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문제 정의
- 이 것은 FAP활성 이 TG 합성 에 관련된 다른 어 떤 효소 활성 의 변화보다도 민감하게 변화하기 때문이 며 , 혈청 TG 농도의 변화에 보다 좋은 지표로 이용되고 있기 때문이다(30, 31). 따라서, 치커리에 의한 혈청 TG 농도의 저하기작을 밝혀내기 위하여 PAP 활성에 대한 치커리의 영향을검토하였다.Fig.
- 현저한 저지혈증을 나타내는 가족성 무 I卜리포단백혈증(abetalipoproteinemia)의 환자에서 MTP가 유전적으로 결원되어 있는 것이 해명되어 큰 주목을 받게 되었다(21, £33). 치커리 섭취에 의한 혈청 TG 농도의 저하에 대한 대사기작을 해명할 목적으로, MTP 활성에 대하여 검토하였다. MTP 활성은 대조군에 비하여 치커리군에서 현저하게 억제되었다즉, 간장 MTP 활성과 힐청 중성지질 농도의 사이에 높은정의 상관관계3고0.
제안 방법
- 5 M Ci[14C] trioleic acid 및 0.1% butylated hydroxytohiene을 함유한 donor-vesicle 용액과。175 nM egg phosph드tadylcholine, 0.875 nM trioleic acid, 8, 80 nM cardiolipin 및 01% butylated hydroxy toluene^ 함유한 acceptor-vesicle 용엑을 30분 이상 초음파 처리하여 liposome parUcle를 조제하였다 15 mM Tris-HCKpH 7.0), 35 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0.02% NaNs 및 0.05% bovine serum albumin을 함유한 반응액중에 donor 및 acceptor vesicle# 각각 첨가한 후, micro some 효소액(50 昭 단백질)을 첨가한 후 37°C에서 1시간 반응시 켰디..
- 간장을 일정 량 취 해 10 mM Tns-1-ICKpI-I 7.4), 10 mM ethylenedi amiiietetra-acetic acid(EDTA) 및 250 mM su- crose를 함유한 균질용액을 4배량 첨가하여 균질화하였다(19). 균질화한 묭액을 냉각원심분리기任Cubota, KR- 20, 000 T.
- 본 실험의 식이조성은 Table 1에 나타낸 것과 같이, chicory를 첨가하지 않은 데조군, 볶음처리한 chicory를 5% 수준에서 첨가한 roastcd-chicor\, 첨가군, 볶음처리하지 않는 치커리를 5% 수준에서 첨가한 unroasted- chicory군으로 군당 G마리씩 나누어 물(탈이온수)과 함께 14일간 자유급여시켰다.
- 스테인레스 개별 케이지에 1마리씩 넣어 사육실 온도는 22±2°C, 습도 50士5%, 명암주기 12시 간(명주기 : 07 : 00~19 : 00)이 자동설정된 동물 사육실에서 사육하였다. 사육기간중 식이 섭취량은 매일 측정하고 체중은 이틀에 한 번씩 측정하였다.
- 반음 후 DEAE-cellulose/반음액 (1:1) 혼합용엑을 가하여 효소 반응을 정지시키고, 충분히 교반하여 3, 000 rpm 애서 10분간 원심 분리한 후. 상층의 일부를 취해 scintillation용익을 가한 후 잘 흔합하여 액체 scintilla tion coLintertWallic system 1410, Pharmacia, Uppsala, Sweden)에서 방사성 활성을 측정하였다. MTP 활성은 donor vesicla로부터 acceptor vesicle에 이동된 ["Cl trioleic acid 의 dpm을 상데치로!:%)로 하여 나다내었다
- 스테인레스 개별 케이지에 1마리씩 넣어 사육실 온도는 22±2°C, 습도 50士5%, 명암주기 12시 간(명주기 : 07 : 00~19 : 00)이 자동설정된 동물 사육실에서 사육하였다. 사육기간중 식이 섭취량은 매일 측정하고 체중은 이틀에 한 번씩 측정하였다.
