하고 0.1% phenolphtalein 용액을 2방울 떨어뜨린 다음 0.1 N NaOH로 중화적정하고 소비된 NaOH 양을 젖산으로 환산하여 산생성량을 측정하였다.
- 5 ml의 BHI broth를 넣은 시험관에 20μL 첨가시 각각의 최종농도 (|ig/mL)가 되도록 조제한 황련추출물과 berberine, palmatine의 용해액 20pL를 각각 첨가한 다음, 121℃, 15분간 열처리를 하였다. 전배양한 균 8.
- S. mutans JC-2의 항균에 미치는 황련 물추출물과 메탄올 추출물의 억제효과를 평가하기 위해 BHI broth 5mL에 첨가했을 때 각각의 최종농도가 되도록 조제한 황련 추출물 20gL를 첨가하고 전배양액 10μL(8.0 ×105 cell)를 접종하여 24시간 배양하면서 경시적인 균의 생장상태를 측정한 생장곡선은 Fig. 1(A), (B)와 같다. S.
- 본 연구에서는 오랫동안 생약재로 사용되어오고 있는 황련의 추출물 및 그의 주요 활성성분으로 알려진 berberine과 palmatine을 사용하여 mutans streptococci 중에서도 치아우식증에 크게 관련이 있는 5. mutans^ 생장, 산생성, 균체부착 및 GTase 활성 둥의 억제에 대한 효과를 조사하였다.
- 0X"cell)를 접종하고 N2 기체로 다시 bubbling한 다음, 37℃에서 24시간 정치배양하였다. 경시적인 균의 생육도는 Miniphoto 518(Taitec, Japan)을 이용하여 660nm에서 O.D.를 측정하였다. 균의 생육여부가 관찰되지 않는 가장 낮은 농도를 최소저지농도(minimum inhibition concentration, MIC)로 하였다.
- 를 측정하였다. 균의 생육여부가 관찰되지 않는 가장 낮은 농도를 최소저지농도(minimum inhibition concentration, MIC)로 하였다.
- D를 측정하였다. 대조구의 경우 시료 대신에 멸균수를 첨가하였으며, O.D.를 측정하여 균체부착 저해율을 구하였다.
- 황련의 주요 활성성분인 berberine은 황련근경에 약 7-9% 함유되어 있는데"', 이러한 berberine의 용해도가 물보다 메탄올에 더 크기 때문에 메탄올 추출물에 더 많은 berberine이 용해되어져 높은 항균활성을 나타낸 것으로 생각된다. 따라서 황련의 주요 활성물질로 알려진 berberine과 palmatine의 MIC를 berberine chloride과 palmatine chloride를 사용하여 측정하였으며, 그 결과는 각각 Fig. 1(C), (D)에서와 같이 50μg/mL, llO^g/mL이었다. Berberine과 palmatine 모두 황련 추출물보다 높은 항균활성을 나타내었다.
- 14mL을 첨가하여 최종 부피를 1 mL가 되도록 조정하였다. 시험관을 30° 기울인 상태로 효소액을 37P에서 24시간 동안 반응시키고, vortex하여 하여 이ucan을 분산시킨 다음 550 run에서의 O.D. 를 측정 (Shimadzu UV1601PC, Japan)하였다. 대조구의 경우 시료 대신에 멸균수를 첨가하였으며, QD.
- mutans^]- 생성한 water-insoluble glucan에 의해 치면에 정착하는 것을 방지하는 것도 충치를 예방하는 방법중의 하나이다(23). 유도기를 지연시키나 24시간 후에는 대조구와 비슷한 흡광도를 나타내는 농도(생장 부분 저해농도, Table 1 참조)에서 각각의 시료가 S. mutans 균체 부착을 억제하는지를 확인하였다. 시료별 균체부착 저해율은 Table 3과 같다.
