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문제 정의
- 이에 본인 등은 식물자원으로 풍부하게 존재하고 있는환삼덩 굴을 메탄올로 추출하고 메 탄 올 추출물을 각종 畐 미]로 분획하여 활성산소에 대한 소거활성을 측정하였으며, 소거활성이 우수하게 나타난 에칠아세테이트 분획으로부터 활성산소 소거 활성이 강한 luteolin-7-O-U-D- gkicoside-> 분리하고, 그 화학적 구조를 동정하였기에 보고하는 바이다.
제안 방법
- spectrum shift를 관찰하기 위하여 NaOMc. NaOAc, NaOAc/H定O3, AlCh, AlCh/HCl 용액내에서 λ max를 측정하였다. Mass spectrum은 LC-MS(VG platform, Fisions Co.
- 분획하고. 감밥농축하여 활성을 측정하였다. 활성산소 소거능이 우수하게 나타난 EtOAc 분획은 Am况rhle XAD-2 column(5x45 cm)에 충진하고 water, 50% Me OH, MeOH, acetone 순으로 용출하였다.
- 7%, 5 pg/mL의 농도에서 892%의 소거할 성을 나타내었으나, a- locopherol은 거 의 활성을 나타내지 않았다 Superoxide rascal 소거작용이 어떤 물질에 의하여 반음계 자체가 억세 될 경우, 즉 xanthine oxidase으〕 홭성읕 억제할 경우 그 룰짐의 radical 소거 능이 실제보다 높은 활성을 나타내기 된다. 그러므로 ]uleobn-7-O-6-D-glucoside을 sup eroxide radical 소거 활성 측정에 실험한 농도로 첨가하여 xanthine oxidase 저 해 활성을 측정한 결괴-, xanthine oxidase 저해활성을 나타내지 않았디-(결과 미표시). 따라서 luteolin-7-O-P-D-glucoside-^l superwde radical 소거 활성 은 xanLhinc oxidase 저 해에 의 한 활성 이 아니 라, radical 소거작욤에 의해 나타나는 활성임을 알 수 있었다.
- 용매는 0.1%TFA에서 MeOH까지 6。분 동안 gradient하면서 UV detector 365 nm에서 분리되는 성분을 분 취하여여, 분석 욤 columndi-Bondapak C%)으로 단일성분으로 분리되는 것을 확인한 후 구조분석을 실시 하옜다
- Bruker Co, Swiss)은 내부표준물질은 를 사용화였고. 용매는 DMSO-击를 사욤하였다.
- MeOH fract血!을 분취 용 義LC를 사용하여 주요 성 분으로 주정되는 1종의 성분을 분 취하였다. 분 취한 성분은 분석용 column으로 정제도를 확인한 결과, 순수하게 분리된 것으로 판단되어 구조분석을 실시하였다.
- 천연 식물자원으로 풍부하게 존재하고 있는 환삼딩굴 {Humuius jap아& 끼蜀의 이용성 을 검토하기 위하여 , 환삼덩 굴의 묭배 분획별 활성 산소 소거 한성을 측정하고, 활성산소 소거작용이 강하게 나타난 EtOAc 분획으로부터 Amberlite XAD-2 column chroma比graphy오* preparative H邛LC를 통하여 활성 성분을 분리하였다. MeOH 추출물을 용매의 극성에 따라 계통 분획한 후 hydroxyl radical에 대한 소거 활성을 측정한 결고" ElOAc분획의 활성이 가장 우수하였다.
- 활성산소 소거작용이 가장 높게 나타난 EtOAc 분획으로 부터 활성 성분을 분리하기 위하여 Amberlite XAD-2 column chromatography를 실시하였다. EtOAc 분획 1, 000 mg을 Amberlite XA-2cohunn 에에 hading하고 용매의 비극 성도를 높이면서 솸■출하여 water fraction 111 mg, 50% McOH fraction 473 mg, MeOH fraction 149 mg, acetone fraction 31 mg을 얻 었 다.
대상 데이터
- 환삼덩굴은 1997년 7월 경북 군위군 부계면에서 채취하여 음건한 후 분쇄하여 실험재료로 사용하였다.
데이터처리
- 1종의 성분을 분 취하였다. 분 취한 성분은 분석용 column으로 정제도를 확인한 결과, 순수하게 분리된 것으로 판단되어 구조분석을 실시하였다.
이론/모형
- 110 등(16)의 방법을 다소 변형하이 xanthine-xanthine oxidase cytochrome c 환원법으로 측정하였다. UV cell 애 시료 0.
성능/효과
- Hydrogen peroxide 소거 활성을 측정한 결과에서도 50 典/mL의 농도에서 62.4%, EOllg/mL의 농도에서 93.9% 의 소거 활성을 나타내어 a-tocophcrol보다 약간 높은 활성을 보여주었디-.
- Hydroxyl radical 소거 활성을 2-deoxyribose oxidation method에 의 하여 측정한 결괴-, luteolin-7-O-p-D-glu- coside는 0.1 jig/mL의 농도에서 77.5%, I lig/mL의 농도에서 99.1% radical 소거 활성을 나타내어 a-tocapheral 보다 활성이 우수화였디-.
- Superoxide radical 소거 활성을 반응익 내에 0.5 Ug/mL 오辛 5 pg/rnL의 농도로 가하여 xantliine-xanthine oxidase cytochrome c 환원범 에 의하여 측정한 결과, luteolin-7- O-6-D-glucosidc는 05 卩g/mL의 농도에서 47.7%, 5 pg/mL의 농도에서 892%의 소거할 성을 나타내었으나, a- locopherol은 거 의 활성을 나타내지 않았다 Superoxide rascal 소거작용이 어떤 물질에 의하여 반음계 자체가 억세 될 경우, 즉 xanthine oxidase으〕 홭성읕 억제할 경우 그 룰짐의 radical 소거 능이 실제보다 높은 활성을 나타내기 된다. 그러므로 ]uleobn-7-O-6-D-glucoside을 sup eroxide radical 소거 활성 측정에 실험한 농도로 첨가하여 xanthine oxidase 저 해 활성을 측정한 결괴-, xanthine oxidase 저해활성을 나타내지 않았디-(결과 미표시).
- 그러므로 ]uleobn-7-O-6-D-glucoside을 sup eroxide radical 소거 활성 측정에 실험한 농도로 첨가하여 xanthine oxidase 저 해 활성을 측정한 결괴-, xanthine oxidase 저해활성을 나타내지 않았디-(결과 미표시). 따라서 luteolin-7-O-P-D-glucoside-^l superwde radical 소거 활성 은 xanLhinc oxidase 저 해에 의 한 활성 이 아니 라, radical 소거작욤에 의해 나타나는 활성임을 알 수 있었다.
- 따라서 환삼딩굴의 EtOAc 분획과 BuOH 분획에 hy-droxyl radical에 데 하여 강한 소거 작용을 나타내 는 물질 미 존재함을 알 수 있었다.
- 78 ppm 고자장으로 이 동되 어 0-昌lycosylation되 었음을 알 수 있었고, 또한 담의 이이 d 9989에서 나타나 。-glycoside의 CT signal이 100 ppm 주위에 나타난다는 문헌(21)과 일치하므로. 이상의 결과를 종합하여 분리한 성분을 lutcolm-7-O-p-D-glucoside^ 동정하였다.
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