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문제 정의
- 최근, 꾸지뽕나무의 뽕잎을 대상으로 항염증작용 및 항균작용,18,19) 마우스에서의 지질 과산화 억제작용20)과 꾸지뽕나무 잎 , 열매 , 줄기 및 뿌리의 MeOH추출물 EtOAc, CHCl3 및 BuOH 분획물이 흰쥐의 과산화지질 함량에 미치는 영향21) 등이 보고되고 있을 뿐 생리활성에 대한 체계적인 연구는 미비한 실정이다. 본 연구는 뽕나무의 생리활성 물질을 효과적으로 이용하기 위한 구체적인 연구로 뽕나무와 꾸지뽕나무 추출물이 천연 항산화제로의 이용 가능성을 검토하였다.
제안 방법
- 이때 총 폴리페놀 화합물은 tannic acid를 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 함량을 구하였다. Tannic acid를 이용한 표준 곡선은 tannic acid 1 g을 50% 메탄올용액 1 ml에 녹이고 최종농도가 0, 50, 100, 150, 200, 300 및 500μg/ml 용액이 되도록 취하여 위와 같은 방법으로 725 nm에서 흡광도를 측정하여 작성하였다.
- 67% TBA 1 ml를 가하여 혼합하고 끓는 물 속에서 30분간 가열하여 발색시켰다. 냉각 후 535nm에서 흡광도를 측정하였으며, 지질 과산화의 억제율은 대조군의 흡광도에 대한 저해율 (%)로 비교하였다.
- 뽕나무 및 꾸지뽕나무의 잎, 줄기 껍질을 음지에서 건조 시켜 잘게 분쇄한 후, 중량비로 10배 량의 증류수로 수욕상에서 3시간 추출을 2회 반복한 용액을 농축하여 -80℃에서 동결건조 한 것을 수용성 추출물로 하였다.
- 이들은 phenolic hydroxyl기를 가지기 때문에 단백질 및 기타 거대 분자들과 결합하는 성질을 가지며, 항산화 효과 등의 생리활성 기능도 가진다. 여기서는 tannic acid 표준곡선을 이용하여 뽕나무 잎, 줄기 껍질 및 꾸지뽕나무 잎, 줄기 껍질의 물추출물 중의 총 폴리페놀의 함량을 측정하였다(Table 1). 총 폴리페놀의 함량은 뽕나무 잎이 1.
- 2에 여과시켜 만들었다. 이 용액 5 ml 일정농도(0.05, 0.1, 0.5%)의 시료용액 1 ml를 혼합한 후 5분 간격으로 528nm에서 흡광도의 감소를 측정하였다.26)
- 1 ml를 혼합한 후 정확히 3분 후에 500nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 활성의 비교를 위하여 합성 항산화제인 BHT를 시료첨가량의 1/ 10을 사용하여 BHT 첨가구로 하였다.
- 2 ml를 가하여 40℃에서 incubation하면서 일정 간격으로 측정하였다. 측정방법은 혼합용액에서 0.1 ml를 취하여 test tube에 넣고 70% ethanol 3ml과 ammonium thiocyanate 용액 0.1 ml, ferrous chloride 용액 0.1 ml를 혼합한 후 정확히 3분 후에 500nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 활성의 비교를 위하여 합성 항산화제인 BHT를 시료첨가량의 1/ 10을 사용하여 BHT 첨가구로 하였다.
대상 데이터
- 뽕나무 잎, 줄기 껍질은 부산시 사하구 하단동 동아대학교 뒷산에서 자생한 것으로서 1999년 5월에 채취하여 사용하였으며, 꾸지뽕나무 잎, 줄기 껍질은 1999년 5월에 경남 김해시 생림면에서 야생으로 자생하는 나무에서 직접 채취하였다.
이론/모형
- 4. Antioxidative activity of water extract (6.0 m흥/mZ) of leaf and stem bark from Moms alba(M.) and Cudrania tricuspidata(C.) in the linoleic acid system that is measured by the TBARS method. BHT was added at the lev이 of 0.
