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문제 정의
- 본 연구는 남부지방의 잎들깨 재배지에서 잎들께의 생육 저하 및 고사의 원인이 되는 뿌리썩이선충(Pratylenchus spp.)을 방제하기 위해서 3종의 선충포식성 곰팡이, A oligospora, A. dactyloides와 A. coiioides를 잎들깨 재배지 토양에서 분리하였으며, 포장시험을 통하여 생물학적 방제제로서 그 활용 가능성을 검정화있다.
제안 방법
- 005% acid-fuchsin, 20% liquid phenol, 18% lactic acid, 35% glycerin) 염색법으로 확인하였다[5]. Acid fuchsin-lactophenol 50 mF을 비듬점까지 가열한 후, 잎들깨 뿌리를 1분간 침지하여 뿌리를 염색하였다, 염색된 뿌리는 lactophenol(21.5% liquid phenol, 19% lactic acid, 36.6%이ycwin) 용액에 3일간 침지시켜 탈색하였다.
- 분리된 곰팡이의 형태적 특성 관찰은 김 등[9]이 보고한 방법에 준하여 실시하였다. Water agar(2%)> 직경 9 cm petri dish에 부어 굳힌 후, 미리 증식시킨 뿌리썩이선충을 약 100마리씩 접종하였으며, 곰팡이를 그 중앙에 접종하였다. 접종 7일 후 해부현미경으로 선충 포식기관(Trapping organ)의 형태 및 크기, 분생포자의 형태, 크기, 가지의 유무, 포자마디(node)의 존재 여부등 그 형태적 특성 관찰을 통화여 선중포식성 곰팡이를 동정하였다[9].
- 선충 방제효과를 검정하였다. 각 곰팡이 처리구 및 대조구는 10 ㎡으로 각각 3구역씩 설정한 후, 선충 포식성 곰팡이를 처리하기 전에 토양내 선충의 평균밀도를 조사하였다. 이 후, 고체배지 (pellet)에 배양 중식한 선충포식성 곰팡이를 각 처리구당 5 Kg씩 살포한 후, 40일 경과후 각 처리구 및 디조구에서 선충밀도를 조사 비교하였다.
- 뿌리썩이선충의 감염밀도가 높은 부산 대저동 잎들깨 재배지를 선정하여 고체 배지에 배양된 선충포식성 곰팡이의 선충 방제효과를 검정하였다. 각 곰팡이 처리구 및 대조구는 10 ㎡으로 각각 3구역씩 설정한 후, 선충 포식성 곰팡이를 처리하기 전에 토양내 선충의 평균밀도를 조사하였다.
- 각 곰팡이 처리구 및 대조구는 10 ㎡으로 각각 3구역씩 설정한 후, 선충 포식성 곰팡이를 처리하기 전에 토양내 선충의 평균밀도를 조사하였다. 이 후, 고체배지 (pellet)에 배양 중식한 선충포식성 곰팡이를 각 처리구당 5 Kg씩 살포한 후, 40일 경과후 각 처리구 및 디조구에서 선충밀도를 조사 비교하였다.
- Water agar(2%)> 직경 9 cm petri dish에 부어 굳힌 후, 미리 증식시킨 뿌리썩이선충을 약 100마리씩 접종하였으며, 곰팡이를 그 중앙에 접종하였다. 접종 7일 후 해부현미경으로 선충 포식기관(Trapping organ)의 형태 및 크기, 분생포자의 형태, 크기, 가지의 유무, 포자마디(node)의 존재 여부등 그 형태적 특성 관찰을 통화여 선중포식성 곰팡이를 동정하였다[9]. 동정된 선충포식성 곰팡이는 고체 배지인 pellet에서 대향 배양하였디-.
- 토양으로부터 선충포식성 곰팡이의 분리는 체취한 토양을 0.75% water agar 배지에 두는 방법으로 실시하였으며[2], 순수 분리된 곰팡이는 corn meal agarfDifco; CMA)에 접종하여 25℃에서 배양하였다. 분리된 곰팡이의 형태적 특성 관찰은 김 등[9]이 보고한 방법에 준하여 실시하였다.
대상 데이터
- 뿌리썩이선충의 생물적 방제제로 사용된 3종의 선충포식성 곰팡이, Arthrobotnis oligospora, A. conoides 와 A. dacty-loides는 1998년 8〜9월에 부산 대저동 잎들깨 재배지 토양에서분리하였다(Table 1). A.
- 뿌리에서 분리하였다. 잎들깨 뿌리는 부산 대저동 잎들깨 재배지에서 채취하였으며, 이후 선충 분리전 까지 4℃의 냉장고에 보관하였다. 잎들깨 뿌리를 증류수로 3회 세척한 후, 칼로 잘게 절단하여 증류수 100 m에 침지시켜 25°C, 100 rpm에서 24시간 동안 배양하였다, 이후 뿌리를 제거하고 200 mash를 이용하여 선충을 분리하였다.
이론/모형
- 75% water agar 배지에 두는 방법으로 실시하였으며[2], 순수 분리된 곰팡이는 corn meal agarfDifco; CMA)에 접종하여 25℃에서 배양하였다. 분리된 곰팡이의 형태적 특성 관찰은 김 등[9]이 보고한 방법에 준하여 실시하였다. Water agar(2%)> 직경 9 cm petri dish에 부어 굳힌 후, 미리 증식시킨 뿌리썩이선충을 약 100마리씩 접종하였으며, 곰팡이를 그 중앙에 접종하였다.
