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문제 정의
- 2,14) 그러나, 이러한 감자의 생리활성 효과가 페놀성 화합물 중의 주요구성 성분인 클로로겐산에 기인하고 있는지에 대해서는 아직 밝혀진 바 없다. 따라서 본 실험에서는 페놀성 화합물의한 종류로서 감자의 주성분인 클로로겐산을 콜레스테롤 식이에 의해 고콜레스테롤혈증을 유발시킨 흰쥐에 투여하여, 간장 및 혈청 지질 농도, 혈당치 및 뇨 단백질 농도에 미치는 영향에 대하여 검토 하였다.
제안 방법
- 혈액은 약 30분간 실온에서 방치한 후 3,000 rpm에서 15분간 윈심분리하여 혈청을 분리하여 지질분석에 사용하였다. 각 장기는 적출 한 후 냉각의 생리식염수로 충분히 세척하고 물기를 제거한 다음 장기 무게를 측정하였다.
- 실험동물은 각 군마다 6마리씩 나누고, 식이와 물을 2주일간 자유 섭취(ad libitum) 시켰다. 사육 기간 중 식이 섭취량은 매일 일정한 시간에 측정하고, 체중은 이틀에 한번씩 측정하였다.
- 실험 최종일 12시간 절식시킨 후 에테르로 가볍게 마취시켜 복부 대정맥으로부터 채혈하여 혈액을 얻었다. 혈액은 약 30분간 실온에서 방치한 후 3,000 rpm에서 15분간 윈심분리하여 혈청을 분리하여 지질분석에 사용하였다.
- 실험기간의 1 주일째 및 최종 전일의 뇨를 채집하여 단백질량은 BCA protein assay kit(Pierce, Illinois, U.S.A.)를 이용하여 Microplate reader(Model 1550, Bio-Rad Co., Tbkyo, Japan)의 570nm에서 흡광도를 측정하였다.
- (Osaka, Japan)로부터 구입하였다. 실험동물은 각 군마다 6마리씩 나누고, 식이와 물을 2주일간 자유 섭취(ad libitum) 시켰다. 사육 기간 중 식이 섭취량은 매일 일정한 시간에 측정하고, 체중은 이틀에 한번씩 측정하였다.
- 사육실 온도 22±2℃, 습도 50 ±5%, 명암.주기 12시간(명주기: 07 : 00- 19:00)이 자동 설정된 동물 사육실에서 스테인레스 케이지에서 2주간 개별 사육하였다. 본 실험의 식이 조성은 Table 1과 같으며, 실험군은 정상 식이군(CONT), 0.
대상 데이터
- 2% 클로로겐산 병합투여군(CHOL+CA)으로 나누었으며, 식이 제조에 사용한 클로로겐산은 Wako Junyaku Co.(Osaka, Japan)로부터 구입하였다. 실험동물은 각 군마다 6마리씩 나누고, 식이와 물을 2주일간 자유 섭취(ad libitum) 시켰다.
- 실험동물은 4주령 (90 g 전후)의 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐(Kyudo Experimental Animal Co. Tbsu, Japan)를 구입하여 정상 식이로 1주일 정도 적응시킨 후 사용하였다. 사육실 온도 22±2℃, 습도 50 ±5%, 명암.
데이터처리
- 실험으로부터 얻어진 결과치는 one-way ANOVA에 의한 평균치와 표준오차(mean±S.E.)로 표시하였으며, 각 실험 군간의 유의성 검정은 Duncan's multiple range test로 하였다.19)
이론/모형
- 냉동고에 보관하면서 지질분석에 이용하였다. 간장 중성지질 농도는 Fletcher의 방법16)에 준하여 3mM 아세틸아세톤 및 3mM 과요드산 나트륨 액으로 50P에서 발색시켜 405 nm에서 흡광도를 측정하여 정량하였다. 인지질 농도는 Bartlett의 방법17)으로 70% 과염소산으로 가열 분해시킨 후 5% 몰리브덴산 암모늄과 0.
- 간장 총 지질은 Folch 등의 방법 15)을 이용하여 간장 1g을 chloroform: methanol의 2:l(v/v) 혼합액으로 지질을 추출하여 -80℃의 냉동고에 보관하면서 지질분석에 이용하였다. 간장 중성지질 농도는 Fletcher의 방법16)에 준하여 3mM 아세틸아세톤 및 3mM 과요드산 나트륨 액으로 50P에서 발색시켜 405 nm에서 흡광도를 측정하여 정량하였다.