- 혈액은 약 30훈간 정치한 후, 3, 000 rpm에서 15분간 원심분리하여 혈청(serum)을 분리하여 지짐분석에 사용하였다. 장기는 적출한 후 냉각의 생리 식염수로 충분히 세척하고 물기를 제거한 다음 장기무게를 측정하였다
- 치커리 물추출물은 실험동물의 지짐대사에 영향을 미치는 것으로 알려져 있으나, 이러한 영향에 대한 대사기작은 명확하게 밝혀져 있지 않디、볶음처리한 치커리(加- asted-chicory) 또는 볶음처리하지 많은 치커리(unroa- $ted-chicory)로부터 물추출한 치 커 리 추출물을 5% 수준으로 식 이 에 첨가하여 SEE] 수컷흰쥐 에 2주간 자유 섭취시켜 혈청 및 간장의 지질 농도와 간장 MTP(microsomal triglyceride transfer protein) 활성 에 미치는 영향을 조사하였다. 체중 증가량, 장기 중량 및 ■시이 섭취량은 각 군간의 유의적 차이는 인정되지 않있-다.
- , Tokyo, Japan)의 시판 kit를 이용한 ACS-ACOD법 에 의하여 측정하였다. 혈당은 glucose oxidase빔에 따라 조제된 시환 kit를 이용하여 효소법으로 측정하였다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용된 치커리 뿌리(CimorSm intybus L. varsM/uus)는 충청북도 청원군 남이면에서 1997년 11월 하순에 수확한 것을 이용하였다. 치커리를 불로 세척하여 2X3X0.
- 시험돔물은 무게가 90 g 이상인 4주령의 Sprague- Dawley계 수컷 쥐 (Kgdo, Tosu, Japan)를 구입 하여 사용하였다. 스테인레스 개별 케이지에 1마리씩 넣어 사육실 온도는 22±2°C, 습도 50士5%, 명암주기 12시 간(명주기 : 07 : 00~19 : 00)이 자동설정된 동물 사육실에서 사육하였다.
- 추출액은 가아제로 여과시킨 다음 용액을 에서 10분간 원심 분리 하여 침전물은 버리고, 상등액을 약 30°Bx로 진공농축시킨 다음 진공 동결건조기로 건쏘시켰다. 이렇게 하여 얻어진 분말 (76%수율)을 각각 볶음처 리 한 치 커리 (roasted-chicory) 와 볶음처리하지 않은 치커리 (unroasted-chicory)로하여 실험지료로 이용하였다.
데이터처리
- 실험결과는 일원 刘치분산분석을 실시하여 유의차(p< 0 05) 검 정 은 Duncan's new multiple-range tesl의 방법 (22)을 사용하였다.
이론/모형
- MTP의 홸성은 Wetterau 등의 방법 (21)에 의하여 측성 하였다. 즉, 0.
- PAP 활성은 Walton과 Possmayer의 방법 (20)에 준하여 측정하였다. 즉, 0.
- Triglyceride량은 Fletcher의 방법(16)으로, phospho- lipid 농도의 분석은 Bartlelt으] 방법 (17)으로 정량하였고, total-cholesterol 농도는 SpeiTy오} Webb의 방법(18)으로 정량하였디-.
- 헐 청 총콜레스테롤은 cholesterol C-test wako를 이용하여 cholesterol oxidase~DAOS냅으로 측정하였고, 헐청 HDL-cholesteroI HDL-cholestero] E-test wako의 효소발생법에 의한 시판 kit(Wako Junyaku, Osaka, Ja pan) 로 측정하볐다. 혈청 중성지질은 triglyceride E-test wako를 이묭하여 GFO-DAOS법에 의하여 축정하였고, 혈청 인지질은 phospholipid C-test wako를 이용한 choline oxidase-DAOA법에 의한 효소 발생법으로 측정하였다.