- 잎들깨 뿌리를 증류수로 3회 세척한 후, 칼로 잘게 절단하여 증류수 100 m에 침지시켜 25°C, 100 rpm에서 24시간 동안 배양하였다, 이후 뿌리를 제거하고 200 mash를 이용하여 선충을 분리하였다. 분리된 뿌리씩이선충은 carrot disc을 이용한 뿌리쌕이선충 배양 방법에 준하여 배양하였다[12]. 분리된 뿌리썩이선충을 1% streptomysin sulfate, 0.
- 뿌리썩이선충(root-lesion nematode)의 분리 및 배먐뿌리썩 이선충은 Barker의 진동법[1]에 준하여 고사한 잎들깨 뿌리에서 분리하였다. 잎들깨 뿌리는 부산 대저동 잎들깨 재배지에서 채취하였으며, 이후 선충 분리전 까지 4℃의 냉장고에 보관하였다.
- 01% chlorhexidine용액에 24시간 동안 침지하여 표면을 소독한 후, 화임 살균된 carrot disc에 접종하여 25℃ 항온기에 2개월간 배양하였다. 잎들깨 뿌리의 cortex에 침입한 뿌리썩이선충은 acid fuchsin- lactophenol(0.005% acid-fuchsin, 20% liquid phenol, 18% lactic acid, 35% glycerin) 염색법으로 확인하였다[5]. Acid fuchsin-lactophenol 50 mF을 비듬점까지 가열한 후, 잎들깨 뿌리를 1분간 침지하여 뿌리를 염색하였다, 염색된 뿌리는 lactophenol(21.
성능/효과
- dactyloides의 성장 속도는 다른 포식성 곰팡이에 비하여 매우 느린 것으로 알려져 있다[9]. 3종와 선충포식성 곰팡이 pellet 처리에 의한 식물 기생성 선충 및 뿌리썩이선중의 밀도는 대조구와 비교했을 때 상당한 차이를 나타냈었다(Fig. 3). 곰팡이 제제 처리전 토양10g 당 식물기생성 선충의 밀도는 대조구에서 22.
- 3A). 결론적으로 식물 기생성 선중의 밀도는 대조구 및 A. oligospora와 A. conoides 곰팡이 게제 처리구에서 각각 75, 8.4, 10마리가 즘가한 반면, A. dactyloides 처리구에서는 18.8마리가 감소하였다, 뿌리써이선충의 밀도는 처리전 대조구, A. oligospora, A. conoides와 A dactyloides 처리구에서 각각 7.2, 12.4, 16.4와 22.8마리로 조사되었고, 처리 40일 경과 후에는 대조구에서 31.2 마리, A. oligospora, A. conoides와 A. dactyloides 처리구에서 각각 9.6, 19.2, 12마리로 조사되었다(Fig 3B). 즉, A.
- 3). 곰팡이 제제 처리전 토양10g 당 식물기생성 선충의 밀도는 대조구에서 22.6마리, A. oligospora 처리구에서는 37.2 마리, A. conoides 처리구에서는 42.8 마리, A. dactyloides에서는 54.8 마리로 각각 조사되었으며, 처리 40일 경과후 토양 10g 당 식물기생성 선충의 밀도는 대조구에서 97.6마리, A. oligospora 처리구에서 45.6마리, A. conoiiks 처리구에서는 52.8마리, A.dactyloides 에서는 36마리로 조사되었다(Fig. 3A). 결론적으로 식물 기생성 선중의 밀도는 대조구 및 A.
- 부산 대저동 잎들개 재배지에서 채취한 잎 들깨 뿌리 및 토양을 분석한 결과, 상당수의 뿌리썩이선충이 토양 및 뿌리에 기생하고 있는 것을 확인하였다(Fig 1). 잎들깨 재배지에서 확인된 뿌리썩이선중은 다년간 연작재배로 인하여 그밀도가 증가하였으며, 생육저해 및 식물 고사등 이들 선충에 의한 피해가 매우 큰 것으로 생각된다 뿌리썩이선충 {Pratylencus spp.
- 2B), 죽은 선충 주위에는 많은 분생호자병을 형성하였는데 가지는 형성하지 않고 포자 마디(node)를 형성하였다. 분생포자의 하단부는 A. couoides 와A.dachyloides에 비해 매우 굵고 튼튼하였다. 포자 마디에 약 10〜15개의 분생포자가 둥글게 붙어 있었다.
- 이상의 결과에 의하면 재배지 토양에 서식하고 있는 식물 기생성 선충 및 뿌리썩이선충의 밀도는 대조구에서 약 3.5배 증가한 반면, A. oligospora와 A. conoides 처리시 선충의 밀도는 거의 변화 없이 일정한 밀도를 유지하였으며, 특히 A. dactyloides 처리구에서는 식물기생성 선충의 밀도가 약 65% 감소하였고, 뿌리씨 이 선충은 약 53% 감소하였다. 이는 선충포식성 곰팡이에 의해 토양내 선충의 밀도가 일정하게 유지되었으며 특히 A.
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