- 간장 중성지질 농도는 Fletcher의 방법16)에 준하여 3mM 아세틸아세톤 및 3mM 과요드산 나트륨 액으로 50P에서 발색시켜 405 nm에서 흡광도를 측정하여 정량하였다. 인지질 농도는 Bartlett의 방법17)으로 70% 과염소산으로 가열 분해시킨 후 5% 몰리브덴산 암모늄과 0.5% 아미돌 시약을 가하여 끊는 물에서 반응시켜 820nm에서 흡광도를 측정하여 정량하였다. 총 콜레스테롤 농도는 Sperry 및 Webb의 방법18)에 따라 digitonin으로 침전시킨 콜레스테롤을 dry oven에서 건조한 후 빙초산으로 용해하여 무수초산 : 진한황산의 20:1(v/V) 혼합액을 가하여 25℃수조상에서 가온 발색시켜 620nni에서 흡광도를 측정하여 정량 하였다.
- 5% 아미돌 시약을 가하여 끊는 물에서 반응시켜 820nm에서 흡광도를 측정하여 정량하였다. 총 콜레스테롤 농도는 Sperry 및 Webb의 방법18)에 따라 digitonin으로 침전시킨 콜레스테롤을 dry oven에서 건조한 후 빙초산으로 용해하여 무수초산 : 진한황산의 20:1(v/V) 혼합액을 가하여 25℃수조상에서 가온 발색시켜 620nni에서 흡광도를 측정하여 정량 하였다.
- , Tokyo, Japan)의 kit를 이용한 ACS-ACOD법에 의하여 505nm에서 측정하였다. 혈당은 Glucose oxidase 법에 따라 조제된 kit(Wako Junyaku, Osaka, Japan)를 이용한 효소법으로 500nm에서 측정하였다.
- 측정하였다. 혈청 triglyceride는 Triglyceride E-test wako(Wako Junyaku, Osaka, Japan)를 이용하여 GPO-DAOS법에 의하여 600nm에서 측정하였고, 혈청 인지질은 PhosphoHpid C-test wako(Wako Junyaku, Osaka, Japan)를 이용한 Choline oxidase-DAOS법에 의한 효소법으로 600nm에서 측정하였다. 혈청 유리지방산은 NEFA zaimu-S (Eiken Ind.
- 혈청 triglyceride는 Triglyceride E-test wako(Wako Junyaku, Osaka, Japan)를 이용하여 GPO-DAOS법에 의하여 600nm에서 측정하였고, 혈청 인지질은 PhosphoHpid C-test wako(Wako Junyaku, Osaka, Japan)를 이용한 Choline oxidase-DAOS법에 의한 효소법으로 600nm에서 측정하였다. 혈청 유리지방산은 NEFA zaimu-S (Eiken Ind., Tokyo, Japan)의 kit를 이용한 ACS-ACOD법에 의하여 505nm에서 측정하였다. 혈당은 Glucose oxidase 법에 따라 조제된 kit(Wako Junyaku, Osaka, Japan)를 이용한 효소법으로 500nm에서 측정하였다.
- 혈청 총 콜레스테롤은 Cholesterol C-test wako(Wako Junyaku, Osaka, Japan)를 이용하여 cholesterol oxidase-DAOS 법으로 600nm에서 측정하였고, 혈청 HDL-cholesterole HDL-cholesterol E-test wako(Wako Junyaku, Osaka, Japan) 의 효소법에 의한 kit(Wako Junyaku, Osaka, Japan)를 사용하여 600 nm에서 측정하였다. 혈청 triglyceride는 Triglyceride E-test wako(Wako Junyaku, Osaka, Japan)를 이용하여 GPO-DAOS법에 의하여 600nm에서 측정하였고, 혈청 인지질은 PhosphoHpid C-test wako(Wako Junyaku, Osaka, Japan)를 이용한 Choline oxidase-DAOS법에 의한 효소법으로 600nm에서 측정하였다.
성능/효과
- 8% 수준까지는 독성을 나타내지 않으며,20) 감귤류의 플라보노이드인 hesperidine 10% 수준까지도 아무런 영향을 미치지 않는 것으로 알려져 있다.21) 본 실험에서 클로로겐산 0.2% 수준으로 식이에 첨가하여 2주간 투여한 결과 체중 증가량 및 식이 섭취량에서 실험군간에 차이가 없는 것으로 나타났다(Table 2). 간장 무게는 정상 식이군에 비해 콜레스테롤 식이군과 클로로겐산 병합투여군에서 유의적으로 증가하였다.
- 4-6)혈청 중성지질 농도 및 인지질 농도는 감자 클로로겐산 첨가에 의한 영향은 약한 것으로 나타나, 다른 페놀성 화합물에 의한 이전의 결과와 비슷한 경향을 나타내었다.7) 혈청 유리 지방산 농도는 정상 식이군 및 콜레스테롤 식이군에 비해 클로로겐산 병합투여군에서 약 21% 정도 저하하였다. 따라서, 클로로겐산은 혈중 총 콜레스테롤 수준 및 동맥경화 지수를 낮춤으로써 동맥경화와 관상동맥 심질환을 예방할 수 있을 것으로 사료된다.