- 혈청 중성지질은 triglyceride E-test wako를 이묭하여 GFO-DAOS법에 의하여 축정하였고, 혈청 인지질은 phospholipid C-test wako를 이용한 choline oxidase-DAOA법에 의한 효소 발생법으로 측정하였다. 혈청 유리지방산은 NEFA zaimu-S(Eiken Ind., Tokyo, Japan)의 시판 kit를 이용한 ACS-ACOD법 에 의하여 측정하였다. 혈당은 glucose oxidase빔에 따라 조제된 시환 kit를 이용하여 효소법으로 측정하였다.
- 로 측정하볐다. 혈청 중성지질은 triglyceride E-test wako를 이묭하여 GFO-DAOS법에 의하여 축정하였고, 혈청 인지질은 phospholipid C-test wako를 이용한 choline oxidase-DAOA법에 의한 효소 발생법으로 측정하였다. 혈청 유리지방산은 NEFA zaimu-S(Eiken Ind.
성능/효과
- 깐장에서 중성 지짚 합성의 조절효소로 알려진 PAP(phosphatidate phosphohydrolase) 활성 은 각 실험군간의 유의적 차이는 없었디-. 二러나, 중성지질-rich 리포단백질의 합성 , 분비 에 필수적 인 간장 MTF 활성은 대조군에 비교하여 치커리군에서 현저하게 저해되었다 간장 MTP 활성 과 혈 청 중성 지 짐 농도의 사이 에 높은 징 의상관 관계(r=0.81)가 인정되어, 본 실험에서 치커리 뿌리 추출물에 의한 혈청 중성지질 억제효과는 간장 MTP 1- 성의 저해에 기인하는 것으로 시사되었다
- 간장의 TG 농도는 치커리 섭취 에 의한 현저한 영향은 없었으나, 볶음처리를 하지 않은 치커리군에서 다소 증가하는 경향을 나타내었다 (Tabled). 혈청중의 TG 농도는 간장에서의 TG 합성 및 분비량에 의하여 크게 반영되는 것으로 생각된다.
- 최근, 허혈성 심질환의 발증 위험인자의 하나로서 고중성지혈증과 저 HDL-콜레스테롤 혈증이 주목받게 되어 유럽과 미국에서 이들에 대한 새로운 임상지침이 설정되었다(12, 13). 따라서 본 실험의 결과에서 보여준치커리 섭취에 의한 혈중 TG 몽도의 감소 및 HDL-콜레스테롤 농도의 상승은 동맥경화와 같은 혈관계 질환의 치료와 예방에 유书한 생체조절의 기능성 성분으로 사료된다. 또한 치커리 inulin 및 치커리 fructooligo- saccharide의 섭취에 의해 동맥경화성 심혈관질환, 비만, 인슐린 비의존성 당뇨병의 위험 인자를 감소시킨 생리 학적효과가 보고X2, 9, 24)되 어 그 유효성 이 더욱 시사된다.
- . 따라서, 본 실험에서는 치커리 물추출물의 횐쥐에서 지질 농도 및 지질 대사에 미치는 영향을 검토하가 위하여 치커리를 볶음 처리한 것 (roasted-chicory) 고卜 볶음처 리하지 않은 것 (unroast点- chicory)으로부터 추출한 물추출물을 5% 수준으로 식이에 첨가한 결고卜, 치커리 뿌리의 물추출물은 혈청 중성지질 저 하작용 및 HDL-cholesterol 상승작용을 가지고 있는 것으로 확인되어 그. 결과를 旦고하고자 한디-.