- 121℃, 15분간 열처리를 하였다. 전배양한 균 8.0 × 105 cell을 접종하고 N2 기체로 bubbling후 37℃에서 24시간 정치배양 하면서 경시적으로 660 nn에서의 O.D.를 측정하여 균의 생장상태를 측정하였다. 한편 시험균에 의해 형성되는 유기산의 생성량은 12시간과 24시간째에 산가적정을 실시하여 평가하였다.
- glucan을 분광광도법으로 측정하였다(12). 즉 시험관에 기 질용액 (sucrose 12.5 g, sodium azide 0.25 g을 1L의 lOmM sodium phosphate buffer(pH 6.8)에 용해시켜 121-C에서 15분간 멸균) 0.8mL, 조효소액 0.04 mL, 농도별 시료 0.02 mL, 멸균수 0.14mL을 첨가하여 최종 부피를 1 mL가 되도록 조정하였다. 시험관을 30° 기울인 상태로 효소액을 37P에서 24시간 동안 반응시키고, vortex하여 하여 이ucan을 분산시킨 다음 550 run에서의 O.
- 이용하여 측정하였다. 즉, BHI broth 4.5 mL, 10%(w/v) sucrose 0.5 mL를 함유한 시험관에 첨가시 각각의 최종농도가 되도록 조제한 황련 추출물, berberine, palmatine을 각각 20 gL 첨가하였다. 전배양한 균 8.
- 치면 세균막 형성저해제 즉, S. mutans^ GTUse 활성 저해제가 가장 유효한 충치 예방수단으로 인정되고(12)있으므로 균의 생장저해 효과를 나타낸 황련 추출물과 그의 활성물질이 GTase의 활성에 미치는 영향을 조사하였다. S.
- 를 측정하여 균의 생장상태를 측정하였다. 한편 시험균에 의해 형성되는 유기산의 생성량은 12시간과 24시간째에 산가적정을 실시하여 평가하였다. 즉, 균 배양액 10mL에 증류수.
- 황련 메탄올 추출물에 함유되어 있는 항균활성 물질의 열안정성을 조사하기 위하여 추출물을 121℃에서 15분간 열처리한 후 S. mutans JC-2의 생장에 미치는 영향을 조사하였다. 황련 메탄올 추출물은 열처리에 의해서도 S.
대상 데이터
- 4%이었다. Brain heart infusion(BHI) 은 Difco 사 제품을, berberine chloride, palmatine chloride는 Sigma사 제품을 사용하였다
- S. mutans JC-2 균주는 원광대학교 치과대학 미생물학 교실로부터 분양 받아 사용하였다. S.
- 본 실험에 사용된 황련은 전주시내 건재상에서 구입하였다. 분쇄한 황련 20 g에 증류수를 l:10(w/v)이 되도록 가하여 열탕 환류추출(100℃, 2 hr)하고 원심분리(4℃, 4000><&20min)한 후 상징액을 여과(Whatman No.
이론/모형
- 이 과정을 2회 반복하여 황산암모늄을 제거하였다 투석액은 다시 25, OOOXg로 30분간 원심분리하고 그의 상등액을 조효소액으로 사용하였다. 회수된 조효소액의 단백질 농도는 Lowry 등""의 방법을 이용하여 측정하였으며, 표준 단백질로는 bovine serum albumin을 사용하였다.
- GTase 효소원의 제조는 Namba 등의 방법(17)에 따라 실시하였다. 2L의 BHI broth에 전배양한 균 100mL을 접종하여 혐기적 조건하에서 16시간 정치배양한 후 12, OOOXg로 20분간 원심분리하에 상등액을 회수하였다.
- Glhso의 활성은 sucrose를 기질로 하여 생성된 불용성 glucan을 분광광도법으로 측정하였다(12). 즉 시험관에 기 질용액 (sucrose 12.
- 균체부착 억제효과는 Ooshima 둥(14)의 시험관 유리부착법을 이용하여 측정하였다. 즉, BHI broth 4.
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