- 2% 수준으로 식이에 첨가하여 2주간 투여한 결과 체중 증가량 및 식이 섭취량에서 실험군간에 차이가 없는 것으로 나타났다(Table 2). 간장 무게는 정상 식이군에 비해 콜레스테롤 식이군과 클로로겐산 병합투여군에서 유의적으로 증가하였다. 비장 무게는 정상 식이군에 비해 콜레스테롤 식이군에서 증가경향을 보였으며, 클로로겐산 병합 투여군에서는 유의적으로 증가하였다.
- 23꽈) 또한, 돼지감자의 페놀성 화합물 추출물이 흰쥐의 간장 초대배양 세포에서 콜레스테롤 분획에의 [14C] acetate 표적량을 현저하게 감소시킴으로서 콜레스테롤 생합성을 억제시키는 것으로 나타났으며,10) 이러한 돼지감자의 주요 성분으로 chlorogenic acid, caffeic acid 등이 확인되었다. 또한, 동맥경화 지수는 콜레스테롤 식이군에 비해 클로로겐산 병합투여군에서 약 36% 감소되었다. 최근, 역학적인 연구조사에서 야채 및 과일 등의 폴리페놀 화합물의 섭취량과 심근경색의 발증율 및 허혈성 심질환에 의한 사망률과의 사이에 역상관 관계를 나타내는 많은 연구 결과가 보고되어있다.
- 간장 무게는 정상 식이군에 비해 콜레스테롤 식이군과 클로로겐산 병합투여군에서 유의적으로 증가하였다. 비장 무게는 정상 식이군에 비해 콜레스테롤 식이군에서 증가경향을 보였으며, 클로로겐산 병합 투여군에서는 유의적으로 증가하였다.
- 인지질 농도는 정상 식이군에 비해 콜레스테롤 식이군에서 약간 낮게 나타났으나, 클로로겐산 병합투여군에서 유의적인 차이는 없었다. 이러한 결과로 보아 콜레스테롤 식이에 클로로겐산를 첨가한 본 실험의 식이 조건에서는 간장의 지질 농도에 미치는 영향은 미약한 것으로 시사되었다.
- 그러나, 혈청 중성지질 농도는 콜레스테롤 식이군과 클로로겐산 병합투여군 간의 차이는 없었다. 이러한 결과로 보아 클로로겐산이 콜레스테롤 섭취에 의해 유도된 고콜레스테롤혈증에서 콜레스테롤의 상승을 억제시키는 것으로 사료된다. 페놀성 화합물은 혈청 총 콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤 농도를 저하시켜 고지혈증 및 심장 순환계 질환을 예방 및 개선시키는 것으로 알려져 있다.
- 간장의 지질농도 변화는 Table 4와 같다. 정상 식이군에 비해 콜레스테롤 식이군에서 중성지질 및 총 콜레스테롤 농도는 유의적으로 증가하였다. 이러한 결과는 고지방식이 및 고콜레스테롤 식이의 연구 결과에서 보여주는 간장지방 침착 현상과 유사하다.
- 혈청 지질농도의 변화는 Table 3과 같다. 콜레스테롤 식이군에서는 정상 식이군에 비하여 혈청 중성지질 및 HDL-콜레스테롤 농도가 유의적으로 감소하였으며, 혈청 총 콜레스테롤 농도는 유의적으로 증가하였다. 한편, 콜레스테롤 식이군에서 혈청 총 콜레스테롤 농도의 증가는 클로로겐산의 병합투여에 의해서 현저하게 감소되었고, HDL-콜레스테롤 농도는 통계적 유의성은 없지만 증가하는 경향을 나타내었다.
- 콜레스테롤 식이군에서는 정상 식이군에 비하여 혈청 중성지질 및 HDL-콜레스테롤 농도가 유의적으로 감소하였으며, 혈청 총 콜레스테롤 농도는 유의적으로 증가하였다. 한편, 콜레스테롤 식이군에서 혈청 총 콜레스테롤 농도의 증가는 클로로겐산의 병합투여에 의해서 현저하게 감소되었고, HDL-콜레스테롤 농도는 통계적 유의성은 없지만 증가하는 경향을 나타내었다. 그러나, 혈청 중성지질 농도는 콜레스테롤 식이군과 클로로겐산 병합투여군 간의 차이는 없었다.
후속연구
- 이것으로 보아 한방 등의 생약 사용에서 종종 나타나고 있는 급성 신염 등의 부작용이 이러한 성분에 의해 나타날 수 있다는 사실을 고려해 볼 수 있다.30,21) 따라서, 이들 작용에 대한 정확한 기작에 관해서 앞으로 보다 자세한 연구가 이루어져야 할 것으로 사료된다.
- 7) 혈청 유리 지방산 농도는 정상 식이군 및 콜레스테롤 식이군에 비해 클로로겐산 병합투여군에서 약 21% 정도 저하하였다. 따라서, 클로로겐산은 혈중 총 콜레스테롤 수준 및 동맥경화 지수를 낮춤으로써 동맥경화와 관상동맥 심질환을 예방할 수 있을 것으로 사료된다.
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