- 항산화 활성은 Wong등의 방법22)에 따라 50 mM Tris-HCl buffer(pH 7.5) 1.5 ml에 각 시료 용액 0.2 ml(6.0mg/ml), 간 microsome 분획(1 ml중 1 mg의 단백질 함유) 0.1 ml, 0.1 mM ascorbate 0.1 ml 및 5 mM FeSO4 0.1 ml를 차례로 가하여 반응액을 잘 혼합한 후 37℃의 shaking water bath에서 1시간 incubation 시켜 과산화를 유도시켰다. 이때 대조구는 시료를 첨가시키지 않고 위에서와 동일한 방법으로 실시하였다.
성능/효과
- 1과 같다. 0.05-0.5% 물추출물 첨가구는 농도 증가에 따라 수소공여능도 증가됨을 알 수 있었다. 시료에 따른 수소공여능은 0.
- 3과 같다. Microsome 항산화 실험계를 이용한 실험의 결과와 마찬가지로 꾸지뽕나무 줄기 껍질의 추출물에서 높은 항산화 활성을 나타내었다. 꾸지뽕나무 줄기 껍질의 물추출물은 반응 8일째까지 대조 구에 비해 매우 강한 항산화 활성을 보였으며, 뽕나무 잎물추출물에서도 반응 6일째까지 높은 항산화 활성을 보였다.
- Microsome 항산화 실험계를 이용한 실험의 결과와 마찬가지로 꾸지뽕나무 줄기 껍질의 추출물에서 높은 항산화 활성을 나타내었다. 꾸지뽕나무 줄기 껍질의 물추출물은 반응 8일째까지 대조 구에 비해 매우 강한 항산화 활성을 보였으며, 뽕나무 잎물추출물에서도 반응 6일째까지 높은 항산화 활성을 보였다. 그러나 뽕나무 줄기 껍질과 꾸지뽕나무 잎 물추출물에서는 비교적 낮은 항산화 활성을 나타내었다.
- 4와 같다. 반응 4일째 까지의 활성능력은 꾸지뽕나무 줄기 껍질>뽕나무 잎>뽕나무 줄기 껍질>꾸지뽕나무 잎 순이었으며, 반응 7일째에는 뽕나무 줄기 껍질이 다른 실험군들보다 좋은 활성을 나타내었다. 이들에 비해 대조군으로 사용된 BHH는 매우 강한 항산화 작용을 보였다.
- 5% 물추출물 첨가구는 농도 증가에 따라 수소공여능도 증가됨을 알 수 있었다. 시료에 따른 수소공여능은 0.05%에서 뽕나무 잎 >꾸지뽕나무 잎>뽕나무 줄기 껍질>꾸지뽕나무 줄기 껍질 순으로 대체로 잎 추출물에서 수소공여 작용이 강한 것으로 나타났다.
- 2와 같다. 지질 과산화 억제 정도는 꾸지뽕나무 줄기 껍질(53%)>나무 줄기 껍질 (43%)>꾸지뽕나무 잎(38%)>뽕나무 잎(34%) 순으로 나타나 줄기 껍질 추출물에서 강한 항산화 활성을 나타내었다. 박 등21) 도 꾸지뽕나무 잎, 줄기의 MeOH 추출물 및 MeOH 추출물 분획물이 지질과산화물의 생성을 억제 시켰다고 보고하였다.
- 여기서는 tannic acid 표준곡선을 이용하여 뽕나무 잎, 줄기 껍질 및 꾸지뽕나무 잎, 줄기 껍질의 물추출물 중의 총 폴리페놀의 함량을 측정하였다(Table 1). 총 폴리페놀의 함량은 뽕나무 잎이 1.32%, 뽕나무 줄기가 1.28%, 꾸지뽕나무 잎이 1.34%, 꾸지뽕나무 줄기는 1.30%로 거의 비슷한 경향을 나타내었다. 김 등8)은 茶類소재 식물류의 폴리페놀은 감잎, 녹차잎, 홍차잎, 우롱차잎 등에 각각 2.
후속연구
- 최 등33) 및 장 등34)은 식품으로 사용되어 그 안전성이 확인된 각종 식물 및 약재를 ethanol과 물로 추출하여 항산화력을 검색한 결과, ethanol 주출물이 물주줄물 보다 항산화 효과가 강하고 추출수율도 높았다고 하였다. 따라서, 뽕나무 잎, 줄기 껍질 및 꾸지뽕나무 잎, 줄기 껍질을 각종 유기용매로 추출한 분획으로 항산화 실험을 한다면 보다 강력한 항산화 물질을 분리 할 수 있을 것으로 생각된다.
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