- 二L 터나 혈청 콜레스테롤 농도에 미치는 영향은 일치하지 않고 있다(7, 23, 24). 본실험의 결과에서도치커리 첨가에 의한 헐청 콜레스테롤 농도의 감소효과는 관찰되 지 않았다. HDL-콜레스테롤 농도는 치커리 첨가군에서 증가하는 경향을 나타내었으며, 특히 븎음처리하지 않은 치커리군메서 더욱 즘가하였는데 이는 싵험군간에 유의적인 차이롤 보이지 않았匸HTable3).
- Tokunaga 등(23)도 fructooligcsaccharide를 정상 쥐에 섭취시켰을 떼, 혈청 TG농도는 유의적으로 감소하였으나, 혈청 콜레스테롤 놈도의 변화는 없었다고 보고하였다. 이러한 결과로 볼 때 치커리 추출물에는 혈청 TG 농도를 저하시키는 작용이 있는 것으로 사료된다. 二L 터나 혈청 콜레스테롤 농도에 미치는 영향은 일치하지 않고 있다(7, 23, 24).
- 것이다. 이상의 결과에서 치커리 물추출물은 혈중의 TG농도를 저하시켰으며, 이는 간장 MTP 활성의 저해를 매개로 한 혈중에의 VLDL-TG 분비 억제에 기인하는 것으로 시사되었다. 叫라서.
- 실험기 간 14일 후 체중. 장기 중량 및 식 이 섭 취 량은 각 실험군간의 유의적 차이는 인정되지 않았으나, 심장무게는 치커리 군에서 증가하는 경향을 나타내었다.
- 혈청 tnglyceride(TG) 농도는 대조군에 비교해서 치커리 첨가군에서 유의적으로 감소하였으며, 볶음처리하지 삲는 치 커 리 군에서 더 욱 감소하는 경 향을 나타내 었디-. Lc- v-raL 등⑺은 치커리로부터 분리한 im価n을 섭취시킨 Wistar게 수컷 쥐 에서 혈청 TG농도는 2。% 첨가식 이 에서 만 유의적으로 감소하였으나, 혈청 콜레스테롤 농도는 5% 첨가식이에서부터 농도 의존적으로 감소하였다고 보고하였다.
- 혈당치는 대조군과 볶음 처리한 치커리군에 비교해서 볶음처리하지 많은 치커리군에서 증가하는 깅향을 나타내었다. 혈청의 TG 농도는 치커리 첨가군에서 감소하는 경향으로 나타났으며, 혈청 총 콜레스테롤, 인지질 및 유리지방산 농도와 간장 지짐농도는 실험군간의 유의적 차미는 없었으나, HDL- 콜레스테롤 농도는 치커리 첨가군에서 증가하는 경향을 보였디-. 깐장에서 중성 지짚 합성의 조절효소로 알려진 PAP(phosphatidate phosphohydrolase) 활성 은 각 실험군간의 유의적 차이는 없었디-.
후속연구
- 이러한 고중성지혈증 및 저 HDL-choIesterol 혈증에 관련된 혈관계 질환의 치료에 약물이나 의료에 의한 인위 적 치 료보다는 식 생 활의 조절 또는 식이성분에 의한 질병의 예방과 개선에 많은 관심이 고조되꼬 있다. 따라서, 우리가 일상적으로 섭취하고 있는 식품중에 이러한 유효성분이 존재한다면 동맥경화증 같은 질환의 예방과 개선에 도움이 될 것으로 생각된디..
- 본 실험에서 밝혀진 MTF 활성의 억제는 치커리 뿌리에 서 추출한 추출물중의 inulin 또는 fructooligosaccha ride 등메 의한 것인지 또는 다른 성분에 의한 작용인지에 대해서는 앞으로의 실험에서 이들 성분들에 의한 MTP 활성에 미치는 영향에 대해서 검토가 있어야 할 것이다. 이상의 결과에서 치커리 물추출물은 혈중의 TG농도를 저하시켰으며, 이는 간장 MTP 활성의 저해를 매개로 한 혈중에의 VLDL-TG 분비 억제에 기인하는 것으로 시사되었다.
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